临床检验操作规程

- -临床检验操作规程第一节 临床血液学检验血常规检查【标 本】抗凝静脉血（有些仪器也可用末梢血。【方 法】血液细胞自动分析仪测定法。【试 剂】血液细胞自动分析仪配套试剂。【操 作】详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。【附 注】1.血常细胞计、详见有关资料。2.半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉- - -血。其优点为：（1）静脉血能正确地反映病人实际情况，重复性好；（2）利于延长仪器的使用寿命；（3）解决了采血盘的交叉感染问题等。3.血细胞计数应用EDTAK：为抗凝剂EDTA·K·2HO1.5～2 2 22.2mg可抗凝1l血。4.贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超过6h；如需制作血涂片应在h完成。5.测定前必须将EDTA·K抗凝血充分混匀。26.血细胞分析仪测定最适温度为18～22℃，低于15℃或高于30℃，均可使体积发生改变，影响各参结果。7.血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细细≥8.0%；红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出形等情况须用显镜及分类。嗜酸性粒细胞直接计数【标 本】末梢血或抗凝静脉血。【方 法】直接计数法。【试 剂】- - -.n；2.乙醇-伊红稀释液；3.伊红-丙酮稀释液。【操 作】1．小试管中加稀释液0.38ml。2血20ul。3置3in低高数10个大方格嗜酸性粒细胞数。总数×0×06=嗜酸性粒细胞/L。【附 注】1.血液稀释后应于h计数完毕。2.充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛。3.住院病人采集标本时间力求统一，以免受日间生理变化的影响。红细胞沉降率测定【标 本】抗凝静脉血。【方 法】氏法。【试 剂】109mmol/L枸橼酸钠溶液。【操 作】1.3mm×100mm试管1支，在2ml容量处刻上记号抗凝剂- - -0.4ml。2.静脉采血后，取下针头，加血至刻度，旋转混合。3.用血沉管（300mm×2.5mm）吸取上述混匀血液至"0"刻度处，拭去管外附着，将管垂直立在血沉架上。4.记时，室温中静置1h，观察血浆高度，细胞下毫米数报告之。【附 注】1.红细胞在单位时间下沉的速度与血浆蛋白的量与质，血浆中脂类的量和质红细胞的大小与量是否成串钱相聚以及血沉管的径、清洁度、放是否垂直，室温因素都有关系。2.标本采集时应空腹。3.血液和抗凝剂的比例要准确。4.血沉管径要标准2.5mm，放置要垂直。5.做血沉的标本要在采集后h测定，并分混匀。6.室温过低、过高和贫血时，对结果有影响。为此，血沉应尽量放在18～25℃室温下测定。室温过高时血沉加快，可以按温度系数校正。室温过低时血沉减慢正。网织红细胞计数【标 本】末梢血或抗凝静脉血。【方 法】百分计数法。- - -【试 剂】10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液或1g/L煌焦油蓝ACD液。【操 作】1.于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。2.加入末梢血或静脉血2滴于上述试管中，混匀。3.静置1520min后，取用1滴制成薄片。4.油镜下检查1000对。【附 注】1.活体染色时间不能过短，室温低时，放37℃温箱。2.网织红细胞也可用ilr窥盘计数法荧光染色或流式细胞仪计数。嗜碱性点彩红细胞计数【标 本】末梢血。【方 法】百分计数法。【试 剂】1.甲醇；2.碱性亚甲基蓝染液（保存2～3周。【操 作】- - -1.按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。