药理实验课件

药理学试验1/57试验一药理试验基础知识试验二

不一样给药途径对药品效应影响试验三药品协同作用和拮抗作用试验四戊巴比妥钠LD50测定试验五利尿药对家兔尿量影响药理学试验

2/57试验一药理试验基础知识一、目1.掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；2.更好地掌握药理学基本理论知识；3.培养科学思维3/57二、

基本要求1.

试验前：预习试验内容并复习有关理论知识；2.

试验时⑴试验器材要妥善保管；⑵试验操作按步骤进行，认真观测试验中出现现象，实事求是地做好统计；⑶注意节省试验药品；⑷维持良好课堂纪律。3.

试验后⑴各组同窗将试验动物处死，试验台擦洁净，将试验方盘送回准备室；⑵值日生搞好试验室卫生，将死亡动物送至指定场所；⑶书写试验报告。4/57三、试验报告书写1.题目2.目标3.原理4.材料：试验动物，器材，药品5.办法：用自己语言简单扼要描述出来；6.成果：要求真实、清楚；7.讨论：将试验成果进行比较、分析；试验中有哪些不足之处；成果异常或失败原因；8.结论：将试验成果进行归纳总结，应带有提醒性质。5/57四、试验设计基本标准1.随机标准使每一试验对象都有同等机会抽到试验组或对照组中，除处理原因外其他原因尽也许均衡一致，从而抵消非试验原因影响。2.对照标准⑴组间对照：阴性对照，阳性对照，同原因不一样水平对照；⑵本身前后对照3.

反复标准6/57五、试验动物1.动物选择⑴小白鼠：适用于需大量动物试验，如某些药品筛选，半数致死量测定。也较适用于避孕药试验、抗炎镇痛药试验、中枢神经系统药试验、抗肿瘤药及抗衰老药试验等。⑵大白鼠：比较适用于抗炎药品试验，血压测定、利胆、利尿药试验，也可用于进行亚急性和慢性毒性试验。

7/57⑶豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药试验。也常用于离体心脏、心房、肠管试验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药试验。⑷家兔：常用于观测研究脑电生理作用，药品对小肠作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温试验，用于热原检查。⑸狗：狗是统计血压，呼吸最常用大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观测药品对胃肠蠕动和分泌影响。在进行慢性毒性试验时，也常采取狗。8/572.试验动物编号狗、兔等较大动物可用特制铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不一样体表标志上标识。9/573.麻醉药选择⑴局部麻醉：常采取2％普鲁卡因做皮下浸润注射，可用于局部手术。⑵全身麻醉：①吸入麻醉：可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内，利用乙醚挥发性质，经肺泡吸取，作用较快，适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。②注射麻醉：常用戌巴比妥钠和乌拉坦。10/574.动物捉拿及固定办法⑴小白鼠右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁纱网上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤，并以左手小指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。⑵大白鼠用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手拇指和食指捉其头部，其他三指夹住背腹部即可固定。11/57⑶豚鼠豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。⑷家兔可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。12/575.动物给药办法⑴小白鼠①灌胃法(i.g.)：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，颈部伸直。右手持配有灌胃针头注射器，自口角插入口腔，再从舌面沿上腭进入食道。小鼠灌胃容量一般为0.1-0.3m1／10g。②腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，办法同灌胃，右手持注射器，取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为0.1-0.3ml／l0g。13/57③皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起皮肤处进针即可。④静脉注射(i.v.)：将小鼠置于特制固定筒内或倒置大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50'C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。14/57⑵家兔①灌胃：需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物挣扎和呼吸困难。也可将导尿管外端浸入水中，如有气泡吹出，表达插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入。15/57②皮下、腹腔注射：给药办法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为0.5-1.0/mg，腹腔为1.0-5.0ml/mg。③静脉注射：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘毛，选择一条比较显著耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔耳尖部，食指垫在兔耳注射处下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入。16/576.动物处死：大、小鼠一般用颈椎脱臼法处死。17/57一、试验目标

