免疫标记技术专家讲座

简介

免疫标识技术(immunolabelingtechnique)是指用荧光素、酶、放射性同位素等反抗体或抗原进行标识，然后再经过检测标识物来观察抗原抗体反应试验技术。

优点：特异、敏度和快速；

可定性、定量和定位免疫标记技术专家讲座第1页分类免疫标识技术

放射免疫技术免疫酶技术免疫荧光技术

免疫金标识技术免疫标记技术专家讲座第2页放射免疫技术

放射免疫技术为一个将放射性同位素测量高度灵敏性和抗原抗体反应高度特异性相结合，在体外测定超微量物质一项技术惯用放射性同位素有：125I、3H、14C、35S、32P三种方法：基于竞争性结合反应放射免疫分析(RIA)非竞争性结合免疫放射分析(IRMA)放射受体分析技术（RRA）免疫标记技术专家讲座第3页放射免疫技术放射免疫技术含有灵敏度高、特异性强、精密度好优点，惯用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药品等微量物质测定，但含有放射污染缺点。免疫标记技术专家讲座第4页免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应特异性与酶高效催化作用有机结合一个方法。惯用酶：辣根过氧化物酶(HRP)碱性磷酸酶(AP)特点：-灵敏度高、特异性强、准确性好、试剂稳定和简易安全等优点。免疫标记技术专家讲座第5页免疫酶技术酶联免疫吸附技术酶免疫组化技术双抗体夹心法双抗原夹心法间接法双位点一步法分类竞争法免疫标记技术专家讲座第6页免疫荧光技术免疫荧光技术是用荧光标识抗体或抗原与样品(细胞、组织或分离物质等)中对应抗原或抗体结合，以适当检测荧光技术对其进行分析方法惯用于标识荧光素有：异硫氰酸（FITC）、罗丹明（RB200）惯用方法有直接法和间接法两种免疫标记技术专家讲座第7页

直接荧光法：把荧光素标识抗体与待检标本（细胞悬液、细胞涂片或组织切片）相互作用，洗去未结合荧光标识抗体，在荧光显微镜下观察，有荧光部分为阳性。。

免疫荧光技术免疫标记技术专家讲座第8页

间接荧光法：将特异性抗体（一抗）和待检标本（细胞悬液、细胞涂片或组织切片）相互作用后加入荧光素标识一抗抗体（二抗）显示结果。

免疫荧光技术

免疫标记技术专家讲座第9页试验一

酶联免疫吸附技术

---双抗体夹心法测定甲胎蛋白（AFP)免疫标记技术专家讲座第10页酶联免疫吸附技术

酶联免疫吸附技术(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)是一个集免疫学、生物化学及光学检测技术为一体测定方法。将抗原或者抗体固定化后，加入酶标抗体或抗原，形成抗原抗体复合物，再加入酶反应底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物量与标本中受检物质量直接相关，由此进行定性或定量分析。免疫标记技术专家讲座第11页EEEE双抗体夹心法【试验原理】免疫标记技术专家讲座第12页ELISA基本试验过程包被：将已知抗原或抗体经过物理吸附到固相载体表面，使抗原或抗体固相化抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶结合物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定酶促反应：在反应体系中加入酶作用底物，使发生酶促反应而显色免疫标记技术专家讲座第13页ELISA基本试验过程免疫标记技术专家讲座第14页【试验器材】1、AFP诊疗试剂盒2、AFP阳性对照品，阴性对照品，待检品3、微量加样器、温箱免疫标记技术专家讲座第15页【操作步骤】将包被孔编号，分别加入阳性对照、待测样品及阴性对照各50ul在各孔内加入酶结合物1滴，37℃温育30分钟甩掉孔内液体，然后在各孔中分别加入洗涤液1滴，摇匀，弃去，用蒸馏水或自来水加满各孔甩掉，重复5次，然后在吸水纸上吸干（倒扣在吸水纸上）各孔内加入底物和显色液各1滴，轻轻摇动混匀，室温避光反应2-5min，观察结果免疫标记技术专家讲座第16页【注意事项】

1、加样应加在加样孔底部，防止产生气泡，预防产生假阴性2、洗涤必须彻底，预防产生假阳性免疫标记技术专家讲座第17页【试验结果】若待检孔显色浅于或等于阴性对照孔则判定为若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照孔之间则判定为阴性阳性弱阳性免疫标记技术专家讲座第18页【临床意义】1、原发性肝癌大规模普查

2、能够用作检测胎儿畸形、畸胎瘤免疫标记技术专家讲座第19页试验二

免疫金标识技术免疫标记技术专家讲座第20页免疫金标识技术

免疫金标识技术(Immunogoldlabellingtechique)是将金颗粒标识抗原或抗体，用于检测对应抗体或抗原一个试验方法免疫标记技术专家讲座第21页免疫金标识技术该技术主要利用了金颗粒含有高电子密度特征，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标识物在对应配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量快速免疫检测方法中免疫标记技术专家讲座第22页【试验原理】胶体金标识鼠抗人α—hCG抗体抗人β—hCG抗体抗鼠IgG抗体hCG妊娠诊疗试纸免疫标记技术专家讲座第23页【试验原理】免疫标记技术专家讲座第24页【操作步骤】1.待测样品、检测试纸和其它检测材料等恢复到室温后检测2.将测试纸有箭头一端插入尿液标本容器中，5秒钟后取出平放，5分钟内观察结果

注意：测试纸插入尿液深度不可超出MAX标志线免疫标记技术