2.用碱性亚甲基蓝染液染色1～2min，水洗待干。3.用油镜计数1000率。【附 注】1.用碱性亚甲基蓝染液染色后，红细胞呈浅蓝绿色，嗜碱性点彩呈深蓝色。2.也可用瑞氏染色，嗜碱性点彩呈蓝黑色。3.由于点彩红细胞分布不匀，必要时扩大计数红细胞数。 体液及排泄物检查尿液检验尿常规检查【标 本】新鲜尿液。【方 法】化学试带法。【试 剂】各型号尿液化学分析仪配套试带。【操 作】- - -详见自己实验室的尿液化学分析仪使用手册。【附 注】1.尿常规检查使用尿液化学分析仪，目前能进行8～10项检测（PH蛋白葡萄酮体尿胆红素尿胆素原亚硝酸盐、比重、白细胞。这些项目亦有相应的手见有关资料。2.必须了解所用试带各膜块注意事项、药物干扰。3.要注意尿液化学分析仪测定结果与手工法的差异，必要时用手工法复查。4.尿液化学分析仪检测仅是一个过筛手段，当蛋白、隐血、白细胞等出现果（如尿蛋白“＋”或以上，应进行镜检。5.尿液颜色、透明度等一般性状异常时也应报告。本－周氏（Bence-Jones）蛋白定性检查【标 本】新鲜尿液。【方 法】热沉淀反应法。【试 剂】1.00g/L磺基水酸溶液；2.2mol/L醋酸盐缓冲液pH4.9±0.1。【操 作】1.先将尿液用磺基水酸法作蛋白定性检查，如呈阴性反应，则- - -可认为标本中本－周氏阴性。2.取透明尿液4ml于试管中再加入醋酸盐缓冲液ml混匀后，放置56℃水浴中15水沸3浊减弱或沉淀减少，均提示本-周氏蛋白阳性。若煮沸后，浑浊增加或沉淀增多表明此尿液中还有其它此时应将试管从沸水中取出立即过滤滤液开始透明温度下降后浑浊煮沸时又透明，提示-周氏蛋白为阳性。【附 注】1.过多的本-周氏蛋白在90℃以上不易完全溶解故需与对照管比较，也可将尿液稀释后再测。2.煮沸过滤除去尿中白、球蛋白时，动作要迅速，并需保持高温，否则本-周氏蛋白也会滤去。尿乳糜定性检查【标 本】新鲜尿液。【试 剂】1.乙醚（AR；2.丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩红染色液。【操 作】1.取尿5～10ml，加乙醚23ml合振摇后，使脂肪溶于乙醚。静分钟后，2000r/min心n。2.吸取乙醚与尿液的界面层涂片，加丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩- - -液1。3.镜检观察是否有红色脂肪小滴。【附 注】1.尿液中加少量饱和氢氧化钠，再加乙醚，有助于澄清。2.将分离的乙醚层隔水蒸干，若留有油状沉淀，也可加丹Ⅲ，镜检证实有无脂肪小滴。尿胆色素原定性试验【标 本】新鲜尿液。【试 剂】1.对二甲氨基苯甲醛试剂；2.饱和醋酸钠溶液；3.氯仿；4.正丁醇。【操 作】1.在试管中加入尿标本l及对二甲氨基苯甲醛试剂2ml混合。2.立即加饱和醋酸钠溶液4ml混仿3ml摇混合后，上层水溶液呈红色者为阳性反应。3.阳性结果应用下法证实：如尿胆原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿胆原应多次用氯提直至氯仿层呈淡粉红色或无色醇- - -4ml，如液仍呈红色实尿中胆色为阳性。【附 注】1.醋酸钠溶液必须为饱和液。2.当尿胆色素原浓度太高时，应将尿标本稀释25100。3.尿液必须新鲜，不能久置。尿苯丙酮酸定性试验【标 本】新鲜尿液。【方 法】三氯化铁法。【试 剂】1.100g/L三氯化铁液；2.磷酸盐沉淀剂。【操 作】1.尿液4l加磷酸盐沉淀剂1ml，混匀，静置3min，如出现沉淀，可用滤纸过滤或离心除去。2.滤液中加入浓盐酸23和100g/L三氯化溶液23滴，每加1滴立即观察颜色变化。以尿液显蓝绿色并持续2~4min为阳性。【附 注】1.尿中若含酚类药物（如水酸制剂）及氯丙嗪，也可与氯化铁结合显色，试验用此类药物。胆可造成假阳性。- - -2.小儿出生后6周不易查出。故于出生6周后检查为。3.大多数苯丙酮尿症患者的尿液可出现阳性。