黄瓜内生细菌的分离与鉴定

黄瓜内生细菌的分离与鉴定

内细菌是指在给定时期内未发现明显疾病症状的细菌。生物多样性。目前在农作物、果树等经济作物中发现的内生细菌已超过129种(属于54个属),不同地理环境、气候条件、生境、品种以及同一植物不同组织的内生细菌组成都有很大差别黄瓜广泛分布于世界各地,是重要的蔬菜。在黄瓜生育期中受多种病原菌危害,如菌核病、病毒病、霜霉病等,给黄瓜生产带来巨大损失。而目前对黄瓜病害的防治主要是传统方法,这既降低了黄瓜品质,又污染了环境。内生细菌能提高寄主的抗逆性,并能拮抗病原生物。笔者对黄瓜幼苗及种子内生细菌进行分离,探究其生物多样性及消长动态,为今后研究黄瓜内生细菌,寻找生物拮抗因子奠定基础。1材料和方法1.1材料表面1.1.1试验对象：黄瓜品种1.1.2酵母汁和酵母汁饮料营养琼脂培养基(NA)牛肉浸膏3.0g,蛋白胨5.0g,酵母浸膏1.0g,琼脂15.0g,用蒸馏水定容至1000ml,pH6.8～7.0。1.1.3试验中的植物材料选择饱满、健壮黄瓜种子,盆栽幼苗,生长3d,子叶完全伸展,未见真叶。1.2方法1.2.1根、茎、叶片组织制备黄瓜种子经流水冲洗2h,70%酒精浸5min后,分别用0.9%次氯酸钙、0.1%HgCl根、茎、叶柄、叶片等组织流水冲洗后,70%酒精浸30～60s,用0.9%次氯酸钙、0.1%HgCl1.2.2研磨法培养pda取经检验表面灭菌彻底的材料1g于无菌研钵中,加已灭菌的PBS缓冲液10ml研磨,将上清液倍比稀释,取0.1ml涂布于NA(PDA)平板,重复3次,置于26～28℃恒温箱中培养3～5d后,计数。挑取不同形态菌落,平板划线纯化、镜检、斜面低温保存。1.2.3初步测定内细菌分离细菌菌株的鉴定主要参照《一般细菌常用鉴定方法》2结果与分析2.1消毒效果评价结果试验表明,0.1%HgCl2.4不同品种生细菌优势种群分析表3表明,不同品种黄瓜幼苗内生细菌优势种群结构相同,但数量不同,其中长城1号黄瓜幼苗组织中内生细菌数量最多为5.37×103内生细菌种群鉴定在内生细菌的分离过程中,表面灭菌是关键步骤,既要彻底杀死材料表面杂菌,又不伤害材料内部细菌,过轻过重都会影响植物内生细菌调查的准确性依据分离种类、纯化难易程度,黄瓜组织研磨液浓度以10植物体内内生细菌的种群数量主要取决于植物种类、基因型、组织、生育期和外界环境条件等因素。内生细菌在宿主植物体内大量存在,在群落和种群水平上与宿主均存在着互作,特别是一些优势菌株对宿主的影响更大,因此在研究内生细菌与宿主植物互作前,应对内生细菌进行系统鉴定。该研究中内生细菌种类众多,由于试验条件限制,未能对这些菌株进行系统鉴定,只对分离到的内生细菌鉴定到属,所以尚有待于进一步研究黄瓜中存在的内生细菌种群结构和分布规律,为进一步筛选拮抗黄瓜病害病原物的内生细菌提供必要的基础。长城1号,津春5号,津优41号,津优10号,神农春四。2.2不同组织中内生细菌的分离情况表1表明,黄瓜组织研磨液不同浓度下分离的内生细菌菌株数量之间存在差异。在10黄瓜不同组织中分离到的内生细菌数量不同,其中根内分离到的内生细菌数量最多,其次为茎,再次为子叶,种子中最少。黄瓜组织内由于内环境的差别造成内生细菌的种群和数量稍有差别,因此分离出的内生细菌数量有所不同。2.3黄瓜内生细菌优势种群分析从黄瓜种子、幼苗中分离内生细菌,根据细菌菌落形态和颜色特征,共纯化出79株内生细菌。然后,根据细菌在NA平板上的菌落形态颜色、形状、大小、突起特征、边缘特征、表面光滑与否、透明度和生理