生物制药对生产厂房论文

生物制药对生产厂房论文海洋生物来源药物先导化合物的研究进展

【摘要】海洋生物中活性物质丰富，本篇文章对国内外近3年来从海洋生物中分离提取到的萜类化合物以及糖苷类化合物进行了归纳，并对其研究趋势进行了展望。这些新发现的萜类化合物广泛分布于海藻、珊瑚、海绵以及一些海洋真菌等海洋生物中，主要以单萜、倍半萜、二萜、三萜结构型式存在；而糖苷类化合物在海藻、海绵、海参、海星等海洋生物中发现大部分以糖苷脂、甾体糖苷、萜类糖苷型式存在。

【关键词】海洋生物萜类化合物糖苷类生物活性

【Abstract】Marineorganismshowsomeimportantbiologicalactivities.Thispaperreviewsterpenoidsandglycosidesfrommarineorganismathomeandabroadsince2005,andprovidesscientificevidenceforreasonableexploitationandapplication.Terpenoidsaremainlyoccurredonmarinealgae,coral,spongeandsomefungibymonoterpene,sesquiterpene,diterpeneandtriterpene.Andglycosideswithstructuresoflipid,steroidandterpenoidaredistributedtomarinealgae,sponge,seacucumberandstarfish.

【Keywords】Marineorganism;terpenoid;glycoside;bioactivity

海洋是生命之源，由于海洋环境的特殊性，具有高压、低营养、低温（特别是深海）、无光照以及局部高温、高盐等生命极限环境，海洋生物适应了海洋独特的生活环境，必然造就了海洋生物具有独特的代谢途径和遗传背景，必定也会有新的、在许多陆地生物中未曾发现过的新结构类型和特殊生物活性的化合物。

萜类物质是一类天然的烃类物质，其分子中具有异戊二烯(C5H8)的基本单位。故凡由异戊二烯衍生的化合物，其分子式符合(C5H8)n通式的均称萜类化合物(terpenoids)或异戊二烯类化合物（isopenoids）。但有些情况下，在分子合成过程中由于正碳离子引起的甲基迁移或碳架重排以及烷基化、降解等原因，分子的某一片断会不完全遵照异戊二烯规律产生出一些变形碳架，它们仍属于萜类化合物。海洋生物中萜类化合物主要以单萜、倍半萜、二萜、二倍半萜为主，三萜和四萜种类和数量都较少，且大部分以糖苷形式存在。萜类化合物是海洋生物活性物质的重要组成部分，广泛分布于海藻、珊瑚、海绵、软体动物等海洋生物中，具有细胞毒性、抗肿瘤活性、杀菌止痛等活性作用。

糖苷的分类有多种方法，按照在生物体内是原生的还是次生的可将其分为原生糖苷和次生糖苷（从原生糖苷中脱掉一个以上的苷称为次生苷或次级苷）；按照糖苷中含有的单糖基的个数可将糖苷分为单糖苷、双糖苷、三糖苷等；按照糖苷的某些特殊化学性质或生理活性可将糖苷分为皂苷、强心苷等；按照苷元化学结构类型可分为黄酮糖苷、蒽醌糖苷、生物碱糖苷、三萜糖苷等，海洋类的糖苷大部分是按照此特点分类的，主要包括鞘脂类糖苷、甾体糖苷、萜类糖苷和大环内酯糖苷等，在很多海洋生物如海藻、珊瑚、海参、海绵等中均发现有糖苷类化合物存在。已有的研究表明海洋糖苷类成分大都具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗菌、增强免疫力等生物活性。抗白血病和艾氏癌药物阿糖胞苷Ara-C(D-arabinosylcytosine)1、抗病毒药物的Ara-A2以及Ara-C的N4-C16-19饱和脂肪酰基化衍生物3是海洋糖苷类药物成功开发的典范〔1〕。

本篇文章对国内外自2005年来从海洋生物中分离提取到的萜类化合物以及糖苷类化合物进行了总结。

1萜类化合物

1.1单萜2005年M.G.Knott等人〔2〕对从红藻Plocamiumcorallorhiza中分离得到的三种多卤代单萜化合物plocoralidesA-C（1～3）〔3，4〕进行了活性研究，发现化合物PlocaralidesB（2），C（3）对食管癌细胞WHCOI具有中等强度的细胞毒作用，这些化合物具有卤素取代基。