但约1/41/2病例可能会漏检4.亦可采用，4-二硝基苯肼法。尿沉渣检查【标 本】新鲜尿液（最好采集清晨中。【方 法】显微镜检查法。【操 作】1.液l1500r/min离心5min。2.下0.2ml形成分充分混匀。3.取尿沉渣0.02ml，滴在载玻片上，用18mm×18mm的盖玻片覆盖。4.用10×10其中有形。用00镜头观察鉴定细胞成分及计算数察0个视野所见镜察20个视野，算出一个视平均值，记录结果。尿盐类数量以每一高倍视野＋2＋3、4。【附 注】- - -1.清晨（一般情况应采集中段尿在1h检。2.见到各种上皮细胞也应报告，报告方式参照白细胞。3.亦可采用染色尿沉渣镜检。尿沉渣定量检查【标 本】新鲜晨尿。【方 法】一小时尿沉渣计数法。【操 作】1.集3h尿液于干燥容器送检（标本留取时间5:308:30。2.准确测量3h液10ml心1500r/min心n液9ml下1ml充分混匀。吸取混匀尿液1滴，注于血细胞计数板。细胞共数0大数0胞/h胞/h型/h。【附 注】1.尿液应新鲜，PH应在6以下。2.尿液比重最好在.26以上。3.如尿液中含多量磷酸盐时，应加少量稀醋酸液（切勿加多，使其溶解；含酸盐时，应加温使其溶解。4.亦可采用尿沉渣定量分析板或尿沉渣自动分析仪进行尿沉渣- - -定量检查，详见有关资料。绒毛膜促性腺激素检测【标 本】新鲜尿液。【方 法】金标抗体检测法。【操 作】见试剂盒说明书。【附 注】若质控点和测定点均不呈现红色，表示剂失效。粪便检验粪便的显微镜检查【标 本】新鲜粪便。【方 法】直接涂片镜检法。【操 作】1.洁净玻片上加等渗盐水12或覆以盖片。涂片的能透过印刷物字迹为准）检查。- - -2.在涂片中如发现疑似包囊，则在该涂片上滴加1滴碘液，在高倍镜下仔细鉴别，如仍不能决取全量粪便浓缩法检查。隐血试验【标 本】新鲜粪便。【方 法】免疫学检测法。【操 作】取一片洁净干燥的载玻片，滴加23滴蒸，取粪便少，反应端浸湿在5min观察结果应线及质控线均呈蓝色带为。【附 注】1.若两条线均不显色，说明试纸条失效。2.本法由于间断性出血或出血在粪便中分布不均等因素，可造成假阴性结果。3.本法由于药物等原因，对正常人检查有时会得到阳性结果。4.亦可采用化学试带法、邻甲联苯胺法、愈创木酯法等。收集标本前3本法不受动物血红蛋白的干扰，试验前不须禁食肉类。粪胆素检查- - -【标 本】。【方 法】氯化高汞煮沸法。【试 剂】饱和氯化高汞溶液。【操 作】1.于小试管置粪便一小块，加饱和氯化高汞溶液数毫升。2.将粪块调匀，加热煮沸mn，立即观颜色反。【附 注】1.结果不易判定时，应注意粪便颜色，必要时以盐水代替试剂做空白对照。2.当粪便颗粒经煮沸后如有红色又有绿色出现，说明标本既含粪胆素又含胆红素，常见于肠等。脑脊液检验氏（Pandy）球蛋白定性试验【标 本】新鲜脑脊液。【试 剂】5%苯酚溶液（棕色瓶保存。【操 作】取试剂2～3ml管脑液12以- - -黑色背景，观察结果，报告阴性或及阳性的程度。细胞计数【标 本】新鲜脑脊液。【试 剂】1.细胞计数板；2.红细胞稀释液；3.冰乙酸；4.1%冰乙酸。【操 作】1.细胞总数：（1数0个大方格红、白细为每ul的细胞数较多，可计数一大格的细胞数×10。（2）浑浊或带血脑脊液：用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20ul液0.38ml用数4以0即为每ul脑脊液的细胞总数。2．白细胞数：（1酸12壁沾有冰乙酸后倾然后滴加混匀的脑脊液3～4滴，数分钟后，- - -混匀充入计数池，按细胞总数红、白细胞计数法计数。（2将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后按细胞总数操作中的细胞计数法计数，结果×稀释倍数。3．细胞分类：（1）直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换成高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形态单个核细（包括巴及数100白于100个，应接写出单多核细具体数字。