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文档简介

一实验项目蛋白质的盐析与透析凝胶过滤法分离Hb与核黄素（一）蛋白质的盐析与透析盐析实验原理:

在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。蛋白质溶液为亲水溶胶体系，其稳定因素：水化膜和电荷。加入大量中性盐后，夺走了水分子，破坏了水膜，暴露出疏水区域，同时又中和了电荷，破坏了亲水溶胶，蛋白质分子即形成沉淀。蛋白质的盐析与透析-原理蛋白质的盐析与透析-原理不同的蛋白质分子，由于其分子表面的极性基团的种类、数目以及排布的不同，其水化层厚度不同，故盐析所需要的盐浓度也不一样，因此调节蛋白质的中盐浓度，可以使不同的蛋白质分别沉淀。蛋白质的盐析与透析-实验操作盐析

血清1ml

逐渐加入饱和(NH4)2SO4

溶液１ml，边加边搅拌。

离心

３０００rpm10分钟

上清沉淀（球蛋白）

逐渐加入固体(NH4)2SO4

１％HCl1-2滴离心５分钟沉淀（清蛋白）透析实验原理:

蛋白质是大分子物质，它不能透过透析膜，而小分子物质（无机盐、单糖等）可以自由通过透析膜与周围的缓冲溶液进行溶质交换，进入到透析液中。在实验室分离纯化蛋白质的过程中，常利用透析的方法除去蛋白质溶液中的小分子物质。按照分子大小进行分离。分离取决于透析袋截留分子量。蛋白质的盐析与透析-实验操作透析１．制备透析袋２．装样：取透析袋，将一端固定，由开口端加入含有硫酸铵的蛋白沉淀。３．透析：取10倍以上蛋白质体积的去离子水，将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部。更换洗脱溶液数次（约30min一次），至达到透析平衡为止。４．检查：（按教材步骤操作）检查洗出液中是否有NH4＋；２支试管蛋白检测：３支试管又叫分子筛层析，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开。

物质进入凝胶柱之后有两种运动方式,垂直向下移动和无定向的扩散运动。大分子物质直径大,无法进入凝胶颗粒内，只能分

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