1.2倍半萜从海泥来源的真菌EmericellavariecolorGF10的发酵液中分离得到两个新型的倍半萜化合物6-epi-ophiobolinG（4）和6-epi-ophiobolinN（5），化合物在1～3μM浓度时能使神经癌细胞Neuro2A凋亡，同时伴随细胞萎缩和染色体聚集〔5〕。这一类ophiobolins是天然的三环或四环的倍半萜化合物，对线虫、真菌、细菌以及肿瘤细胞有着普遍的抑制活性。

WillamFenical等人从海洋沉积物分离得到一株放线菌CNH-099，在该菌的代谢产物中分离到具有细胞毒作用的新颖的marinonc衍生物neomarinone（6）、isomarinone（7）、hydroxydebromomarinone（8）和methoxydeuromomarinonc（9），它们均是倍半萜萘醌类抗生素。Neomarinone（6）和marinones（7～9）对HCrll6结肠癌细胞显示中等程度的体外细胞毒作用(IC50=8μg/ml)，而且，neomarinone(6)对NCI-s60癌细胞也具有中等程度细胞毒作用（IC50=10μg/ml）〔6〕。

化合物花侧柏烯倍半萜（10～12）从希腊北爱情海希俄斯岛采集的红藻L.microcladia中分离得到〔7〕。红藻L.microcladia经有机溶剂CH2Cl2/MeOH(3:1)提取，以Cyclohexane/EtOAc（9:1）为洗脱液进行硅胶柱层析，最后经HPLC纯化得到化合物（10-12）。该试验并对化合物活性进行了研究，发现三种化合物均对肺癌细胞NSCLC-N6和A-549有抑制作用，化合物（10）：IC50=196.9μM(NSCLC-N6)和242.8μM(A-549)，化合物（11）：IC50=73.4μM(NSCLC-N6)和52.4μM(A-549)，化合物（12）：IC50=83.7μM(NSCLC-N6)和81.0μM(A-549)。后两个化合物对肺癌细胞毒活性作用明显高于第一个化合物，推测可能由于后两个化合物结构中酚羟基以及五环内双键的存在提高了化合物活性，而化合物中溴原子的存在并没有对其活性构成影响。从中国南京采集的红藻L.okamurai也分离出四种衍生的花侧柏烯倍半萜化合物，分别是Laureperoxide（13）,10-bromoisoaplysin（14）,isodebromolaurinterol（15）和10-hydroxyisolaurene（16）〔8〕。5种snyderane倍半萜（17～21）化合物从红藻L.luzonensis中分离得到〔9〕。

从一个软海绵种属Halichondriasp中分离得到四种具有抗微生物活性的含氮桉烷倍半萜化合物halichonadinsA-D（22～25）〔10〕。该海绵采集于日本冲绳运天港，2.5kg样品溶于4LMeOH，所得的115gMeOH提取物分别用1200mlEtOAc和400MlH2O萃取，7.9gEtOAc萃取物经硅胶柱层析后，洗脱液为MeOH/CHCl3（95:5）和石油醚/乙醚（9:1），得到化合物halichonadinsA-D（22～25）和已知化合物acanthenesB、C。活性检测实验显示：化合物halichonadinsA-D均具有抗细菌活性，同时halichonadinsB和C也具有抗真菌活性，化合物halichonadinsC对新型隐球菌（Cryptococcusneoformans）的半致死浓度（IC50）达到0.0625μg/ml。三个部分环化的倍半萜（26～28）化合物具有抑制磷酸酶Cdc25B活性，从海绵Thorectandrasp.中分离得到〔11〕。冷冻的海绵样品经4℃去离子水浸泡冷冻干燥后得到的干涸物，随后用MeOH/CH2Cl2（1:1）和MeOH/H2O（9:1）的有机溶剂提取获得粗提物。采用活性追踪的方式，对粗提物（IC50=8μg/ml）进一步分离，将其溶于100mlMeOH/H2O（9:1）有机溶剂中，得到1.2g的粗提物加入300ml正己烷，获得水相部分溶于MeOH/H2O（7:3）的溶剂中，再用300mlCH2Cl2提取得到的部分经活性测定显示对磷酸酯酶抑制活性最强（IC50=6μg/ml），之后采用反相C-18柱HPLC分离，得到部分环化的倍半萜化合物（26）16-oxo-luffariellolide（12mg,tR=18min），化合物（27）16-hydroxy-luffariellolide(2.5mg,tR=19min)以及化合物（28）luffariellolide(4.20mg,tR=38min)。五种属于倍半萜类的化合物hyrtiosinsA-E（29～33），从中国海南两个不同地方的海绵Hyrtioserecta种属中分离得到〔12〕。