1.观测不一样给药途径对同一药品作用速度、强度影响；2.观测同一药品从不一样途径进入机体可产生不一样作用。二、试验材料

注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、一般天平、硫酸镁溶液试验二

不一样给药途径对药品作用影响

18/57三、试验内容1.观测不一样途径给小白鼠使用戊巴比妥钠后，麻醉开始时间、维持时间和麻醉深度不一样。

[观测指标]观测给药前后活动及翻正反射等情况。19/57[试验办法]取体重相近小白鼠3只随机分为三组，称其体重分别放入钟罩内，观测它们正常活动及翻正反射情况，然后按下表给药；观测小白鼠用药后反应及活动情况，以翻正反射消失时作为麻醉开始指标。统计麻醉开始时间，麻醉维持时间，麻醉深度有何不一样（用镊子夹其后肢看其反应）。组别处理措施灌胃组0.3%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g量灌胃肌注组0.3%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g量肌注腹注组0.3%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g量腹腔注射20/57[试验成果]试验成果填入下表中

不一样途径对药品效应影响组别给药措施麻醉开始时间麻醉维持时间麻醉深度灌胃组肌注组腹注组21/572.观测同一种药品硫酸镁，给小白鼠肌内注射和灌胃给药引发作用性质不一样。[观测指标]动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。22/57[试验办法]取禁食12h小鼠3只，称重，分别标为对照组、灌胃组和肌内注射组按下列给药：A：对照组：灌胃给生理盐水0.2ml/10g；B：灌胃组：灌胃给3.5％硫酸镁溶液0.2ml/10g；C：肌内注射组：肌内注射给3.5％硫酸镁溶液0.2ml/10g。23/57给药后注意观测动物活动情况，是否有肌肉松弛体现。15min后每只小鼠均灌胃给予5%炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml。炭末灌胃后15min，将小鼠脱臼处死，剖开腹腔，取出胃肠道。剪去附着在肠管上肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内移动距离和小肠(自幽门至回盲部)全长,计算每只小鼠炭末移动距离占小肠全长百分率，比较3组动物活动情况和胃肠炭末推进率有何不一样。24/57[试验成果]试验成果填入下表中

不一样途径对药品效应影响鼠号

体重(g)

药品及剂量

给药途径

动物反应

炭末推进率（%）ABC炭末推进率计算公式：炭末移动距离（cm）

小肠推进率=

×100%

小肠全长（cm）25/57六、思考讨论题

1、灌胃和腹腔注射给硫酸镁效应有哪些不一样？为何？2、给药前动物禁食12小时原因。3、为何比较炭末推进率，而非小肠全长或炭末在小肠内推进距离？4、本次试验成果对临床用药有何提醒？26/57试验三药品协同作用和拮抗作用［目标］观测激动剂与拮抗剂之间互相作用［材料］兔子１只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%盐酸肾上腺素注液,0.2%硝酸毛果芸香碱注射液27/57［办法］１、取兔放于兔固定箱内固定，避免阳光直射眼睛，用毛剪剪去兔两眼睫毛，然后用瞳孔量尺测量瞳孔大小，连续三次，取平均值。２、在兔左眼滴入０.2%毛果芸香碱3滴，滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,避免药液流入鼻泪管而不起作用，再用右手滴入药液。15分钟后再测量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比较。28/573、滴入毛果芸香碱20分钟后，分别在两眼滴入0.1%肾上腺素3滴，15分钟后测量两瞳孔大小，连续3次，取平均值并进行比较。4、滴入肾上腺素15分钟后，分别于两眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴，15分钟后观测两眼瞳孔变化，并测量其大小，连续3次，并取平均值。29/57项目正常毛果芸香碱肾上腺素阿托品瞳孔大小左眼

