气相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中16种多环芳烃化合物

气相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中16种多环芳烃化合物

蜂窝产品是具有完整营养功能的天然出版物。它不仅具有调节身体生理的功能，提高战斗力和身体强度的功能，还可以作为中药的辅助治疗和辅助治疗，以实现人体的长寿。我国是世界第一养蜂大国,也是蜂蜜出口大国。然而,自加入WTO后,美国、日本和欧洲作为我国蜂产品的主要出口地区纷纷提出蜂产品中农药、兽药和化学污染物残留限量标准,采取各种技术性贸易措施,致使我国蜂产品出口受到一定程度的限制多环芳烃(PAHs)是指由两个或两个以上苯环以线状、角状或簇状排列的化合物,广泛分布于天然环境中,具有较强的致癌、致畸、致突变性。目前,大多数国家都将PAHs列为环境监测的重要内容之一本文采用固相萃取(SPE)结合气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)法,建立了蜂蜜中16种PAHs的分析方法,该方法具有操作简便,灵敏度高,准确可靠的优点。1实验部分1.1仪器、试药和仪器美国ThermoFisher公司的TSQ8000型气相色谱-串联质谱,配备有TRACE1310气相色谱仪,AgilentDB-1701色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm);日本YAMATO公司SA300型振荡器;美国Organomation公司的N-EVAPTM112型氮吹仪;日本岛津公司生产的TXB622L电子天平;瑞士MettlerToledo公司的XP105分析天平;美国Millipore公司的Milo-Q高纯水发生器;美国ScientificIndustriesVortexGenie2多用途旋涡混合器。1.2pahs同位素测定16种PAHs标准品(纯度均≥96.0%,美国SUPELCO公司,详见表1);准确称取各标准品适量,用甲苯稀释成单标储备液;准确吸取适量各标准储备液于10ml容量瓶中,用甲苯定容至刻度制成工作液混标,其中各PAHs浓度均为2.0mg/l,置于冰箱4℃保存。16种PAHs同位素标准品(PAHs-D,纯度均≥98.0%,美国ChemService公司),配制及保存同上,工作液中各PAHs-D浓度均为2.0mg/l。丙酮、正己烷、环己烷、乙酸乙酯、甲苯等试剂均为HPLC级,C1.3pahs-d内标溶液准确称取5.0g(精确到0.01g)蜂蜜样品于80ml具塞玻璃离心管中,加入PAHs-D内标50μl。加入50ml去离子水溶解,涡旋混匀之后,震荡30min。混匀后上样至C1.4标准曲线及质谱条件气相色谱条件:进样口温度290℃,载气为高纯He(纯度>99.999%),流速为1.5ml/min;进样量1μl,不分流进样;程序升温:50℃保持1min,以30℃/min升温至140℃,然后以10℃/min升温至220℃,接着以5℃/min升温至290℃,保持5min。质谱条件:EI源,温度280℃;传输线温度280℃;扫描方式为选择离子反应监测模式(SRM)。16PAHs及内标的定量离子对、定性离子和碰撞能量等信息见表1。2结果与讨论2.1多环芳烃合成在选定的实验条件下,首先通过全扫描方式(FullScan,m/z50-550)获得16种多环芳烃的保留时间和一级质谱图,从其中选择丰度较高和质荷比较大的离子作为母离子;在不同碰撞能量下进行二级质谱扫描,从二级质谱图中选择子离子及对应碰撞能量,从而获得特征离子对。2.2样品溶液和改性剂用量对样品pahs和回收率的影响根据多环芳烃化合物的性质,选择C进一步选取某空白洋槐蜜样品,向其中添加浓度为20μg/kg的PAHs混标,制成阳性样品,并用其对体系pH值、改性剂用量和淋洗剂用量等实验条件进行考察。样品溶于水后将其pH值分别调节为3.0、4.0、5.0、6.0和7.0,按照上述步骤进行SPE上样、淋洗、洗脱、浓缩和检测。结果表明,在测试范围内蜂蜜样品pH对实验结果无明显影响。由于大多数蜂蜜样品pH值在3.92~5.03之间样品溶于水后分别加入适量改性剂甲醇,含量分别为0、1%、2%、5%和10%,进行SPE处理和检测。实验结果表明甲醇小于5%时,对PAHs检测无明显影响,而当其含量增加至10%时,目标物回收率略微降低,因而实验确定不加甲醇。样品溶于水后上样进行SPE富集,然后分别加入不同含量的去离子水进行淋洗,加入量分别为0、5、10、20、30、50ml,然后抽干、洗脱和检测,结果表明,淋洗剂用量不超过30ml时,目标物响应无明显影响,但其含量达到50ml时,目标物响应略有降低,因而实验选择淋洗剂用量为30ml。2.3方法评估2.3.1线性及线性回归方程取适量PAHs工作液混标,加入内标50μl,用正己烷稀释配置成浓度为10、20、50、100、200、500的系列标准溶液(对应样品浓度为2.0~100μg/kg),以目标物与对应内标峰面积之比(Y)为纵坐标,以目标物浓度(X)为横坐标,绘制工作曲线,得到16种PAHs的线性范围、线性回归方程以及相关系数(表2)。结果表明,16种PAHs的线性相关系数(r2)均不低于0.995,表明线性关系良好。以3倍信噪比(3S/N)对应浓度为方法检出限,10倍信噪比(10S/N)对应浓度为方法定量限,得到该方法对16种多环芳烃的检出限为0.6μg/kg,定量限为2.0μg/kg。2.3.2加标回收率和精密度试验选取枣花蜜、荆条花蜜、洋槐蜜、紫云英蜜和椴树蜜为代表性样品基质,在2.0μg/kg,4.0μg/kg和20μg/kg三个添加水平下,按照上述流程进行处理和测定(n=3),得到回收率和精密度数据见表3。结果表明,16种PAHs平均回收率在63.4~122.1%之间,相对标准偏差均小于16%,能够满足日常检测的要求。2.3.3蜜内pahs来源应用本文建立的方法对市售10批蜂蜜样品进行检测,样品类型包括枣花蜜、洋槐蜜、油菜蜜、椴树蜜、荆条蜜、紫云英蜜等,其中7个蜂蜜样品有检出,检出PAHs以萘、苊、菲等小分子多环芳烃为主,具