氧化的倍半萜化合物gibberodione（34）,peroxygibberol（35）和sinugibberodiol（36）从台湾软珊瑚Sinulariagibberosa分离得到〔13〕，化合物（35）具有较温和的细胞毒性〔14〕。从珊瑚Euniceasp.中提取的七种倍半萜代谢产物（37～43）〔15〕，含有榄烷，桉烷和吉玛烷骨架结构，研究显示对Eunicea种属的疟原虫具有轻度的抑制作用。

1.3二萜以前很少有从绿藻中分离得到萜类化合物的报道，但是与2004年相比，提取的代谢产物数量有所增加〔16〕。从澳大利亚塔斯马尼亚采集的绿藻Caulerpabrownii中分离出许多新型二萜类化合物，其中化合物（44～48）在没有分支的绿藻中提取得到〔17〕，而类酯萜化合物（49）是从分支的绿藻中获得，该研究同时显示提取的类酯萜化合物对细胞、鱼类、微生物均有不同程度的毒性作用〔18〕。

日本KoyamaK等人从褐藻Ishigeokamurae来源的未知海洋真菌(MPUC046)中分离到一种新型的二萜类化合物phomactinH（50）〔19〕。真菌(MPUC046)经含150g小麦的400ml海水25℃发酵培养31天后，采用CHCl3溶剂提取、硅胶层析及HPLC纯化得到phomactinH。该化合物同已发现的phomactinA-G化合物一样，均属于血小板活化因子（PAF）拮抗剂，能抑制PAF诱导的血小板凝聚，同时推测此活性与化合物的某个特定骨架结构有关。

从法国南部大西洋海滨采集的褐藻Bifurcariabifurcata中分离得到（51～55）五种新型的极性非环状二萜类化合物〔20〕。该褐藻经CHCl3/MeOH（1:1）提取，硅胶层析（洗脱液为不同比例的Hexane，EtOAc，MeOH），经反相C-18柱HPLC纯化获得十二种化合物，其中五种为新型二萜类化合物。化合物（51～53）在Hexane:EtOAc（2:3）洗脱液中发现，而化合物（54）和（55）则从Hexane:EtOAc（1:4）洗脱液中获得。

6种新型的Dactylomelane二萜类化合物(56～61)从西班牙特纳里夫南部家那利群岛采集的红藻Laurencia中分离得到〔21〕，其结构具有C-6到C-11环化的单环碳新型结构。采集的红藻经CH2Cl2/MeOH(1:1)有机溶剂提取后，用洗脱液Hexane/CHCl3/MeOH(2:1:1)进行SephadexLH-20反相色谱分离，结合TLC点样筛选的部分用洗脱液EtOAc/hexane（1:4）进行硅胶柱层析，最后采用硅胶柱进行HPLC纯化得到六种新型的单环碳二萜类化合物Dactylomelans。从红藻L.luzonensis中也分离得到二萜类化合物luzodiol(62)〔9〕。一个溴代二萜类化合物(63)从日本其他红藻Laurencia物种中分离得到〔22〕。

Xenicane二萜类化合物(64～71)从台湾珊瑚Xeniablumi分离出来，而化合物xeniolactonesA-C(72～74)则是从台湾Xeniaflorida中分离出来的〔23〕。化合物(64～67),(69),(70)和(72)具有轻微的细胞毒性作用。非Xenicane代谢产物xenibellal(75)对Xeniaumbellata也具有轻微的细胞毒性作用〔24〕。化合物Confertdiate(76)是一个四环的二萜类物质，从中国珊瑚Sinulariaconferta中分离得到〔25〕。

从史密森尼博物院癌症研究所收集的海葵中分离得到的二萜类化合物actiniarinsA-C(77～79)能适度抑制人cdc25B磷酸酶重组〔26〕。PericonicinsA,B(80～81)〔27〕是从内生红树林真菌Periconiasp.分离得到的二萜类的新化合物，能抑制不同微生物的生长活性，诸如bacillussubtilisATCC6633,StaphylococcusaureusATCC6358p,StaphylococcusepidermisATCC12228等等。

南海真菌2492#是从采自香港红树林植物Phiagmitesaustrah样品中分离得到的，从2492#菌株的发酵液中分离得到的两种二萜类化合物(82～83)有很好的生理活性〔28〕，如抗肿瘤、降压、调整心率失常，同时降压调整心率失常的作用在相同的条件下优于临床现用的阳性对照物。

