苯磺酸氨氯地平片的质量控制

苯磺酸氨氯地平片的质量控制

苯磺酸氨基丙烯酸酯（norvac）是治疗高血压的单一制剂。作为一种抗高血压药物二羟吡啶，它可以抑制神经退行性钙抗剂，阻碍血管平滑肌和心肌的收缩过程，从而降低周一和周期管的阻力和血压。目前，苯磺酸氨氯地平的质量标准收载于《中华人民共和国药典》然而，已有的研究1实验试剂和仪器高效液相色谱仪(配备5410紫外检测器、5210自动进样器、5110输液泵)、高效液相色谱仪(配备L-2450DAD检测器、L-2200自动进样器、L-2130输液泵)(日本Hitachi公司),PHS-3C型精密pH计(上海雷磁仪器公司),XPE26电子天平(德国MettlerToledo公司),SartoriusBT-25S电子分析天平、SartoriusSQP电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司),KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。乙酸铵(色谱纯)、冰乙酸、盐酸、质量分数30%过氧化氢(分析纯，天津市大茂化学试剂厂),甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司),纯净水(沈阳娃哈哈荣泰食品有限公司),氢氧化钠(分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)。苯磺酸氨氯地平片(自制，规格为每片5mg,按氨氯地平计，批号：20190110、20190111、20190112),苯磺酸氨氯地平对照品(中国食品药品检定研究院，含量质量分数100.0%,批号100374-201605),杂质A(欧洲药典委员会，含量质量分数100.0%,批号Y0001068),杂质B(欧洲药典委员会，含量质量分数100.0%,批号Y0001069),杂质D(加拿大TRC公司，含量质量分数96.0%,批号12-DHL-127-1),杂质E(加拿大TRC公司，含量质量分数98.0%,批号1-GSU-153-1),杂质F(加拿大TRC公司，含量质量分数95.0%,批号1-TAH-95-1),杂质G(欧洲药典委员会，含量质量分数100.0%,批号Y0001070),杂质H(加拿大TRC公司，含量质量分数98.2%,批号9-JLI-122-5),杂质N-F(加拿大TRC公司，含量质量分数99.1%,批号1270-094A3),杂质3(加拿大RXA公司，含量质量分数99.2%,批号17-A000413-09),杂质8(加拿大TLC公司，含量质量分数98.5%,批号1763-009A4),杂质15(加拿大TLC公司，含量质量分数99.7%,批号2578-054A3),杂质19(加拿大TLC公司，含量质量分数99.9%,批号2327-081A4),杂质20(加拿大TLC公司，含量质量分数99.2%,批号3047-082A3),以上各试药需避光操作。2方法和结果2.1溶液的制备2.1.1稀释剂的制备甲醇-水(体积比60∶40)。2.1.2供试品溶液的制备取同一批苯磺酸氨氯地平片10片，研细，取细粉适量(约相当于氨氯地平25mg),置25mL量瓶中，加稀释剂适量，超声5min使苯磺酸氨氯地平溶解，取出，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.1.3稀释剂的稀释精密量取供试品溶液1mL,置10mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL,置100mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。2.1.4白色粉末的制备称取苯磺酸氨氯地平片处方比例的空白辅料适量，按“2.1.2”条方法制备空白辅料溶液。2.1.5对照品贮备液的制备取杂质D和杂质3对照品各约3mg,杂质A、B、E、F、G、H、N-F、8、15、19和20对照品各约2mg,精密称定，分别置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各杂质对照品贮备液。2.1.6混合杂质对照溶液的制备分别精密量取各杂质对照品贮备液适量置10mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，配制成杂质A、E、F质量浓度约为1.5mg·L2.1.7系统适用性溶液的制备取苯磺酸氨氯地平对照品约13.9mg,精密称定，置10mL量瓶中，用稀释剂溶解，按“2.1.6”条方法制备，分别精密量取各杂质对照品贮备液于上述10mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。2.2在铬条件下和系统适用性试验2.2.1条件1色谱柱：Waters2.2.2系统适用性测试取系统适用性溶液，按“2.2.1”条色谱条件进样分析，记录色谱图。结果表明，氨氯地平与各杂质及各杂质之间的分离度均大于2.0。2.3方法学的检验2.3.1氧化破坏试验精密量取空白辅料溶液、系统适用性溶液各20μL,按“2.2.1”条色谱条件进样分析，色谱图见图2。结果显示，空白辅料不干扰主成分及其杂质的测定。取苯磺酸氨氯地平片细粉适量(约相当于氨氯地平10mg),精密称定，置10mL玻璃试管中，酒精灯外焰加热至药物部分变色，放冷，加入适量稀释剂超声溶解，转移至10mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为热破坏溶液。