（2）染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离物2清1室或37℃温箱待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。如见有不能分类的细胞，应另行描述报告。【附 注】1.脑脊液常规包括一般性状检查、氏（Pandy）球蛋白定验及细胞计数。2.计数应及时进行。3.细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别。4.计数池用后，应用75%毒60min。浆膜腔积液检查浆膜粘蛋白定性试验（Rivalta反应）【标 本】新鲜浆膜腔积液。- - -【试 剂】。【操 作】取00ml水100ml酸0.1m（～5分背观察白色雾状沉淀的发生及其下降速度等报告阴性或阳性及阳性的程度。细胞学检查【标 本】新鲜浆膜腔积液。【操 作】1.细胞总数及有核细胞计数方法基本与脑脊液同，漏出液中有核细胞数量常在100×106/L以下；渗中有核细胞数量，常在500×106/L以上。2.细胞分类：穿刺液应在抽出后立即离心，用沉淀物涂片后以瑞氏染色法进行分类必要时制备稍厚涂片在干燥前醚乙醇等量混合液中固定30min，用木-伊红（HE）或巴氏法染色查找癌细胞。精液检查精子活动率- - -【标 本】。【操 作】取新鲜标本混匀后在温热玻片上用高倍镜观察100个精子计数活动精子与不活动精子的比精子活动的百分率。【附 注】如室温低于10℃时应将标本先放入37℃温育5～10min后镜检。精子活力【标 本】新鲜精液。【操 作】取上述新鲜湿片标本，观察精子的活动力，以0级至Ⅳ级报告。精子计数【标 本】新鲜精液。【试 剂】精子稀释液。【操 作】1.于小试管加精子稀释液0.38ml，吸液化精液20ul，加入稀释液摇匀。2.置12min沉- - -后，以精子头部作为基准进行。3.如精子数少，数2乘0万即为每毫升精数，再换算成×109/L报告。4.如精子数多，可计数5个中方格精子数，加6个零为每ml精液精子数再换算成×109/L报告。【附 注】1.收集精液前应避免性生活3~7天，精液宜用清洁干燥之小瓶冬季应注意保温。2.出异应复查23次方能得出比较的结果。3.如低倍镜、高倍镜检查均无精子，应将精液离心沉淀后再涂片检查，如两次均无精子，报子。精子形态观察【标 本】新鲜精液。【试 剂】革兰或瑞氏染液。【操 作】革兰或瑞氏染色后用油观察，报告异常精子的百分比。- - -前列腺液检查【标 本】新鲜前列腺（临床医师作前列腺按摩术后采集标本于清洁玻片上，立即送检。【操 作】1.肉眼观记录液体颜色是否混有血液粘稠（有无脓块。2.湿片镜检：高倍镜下观察白细胞、红细胞、卵磷脂小体，其次为上皮细胞、淀粉样体等，必兰染色查细菌。阴道分泌物检查【标 本】阴道分泌物。【操 作】1.清洁度：取阴道分泌物，用生理盐水涂片，高倍镜检查，根据所含白细脓细胞上皮细杆菌菌的多少分成Ⅰ～Ⅳ度。2.滴虫检查：在湿片镜下如见梨形，比白细胞大2倍，顶端有鞭毛4根，在2542℃温度下可活动虫（在寒冷天气，标要采取保温措施，报告之。3.霉菌检查：在湿片高倍镜下如见卵圆形霉菌孢子，报告之。痰液检查显微镜检查- - -【标 本】。【操 作】取1接检注意有无红细胞白细胞上皮细胞枯什曼螺旋体、夏科-雷登结晶胆结磺线菌寄生虫可见蛔虫卵、肺吸虫卵、痢疾阿米巴、真菌孢子、心力衰竭细胞、载碳细胞细胞等。嗜酸性粒细胞检查【标 本】痰液。【试 剂】瑞氏或伊红-美蓝染色液。【操 作】取痰液做直接涂片，干燥后用瑞氏或伊红-美蓝染色液染色，油镜下计数100个白细胞，报告嗜酸性粒细胞百。- - - 血栓与止血的检验血管壁与皮细胞检验出血时间（BT）出血时间检测是指皮肤受特定条件的外伤后出血自止所需的时间此过程反映皮肤毛细血管与血小板相互作包括血小板粘附，血小板活放以及血小板聚集等反应。