右眼

［统计］

［讨论题］从试验成果中如何说明药品协同作用和拮抗作用？30/57试验四戊巴比妥钠LD50测定一、毒理学试验办法1.急性毒性试验：一次性大剂量给予药品后观测药品作用；2.慢性毒性试验：长期连续数次给予中、小剂量药品，观测动物某些器官慢性受损程度；3.特殊毒性试验：致癌，致畸，致突变，过敏反应等。31/57二、LD50测定目标与原理目标：通过试验学习测定LD５０办法、步骤和计算过程，理解急性毒性试验常规办法。LD50是指使一群体动物中半数死亡剂量，是衡量药品毒性大小指标，是评价药品优劣主要参数。理解药品单次给药或短时间内数次给药后动物所产生毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定参照。32/57LD50测定办法很多，较为常用有改良寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。本试验介绍成果较精确、计算简便、可计算出所有有关参数改良寇氏法及及计算机应用程序中Bliss-Finney法。33/57三、详细试验(以戊巴比妥钠为例)

［材料］1.动物：小白鼠(体重18-22g，雌雄各半，试验前禁食12h)2.器材：注射器、鼠笼、天平、计算器等。3.药品：戊巴比妥钠34/57[试验办法]1、预试验：①摸索剂量范围：根据经验或文献找出动物100%及0%死亡剂量，即上下限剂量（Dm,Dn）。对于无毒性参照资料药品，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系（如2：1）稀释成多种剂量，办法是每组取2∽10只小鼠，按估计剂量给药，假如全死则减少剂量，假如全活则增加剂量，进而确定出Dm,Dn。35/57②确定组数、计算各组剂量：组数（G）：5-8组各组剂量：各组剂量要按等比级数排列，按下列公式求出公比r:按公比求各组剂量：D1，D2，D3，D4，D5，……，Dm其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1·r，D3=D2·r，……Dm=Dn-1·r③配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积同样，0.1ml/10g∽0.2ml/10g，按下列公式计算浓度：36/572、正式试验①分组编号：随机将小鼠分为五组，每组10只，♀♂各半。②给药：分别将配制好等比稀释液按0.2ml/10g由ip给药。③观测统计：给药后观测并统计中毒症状，30分钟后统计各组死亡小鼠数。37/57[试验成果]

全班成果汇总，计算硝酸士宁LD50、LD50可信限和可信限率。①成果处理试验资料按下表列出：

受试物剂量对数剂量动物数死亡率概率单位LD50（mg/kg）(X)(只)(%)(Y)及置信限(95%)

1234538/57②计算办法计算LD50及95%可信限：LD50=lg–1[Xm－i(∑P－0.5)]Xm=最大剂量对数值i=相邻两组比值对数（lgr）P=各组死亡率∑P=各组死亡率总和LD5095%平均可信限=LD50±4.5LD50·SX50其中SX50为LD50标准误其中n=各组动物数ΣP2=各组死亡率平方总和39/57[注意事项]药品称量、配制及给药精确程度是本试验成功是否关键。1.试验过程中给药剂量一定要精确。2.注意观测中毒症状及其发生时间、死亡时间。［讨论题］什么叫ＬＤ５０？测定ＬＤ５０意义和根据是什么？40/57试验五利尿药对家兔尿量影响一、利尿药1.定义：是作用于肾脏，增加电解质和水排出，使尿量增多药品。2.分类：根据利尿药作用部位，可分为高效、中效和低效利尿药3.呋塞米为高效利尿药⑴利尿作用特点⑵作用机制⑶临床应用⑷不良反应41/57二、利尿药试验办法1.动物选择可用大白鼠、小白鼠、家兔、猫和狗，其中以大白鼠较为常用。2.试验办法⑴代谢笼试验法：适用于大、小白鼠；⑵直接自输尿管或膀胱搜集尿液：适用于较大动物（家兔、猫、狗）。42/57三、详细试验[目标]1.理解急性利尿试验办法；2.观测速尿对麻醉兔利尿作用。[材料]1.动物：家兔2.器材：兔手术台、量筒、注射器、手术器械3.药品：25％乌拉坦，1％速尿43/57[办法]1.麻醉：取家兔一只，称重，耳缘i.v.25％乌拉坦4ml/kg；注意：注射速度要迟缓，随时观测角膜反射，反射消失即停顿注射。2.水负荷：麻醉后i.g.给自来水40ml/kg；注意：避免灌至气管，将灌胃管外端浸入水中，若有气泡立即拔出。3.手术：背位固定后剪去下腹部毛