从中国红树林植物Bruguieragymnorrhiza分离出二萜类化合物(84～86)，化合物(86)对小鼠成纤维细胞具有适当的细胞毒活性〔29〕。也从中国红树林另一物种Bruguierasexangulavar.rhynchopetala分离出三种二萜类化合物(87～89)〔30〕。与之结构相似的二萜类化合物(90～93)从中国Bruguieragymnorrhiza中分离得到，其中化合物(92)和(93)有轻微的细胞毒活性〔31〕。

1.4二倍半萜WillamFenical研究小组从曲霉属Aspergillus海洋真菌（菌株编号CNM-713）分离到一个新的二倍半萜化合物aspergilloxide(94)，该化合物为含有25个碳原子的新骨架，对人的结肠癌细胞HCT-116有微弱的细胞毒活性〔32〕。在此之前，WillamFenical等人从巴哈马的红树林中的漂浮木中也分离到一株真菌FusariumheterosporumCNC-477，并从中分离得到一系列多羟基二倍半萜类化合物neomangicolsA-C（95～97）〔33〕和mangicolsA-G(98～104)〔6〕，它们的结构如下图所示。Neomangicols的骨架为25个碳的二倍半萜，是首次从天然物中分离得到。药理实验显示化合物(96)具有和庆大霉素大致相当的对革兰阳性细菌的抑制能力，化合物(98)和(99)对MPA(phorbolmyristateacetate)诱导的鼠类耳朵水肿有抗炎症活性。1.5三萜从海洋生物中提取得到的三萜类化合物主要以三萜皂苷、三萜烯类、三萜糖苷等形式存在。四环三萜皂苷类化合物nobilisidenol(105)和(106)是从中国黑乳海参Holothurianobilis分离得到的〔34〕。采集于福建东山的黑乳海参洗净切碎后用85%的EtOH冷浸提取，得到的流浸膏均匀分散于水中，依次用石油醚、二氯甲烷、n-BuOH萃取，研究发现n-BuOH提取物经大孔吸附树脂、正相硅胶层析、反相C-18硅胶柱层析以及反相C-18柱HPLC分离得到三萜皂苷类化合物nobilisidenol(105)和(106)。易杨华等同时从海参中提取到了其它的三萜糖苷类化合物以及三萜皂苷脱硫衍生物〔35，36〕。三萜烯类化合物intercedensidesD-I（107-112）从中国海参Mensamariaintercedens中分离得到，具有细胞毒功能〔37〕。新西兰海参Australostichopusmollis是单硫酸酯三萜糖甙化合物mollisosidesA（113）,B1（114）和B2（115）的来源〔38〕。

具有细胞溶解作用的三萜类化合物sodwanoneS(116)是从印度洋多毛岛采集的海绵Axinellaweltneri中分离得到的〔39〕。三萜苷类化合物sarasinosidesJ-M(117-120)分离自印尼苏拉威西岛采集的海绵Melophlussarassinorum，对B.subtilis和S.cerevisae的细菌具有抗微生物活性作用〔40〕。

2糖苷类化合物

从中国海南采集的甲藻A.carterae中分离得到一种不饱和的糖基甘油酯化合物（121）〔41〕。甲藻采集于中国海南三亚，经分离筛选得到的A.carterae大规模培养后用甲苯/MeOH（1:3）的有机溶剂提取，所得干涸物分别用甲苯、1NNaCl水溶液提取。研究发现有机相提取物经硅胶柱（洗脱液为不同比例的MeOH/CHCl3）、反相C-18硅胶柱层析（洗脱液为MeOH/H2O=9:1），最后经反相C-18柱制备型HPLC（流动相为MeOH/H2O=95:5）分离纯化得到25mg不饱和的糖基甘油酯化合物（121）。从多米尼克普次矛斯采集的绿藻Avrainvilleanigricans中可以分离出一个甘油酯avrainvilloside（122），该化合物含有6-脱氧-6-氨基糖苷部分〔42〕。

两个甘油一酯化合物homaxinolin（123）和（124），磷脂酰胆碱homaxinolin（125）以及能抑制细胞生长的脂肪酸（126）是从韩国海绵Homaxinellasp.中分离得到的〔43〕。从红海采集的海绵Eryluslendenfeldi分离得到的两个甾体糖苷类化合物erylosidesK（127）和L（128）能选择性的抑制酵母菌株的rad50芽体，rad50能修复协调受损的双链DNA〔44〕。