1.出血时间“测定器法”自肘前窝凹下二横指处，经常规消毒滤纸吸干流出的血至出血自然停止，按停秒表，记录出血。2.Duke法，自耳垂或指尖取血。【方法与操作】见《全国临床检验操作规程（第二版）【注意事项】测定器法：1.采取部位应保暖，血液应自动流出。2.由于刺入皮肤的刀片长度和深度均固定，故“测定器法”的结果较为准确。3.滤纸吸干流出血液时，应避免与伤口接触。4.试验前1周不能服用抗血小板药物，如阿司以免影响结果。- - -血小板数量和功能检验血小板计数和平均血小板体积测定血小板计数：目视计数法。【标 本 】末梢血或抗凝静脉血。【方法与操作】见《全国临床检验操作规程（第二版。【试 剂】1.草酸铵法稀释液。2.许汝和稀释液。【附 注】1.血小板稀释液要清洁。防微粒和细菌污染。试管和吸管也应清洁、干净。2.针刺应稍深，使血流通畅。拭去第一滴血后，首先采血作血小板检测防止血小板聚集和破坏采取标本后尽快计数。3.血液稀释液充分混匀后，滴入计数池后，要静置10~15min。室温高时注意保池周围的湿度，以免水分蒸发。4.计数时光线要适中，注意有折光性的血小板与杂质灰尘相区别，附在血细胞旁边的血小板也要注意，不要漏掉。血小板计数仪计数- - -【标 本】。【方法与操作】使用血小板计数仪及与其相匹配的稀释液操作详见仪器说明书。平均血小板体积（MPV）测定【标 本】根据仪器的要求用末稍血或静脉取血注入抗凝（EDTA.Na或肝2素）【方法与操作】自动化血细胞计数仪均可检测血小板功能检验血小板粘附试验【标 本】自静脉取血.0~15ml。【方 法】1.玻珠柱法：（1）操作：见《全国临床检验操作规程。（2）注意事项：1）取血过程必须顺利，掌握血液通过玻珠柱的速度，流速太快，粘附率流速太慢会使粘附率增高。- - -2）玻珠柱为一次性用具，用后即弃去。3）待用玻珠柱应置于干燥器中贮存，受潮后粘附率下降。2.玻璃滤器法：【标 本】自静脉取血1.5ml。【方法与操作】见《全国临床检验操作规程（第二版。血小板聚集试验（PAgT）【标 本】自肘静脉取血4.5ml注入于含0.5ml19mmoL枸椽酸钠的硅化离心管分混匀。【试 剂】1.富含血小板血浆PR）及贫含血小板血浆（PPP。2.血小板聚集诱导剂AD、肾上腺素、胶原、瑞斯托霉素（Ristocetin）等。【方法与操作】PAgT比浊法《全床检验操作规程步骤操作。【注意项】1.血标本中pH6.~85之间时，可测得最佳结果p＜6.4或＞10.0时，可使聚集或消失。2.阿司匹林、生丁、肝素、双香豆素等可抑制聚集，尤其阿司匹林抑制聚集作用时间可持续1。3.采血后标本应放在15~25℃下，切忌冰箱保存，并在3h完- - -。凝血因子检验全血凝固时间检验（CT）【标 本】静脉取血3ml。【方法与操作】试管法、硅管法操作参见《全国临床检验操作规程（第二版。【附 注】1.静脉取血要一针见血，尽量减少组织液和空气混入。2.水浴箱温度要恒定，过高或过低，可影响结果。活化部分凝血活酶时间测定（APTT）【标 本】自静脉取血，用109mmol/L枸椽酸钠作9抗凝。【试 剂】市售成套试剂。【方法与操作】按试剂及有关仪器说明书要求进行。【附 注】1.标本应及时检测，最迟不超过2h。2.分离血浆应在3000r/min，离心10min。3.本试验较C5％- - -轻型血友病。血浆凝血酶原时间测定（PT，一期法）【标 本】静脉血1.8ml用109mmol/L钠0.2ml抗凝。【试 剂】1.组织凝血活酶浸出液；2..025mol/LCaCl液；2【方法与操作】见《全国临床检验操作规程（第二版。【附 注】1.采血后宜在1h完成，置冰箱4℃保存,不应超过4h，-2℃下可放置2周-70℃可放置6个月。2.水温箱控制在37℃1℃，过高过低均影响结果。简易凝血活酶生成试验（STGT）【标 本】取全血0.04ml加5ml蒸馏水，混匀，即成溶血液，备用。【方法与操作】见《全国临床检验操作规程（第二版）循环抗凝物质检验凝血酶时间测定（TT）- - -【标 本】血1~1.5ml，注入枸橼酸钠抗凝管，混匀。