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文档简介

荧光定量PCR

realtime-PCR荧光定量PCR

realtime-PCR1定量PCR反应体系

①actin③achi⑤aly⑦vlg⑨stat②actin④achi⑥aly⑧vlg⑩stat模板cDNA4ulTagmixture10ul引物10.5ul引物20.5ulH205ul1♀模板2♂模板①③⑤⑦⑨443.45ng/ul686.75ng/ul②④⑥⑧⑩17.738ng/ul26.47ng/ul定量PCR反应体系①actin③achi⑤aly⑦vlg⑨2定量与常规PCR的差别常规PCR技术：对PCR扩增反应的终产物进行定量及定性分析定量PCR技术：通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析三个关键词：实时，定量，荧光定量与常规PCR的差别常规PCR技术：定量PCR技术：三个关3PCR分四个阶段PCR分四个阶段4如何定量？Ct值的概念Ct值的定义是PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的阈值所对应的循环次数。如何定量？Ct值的概念5定量原理

确定初始模板的浓度初始DNA量越多,荧光达到某一值（域值）时所需要的循环数越少Log浓度与循环数呈线性关系，根据样品扩增达到域值的循环数就可计算出样品中所含的模板量定量原理

确定初始模板的浓度初始DNA量越多,荧光达到某6荧光定量PCR原理及操作步骤ppt课件7起点定量与终点定量起点定量与终点定量8荧光化学SYBRGreen1

TaqMan荧光化学SYBRGreen1TaqMan9TaqManTaqMan10SYBRGreenI工作原理

。SYBRGreen1结合到双链DNA的小沟部位SYBRGreen1染料只有和双链DNA结合后才发荧光GTTTGGCCCCCCCAAAGGGACTTGATAGCATCGTAAGTTTTTTGGGGCCCCCCCCAAAAATACCGGGGTTACGAACGGTAAT未结合SYBRGreen1dye变性:无荧光信号SYBRGreenI工作原理

。SYBRGreen11SYBRGreenI应用范围起始模板浓度定量融解曲线分析---可区分单一产物、变异产物、多种产物和（或）引物二聚体基因型分析SYBRGreenI应用范围起始模板浓度定量12SYBRGreenI优点SYBRGreenI缺点SYBRGreenI优点SYBRGreenI13荧光定量PCR原理及操作步骤ppt课件14PCR程序指南PCR程序指南15UNG酶使用原理UNG酶使用原理16金牌Tag酶活性金牌Tag酶活性17参比荧光：管家荧光ROX参比荧光：管家荧光RO

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