取苯磺酸氨氯地平片细粉适量(约相当于氨氯地平10mg),精密称定，置10mL量瓶中，加入稀释剂2mL,超声5min,取出，放冷，加入2mol·L取苯磺酸氨氯地平片细粉适量(约相当于氨氯地平10mg),精密称定，置10mL量瓶中，加入稀释剂2mL,超声5min,取出，放冷，加入2mol·L取苯磺酸氨氯地平片细粉适量(约相当于氨氯地平10mg),精密称定，置10mL量瓶中，加入稀释剂2mL,超声5min,取出，放冷，加入质量分数30%过氧化氢溶液2mL,80℃水浴1h,冷却后稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为氧化破坏溶液。取苯磺酸氨氯地平片细粉适量(约相当于氨氯地平10mg),精密称定，置10mL量瓶中，加入稀释剂2mL,超声5min,取出，放冷，稀释剂稀释至刻度，摇匀，于4500lx光照10d后，取出，滤过，取续滤液作为光破坏溶液。精密量取上述溶液各20μL,按“2.2.1”条色谱条件进样分析，色谱图见图3。结果显示，各降解产物均能与主成分达到良好分离，且主成分色谱峰峰纯度大于99.9%。2.3.2线性和域精密量取苯磺酸氨氯地平各杂质对照品贮备液适量，用稀释剂稀释成一系列的线性溶液，以各杂质峰面积(2.3.3仪器精密度试验精密量取混合杂质对照品溶液20μL,连续进样6次。按照表2顺序各杂质峰面积的RSD依次分别为1.8%、1.1%、0.9%、1.9%、1.9%、1.6%、0.8%、2.0%、0.66%、0.9%、1.7%、2.1%、0.9%,均小于3.0%,表明仪器精密度良好。2.3.4定量限和检测限将各杂质对照品贮备液逐级稀释，精密量取20μL进行检测，以信噪比(S/N)为10的浓度作为杂质定量限，信噪比(S/N)为3的浓度作为杂质检测限。按照表2顺序各杂质的检测限依次分别为55.6、18.9、72.4、101.4、66.7、11.6、12.9、17.0、5.0、14.4、19.2、25.8、18.8μg·L2.3.5面积的变化率取混合杂质对照品溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8、10、12h取样，精密量取20μL,按“2.2.1”条色谱条件进样分析，测定并计算各杂质峰面积的变化率RE。在12h内混合杂质对照品溶液各杂质峰面积的变化率RE均在±3.0%范围内，表明混合杂质对照品溶液室温放置12h内稳定。取供试品溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8、10、12h取样，精密量取20μL,在“2.2.1”条色谱条件进样分析，杂质B、D、G、19、20均低于定量限，测定并计算杂质8的峰面积的变化率RE,其他已知杂质未检出。在2h内供试品溶液中杂质8的峰面积的变化率RE在±3.0%范围外，表明供试品溶液需临用新制。2.3.6重复性试验结果取同一批苯磺酸氨氯地平片细粉6份(约相当于氨氯地平10mg),精密称定，分别置10mL量瓶中，加稀释剂适量，超声5min使苯磺酸氨氯地平溶解，取出，放冷，分别加入各杂质对照品贮备液适量，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，配制成与混合杂质对照品溶液中各杂质质量浓度相同的溶液，滤过，以外标法计算各杂质含量的RSD,按照表2顺序依次分别为1.0%、0.73%、1.0%、1.8%、1.2%、0.72%、0.76%、0.45%、0.35%、0.66%、1.8%、1.0%、1.1%,均小于3.0%,该方法重复性良好。2.3.7回收率的测定称取9份苯磺酸氨氯地平片处方比例的空白辅料适量，置10mL量瓶中，分别加入各杂质对照品储备液，配制成“2.1.6”混合杂质对照品溶液中各杂质对照品浓度的80%、100%、120%,用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为低、中、高三个质量浓度的9份回收率样品溶液。在“2.2.1”条色谱条件下进样分析，以外标法计算各杂质低、中、高质量浓度的平均回收率和RSD(%),结果见表3。各杂质在低、中、高三个质量浓度下的回收率均在90%～108%之间，且平均回收率RSD(%)均小于3.0%,该方法准确度良好。2.3.8耐用性试验取供试品溶液、对照溶液和系统适用性溶液，分别考察流速±0.1mL·min2.4杂质含量测定取三批苯磺酸氨氯地平片(批号：20190110、20190111、20190112),按“2.1”条方法分别制备供试品溶液和对照溶液。精密量取混合杂质对照品溶液和上述供试品溶液、对照溶液各20μL,在“2.2.1”条色谱条件进行样品检测，以外标法计算已知杂质含量，以主成分自身稀释对照法计算总杂质含量。三批苯磺酸氨氯地平片中，杂质B、D、G、8、19、20小于定量限，其他已知杂质未检出，且总杂质含量质量分数依次分别为0.048%、0.046%、0.044%,均低于限度(0.6%),三批苯磺酸氨氯地平片符合要求。3讨论3.1色度条件的选择《中华人民共和国药典》3.2稀释剂和稀释剂的选择存试验中发现，使用流动相稀释样品时，样品易降解产生新杂质。同时，以甲醇-水代替流动相制备样品溶液时，采集的色谱图与原色谱图一致，所以选择甲醇-水作为稀释剂，但二者比例不同时，采集的色谱图也不同。以空白溶剂干扰试验筛选了甲醇-水(体积比80∶20、70∶30、63∶37、60∶40、50∶50)等五种不同比例的稀释剂，最终选择无干扰且无梯度峰的甲醇-水(体积比60∶40)作为稀释剂。3.3杂质及总杂质含量参照《中华人民共和国药典》与《欧洲药典》,采用外标法计算13种已知杂质的含量，采