海参Stichopusjaponicus是五种糖苷化合物SJC-1（129），SJC-2（130）,SJC-3（131）,SJC-4（132）和SJC-5（133）的主要来源〔45〕。五种化合物均从弱极性CHCl3/MeOH部分分离出来，其中SJC-1（129）,SJC-2（130）,SJC-3（131）是典型的鞘甘醇或植物型鞘甘醇葡萄糖脑苷脂类化合物，含有羟基化或非羟基化的脂肪酰基结构。SJC-4（132）和SJC-5（133）也含有羟基化的脂肪酰基结构，但是含有独特的鞘甘醇基团，是两种新型的葡萄糖脑苷脂类化合物。LinckiacerebrosideA（134）是从日本海星Linckialaevigata分离出的一种新型糖苷脂化合物〔46〕。

甾体糖苷孕甾-5,20-二烯-3β-醇-3-O-α-L-吡喃岩藻糖苷（135）和孕甾-5,20-二烯-3β-醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷（136）从中国短足软珊瑚Cladiellasp.中分离得到〔47〕。将新鲜的软珊瑚干质量1.6kg用乙醇在室温下浸泡3次,合并提取液,减压浓缩后得到深褐色浸膏166.5g用30%的甲醇溶解后,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,石油醚提取液经减压浓缩后得棕黑色胶状物62.5g，将此提取物硅胶柱减压层析,用石油醚乙酸乙酯溶剂体系梯度洗脱,从石油醚/乙酸乙酯（20:80）洗脱液中所得的洗脱部分在反相C-18柱上进行HPLC分离,用MeOH洗脱得到化合物60mg（135）和3mg（136），该类化合物具有抗早孕和抑制肿瘤细胞生长活性。

四种甾体糖苷化合物（137-140）是从中国珊瑚JunceellajunceaEtOH/CH2Cl2提取液中分离得到〔48〕。

3结语

目前，从海洋生物中发现的萜类和糖苷类天然化合物的数量近几年呈现逐渐增加的趋势，有些化合物的活性确切而且活性作用强烈是很有希望的一些药物先导化合物，但是用于临床研究的化合物还相对较少，因此开发更多新的天然化合物是有必要的。其次，从海洋生物中发现的活性化合物也存在着活性较低或毒性较大等问题,可以通过对其结构进行修饰，使其活性达到最佳效果。此外，从海洋生物中提取的活性化合物含量通常较低，而且化合物在提取过程中受到提取试剂、方法等外界因素的影响，所以采用化学合成的方法进行化合物的半合成或者全合成解决化合物在提取过程中结构易变、试剂耗量大等缺点。例如从海洋真菌中发现的结构新颖，有抗菌、抗癌和神经心血管活性的物质头孢菌素C，就是从海洋真菌中分离得到的，这是一大类半合成的广为人知的抗生素，它已广泛用于临床〔49〕。所以采用合成或半合成的方法解决活性化合物作为药源的大量生产方式是通行的。我们期待着这些药物先导化合物在药物开发方面发挥重要作用。谁有关于生物制药方面的毕业论文现代生物技术制药研究及展望生物技术药物(biotechdrugs)或称生物药物(biopharmaceutics)是集生物学、医学、药学的先进技术为一体，以组合化学、药学基因（功能抗原学、生物信息学等高技术为依托，以分子遗传学、分子生物、生物物理等基础学科的突破为后盾形成的产业。现在，世界生物制药技术的产业化已进入投资收获期，生物技术药品已应用和渗透到医药、保健食品和日化产品等各个领域，尤其在新药研究、开发、生产和改造传统制药工业中得到日益广泛的应用，生物制药产业已成为最活跃、进展最快的产业之一。有些学者认为，20世纪的科学技术是以物理学和化学的成就占主导地位，而21世纪的科学技术是以生物学的成就占主导地位。无论这种说法是否得到普遍的认同，生物技术是当今高技术中发展最快的领域似乎是不争的事实。科学家预测，生命科学到2015年会取得革命性进展。这些进展可以帮助人类解决很多目前无法医治的疾病的治疗问题，彻底消除营养不良，改善食品的生产方式，消除各种污染，延长人类寿命，提高生命质量，为社会安全和刑侦提供新的手段。有些成果还可以帮助人类加速植物和动物的人工进化以及改善生态环境对人类的影响等。产生新的有机生命的研究也会取得进展。1.生物制药现状目前生物制药主要集中在以下几个方向：1肿瘤在全世界肿瘤死亡率居首位，美国每年诊断为肿瘤的患者为100万，死于肿瘤者达54.7万。用于肿瘤的治疗费用1020亿美元。肿瘤