第五章黄酮类化合物课件

天然药物化学天然药化教研室

第五章黄酮类化合物

（Flavonoids）1天然药物化学第五章黄酮类化合物

第三节提取与分离一、提取与粗分

苷元：用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取。苷及极性大的苷元：用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取。提取黄酮苷类成分时，应避免发生水解，可按一般苷的提取方法先破坏酶的活性。(1)溶剂萃取法（系统分离法）-极性(2)碱提取酸沉淀法-酸性(3)炭粉吸附法

2第三节提取与分离一、提取与粗分苷元：用氯仿、乙醚、乙酸第三节提取与分离一、提取与粗分（一）溶剂萃取法——利用化合物的极性药材水或醇-水，加热提取提取液浓缩，加3~4倍量醇（水提醇沉法）醇水液沉淀（水杂）浓缩，回收醇，加水混悬水混悬液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚层(叶绿素胡萝卜素脂溶性成分)氯仿层(黄酮苷元)乙酸乙酯层(极性大苷元极性小的苷)正丁醇层(黄酮苷)水层(多糖蛋白质)（系统溶剂萃取）3第三节提取与分离一、提取与粗分（一）溶剂萃取法——利用在60-70℃下用浓盐酸调至pH3-4，静置1hr，抽滤第三节提取与分离一、提取与粗分（二）碱提取酸沉淀法——利用化合物的酸性

原理：黄酮＋碱成盐（溶于水）沉淀加酸槐花米粗粉加水，搅拌下加入石灰乳至pH8-9，微沸30min，趁热抽滤残渣滤液滤液沉淀（粗制芦丁）芦丁4在60-70℃下用浓盐酸调至pH3-4，静置1hr，抽滤第三第三节提取与分离一、提取与粗分（二）碱提取酸沉淀法——利用化合物的酸性

碱：Ca(OH)2水溶液、Na2CO3水溶液或稀NaOH溶液

（即石灰乳或石灰水）

使含酚羟基化合物成盐溶解

使含COOH的果胶、粘液质、蛋白质等杂质形成沉淀而除去提取时，碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核；酸化时，酸性不宜过强，以免形成盐而溶解。5第三节提取与分离一、提取与粗分（二）碱提取酸沉淀法——第三节提取与分离一、提取与粗分（三）炭粉吸附法——主要用于黄酮苷的精制药材甲醇提取物分次加入活性炭，搅拌，静置，直至上清液无黄酮反应，过滤吸苷炭末滤液依次用沸水、沸甲醇、7%苯酚/水、15%酚/醇溶液进行洗脱沸水洗脱液沸甲醇洗脱液7%苯酚/水洗脱液15%酚/醇洗脱液浓缩，加乙醚萃取

乙醚层（酚）水层（黄酮苷）6第三节提取与分离一、提取与粗分（三）炭粉吸附法——主要第三节提取与分离二、分离化合物的性质极性

——

硅胶酸性

——

pH梯度萃取、离子交换树脂形成氢键的能力——

聚酰胺

分子大小

——

葡聚糖凝胶

特殊结构——

金属盐络合（如邻二酚羟基）

7第三节提取与分离二、分离化合物的性质极性——硅胶酸性第三节提取与分离二、分离（一）柱色谱法1、硅胶柱色谱主要用于分离弱极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。吸附规律：极性大的物质易于被吸附一般洗脱顺序：苷元＞单糖苷＞双糖苷＞多糖苷8第三节提取与分离二、分离（一）柱色谱法1、硅胶柱色谱主第三节提取与分离二、分离2、聚酰胺柱色谱吸附原理：氢键缔合洗脱顺序规律：（先→后）（1）苷元相同，三糖苷＞双糖苷＞单糖苷＞苷元（2）母核上羟基增加，洗脱速度减慢（3）羟基数目相同，有缔合羟基＞无缔合羟基（4）不同类型黄酮化合物，异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇

（5）分子中芳香核、共轭双键多则易被吸附，故查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。

9第三节提取与分离二、分离2、聚酰胺柱色谱吸附原理：氢键用醇水系统时相当于反相色谱：RfＣ>Ｂ>Ａ,符合前述规律用氯仿甲醇系统相当于正相色谱：RfＡ>Ｂ>Ｃ“双重色谱”（了解）如：A苷元B单糖苷C二糖苷10用醇水系统时相当于反相色谱：RfＣ>Ｂ>Ａ,符合前述规下列黄酮化合物：（1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，（2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别写出洗脱顺序D练习：ABCE聚酰胺：D>E>C>B>A硅胶：A>B>C>D>E11下列黄酮化合物：D练习：ABCE聚酰胺：D>E>C第三节提取与分离二、分离3、葡聚糖凝胶柱色谱常用型号：SephadexLH-20分离原理：黄酮苷——分子筛，按分子量由大到小的顺序流出柱体。黄酮苷元——吸附作用，取决于游离酚羟基的数目（与位置无关），苷元的羟基数越多,越难洗脱。问题:黄酮苷与游离黄酮的洗脱顺序？12第三节提取与分离二、分离3、葡聚糖凝胶柱色谱常用型号：第三节提取与分离二、分离黄酮类化合物在SephadexLH-20(甲醇)上的Ve/V0黄酮类化合物取代图式Ve/V0芹菜素5,7,4'-三羟基5.3木樨草素5,7,3',4'-四羟基6.3槲皮素3,5,7,3',4'-五羟基8.3杨梅素3,5,7,3',4',5'-六羟基9.2山奈酚-3-半乳鼠李糖-7-鼠李糖苷三糖苷3.3槲皮素-3-芸香糖苷双糖苷4.0槲皮素-3-鼠李糖苷单糖苷4.9苷元的羟基数越多，越难以洗脱；苷的分子量越大，连接糖的数目越多，越容易洗脱。13第三节提取与分离二、分离黄酮类化合物在Sephadex第三节提取与分离二、分离3、葡聚糖凝胶柱色谱常用洗脱剂：（1）醇或含水醇，如甲醇、甲醇-水、乙醇等。（2）其它溶剂：如丙酮-水、氯仿-甲醇等。进行洗脱剂更换时，要注意不同溶剂对填料的溶胀度差别不能过大。14第三节提取与分离二、分离3、葡聚糖凝胶柱色谱常用洗脱剂7,4'-二OH＞7-或4'-OH＞一般酚OH＞5-OH第三节提取与分离二、分离（二）梯度pH萃取法适于分离酸性强弱不同的黄酮苷元酸性：溶于NaHCO3中溶于Na2CO3中溶于不同浓度NaOH中157,4'-二OH＞7-或4'-OH＞一般酚O第三节提取与分离二、分离（二）梯度pH萃取法样品乙醚液5%NaHCO3碱液（7,4'-二羟基黄酮）乙醚液5%Na2CO3碱液（7或4'-羟基黄酮）乙醚液0.2%NaOH碱液（一般羟基黄酮）乙醚液4%NaOH碱液（仅含3-OH或5-OH黄酮）乙醚液（脂杂