【方法与操作】见《全国临床检验操作规程（第二版）【试 剂】1.0mmolL枸橼酸钠液2.凝血酶溶液【附 注】1.采血后宜在1h完成，置冰箱保存不应超过h。2.肝素或EDTA.Na抗凝血浆不宜作本试验。2 溶血性贫血的检验红细胞渗透脆性试验【标 本】1.简易法，静脉血为宜。2.比色法，用肝素抗凝管，抽取静脉血1.0~1ml，混匀。【方法及操作与试剂】1.简易法：用配有6号针头的干燥无菌注射器取静脉血1.0~1.5ml立即滴入试管含有量的NaCL及蒸馏水的各管，每管１滴，贫血患者可加2滴，摇匀，静置，室温2h，观察结果。详见《临床实验诊断学上册。2.比色法：见《临床实验诊断学上册。- - -【附 注】1.简易法：（11~2个月需更换1次试剂。（2如取耳垂血要使血液流出畅通如静脉血要求注射器干燥。（3）如用抗凝血，以去纤维蛋白或肝素抗凝血为合适。（4）如开始及完全溶血的结果不易判断时，可离心后观察。（5）地中海贫血的渗透脆性降低，需作低浓度NaCL液检测。2.比色法：（1）如在室温下实验，需在2比色结束。（2血与NaCL缓冲液的PH值及查结果均有一定影响。红细胞自体溶血试验本试验是测定患者的红细胞在自体血清中经孵育后自发发生的溶血程度。【试 剂】1.0g/L葡萄糖（无菌；2.等渗盐水（无菌；3.Hi稀释液；4.0.4mol/LATP生理盐水无菌液。【方法与操作】见《全国临床检验操作规程》第二版。【附 注】- - -应严守无菌操作规程。临床微生物及寄生虫检验细菌涂片检查涂片不染色显微镜检查1.标本要求：各种标本或细菌培养物。2.试验方法：直接涂片法、压滴法或悬滴法。3.操作步骤：见《全国临床检验规程。4.结果观察：观察标本中有无细菌或真菌，如有再观察细菌的形态及运动情况，报告所见。5.注意事项：注意微生物操作安全；标本量不宜太多，以免影响观察；涂片制作后立即观察，涂片干涸后应。涂片革兰染色显微镜检查1.标本要求：各种标本或细菌培养物。2.试验方法：常规法、快速法。3.操作步骤：见《全国临床检验规程。4.结果观察：观察染色涂片有无细菌或真菌，如有则进一步观察观察细菌菌体在细胞或细胞外。报。- - -5.注意事项：涂片厚薄适宜均匀；固定及染色不能超时，否则染色变性；只能报细菌的染色性、形态、特殊结构及排列，不能直接报菌种如报告涂片见淋病奈瑟白喉棒状杆菌。涂片抗酸染色显微镜检查1.标本要求：各种标本或细菌培养物。2.试验方法：萋尼染色法、快速染色法或荧光（金胺－罗丹）染色法。3.操作方法：见《全国临床检验规程。4.结果观察：抗酸菌在萋尼染色法中呈红色，在金胺－罗丹染色法中呈金黄色。5.观察染色涂片有无抗酸杆菌，如有则进一步观察细菌数量大致情况。涂片细胞，则观察菌体在细胞或外。报告所见。6.注意事项：涂片厚薄适宜均匀；固定及染色不能超时，否则染是否在细胞，不能直接报告见分枝杆菌或结核分枝杆菌，因奴卡菌属、放线菌属细菌也可为抗酸阳性菌。涂片墨汁染色显微镜检查1.标本要求：各种标本或细菌培养物。2.试验方法：直接染色法。3.操作步骤：见《全国临床检验规程。4.结果观察：涂片背景为黑色，新型隐球菌或细菌荚膜在染色中- - -呈折光环形菌体结构。5.观察染色涂片有新型隐球菌或细菌荚膜时为检查阳性。报告所见。6.注意事项染液与标本液的比例为1:1比例不当影响观察效果；只能报告所见折光性环状样菌体不能直接报告见新球菌等。寄生虫检验操作疟原虫检查1.标本要求间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10小时采血，恶性疟患者在发作后0小时左右采血。2.试验方法：薄血厚血片染色镜检。3.试验材料：瑞氏－姬姆萨染色液、显微镜等。4.操作步骤：见《全国临床检验规程。5.结果判断薄片须找100或100以上个厚片须找0个视野或以上才能报告“未找到疟。6.注意事项：见疟时必须进行分类。微丝蚴检查1.标本要求：采血时间以晚上912前后为宜。2.试验方法：鲜血片法、厚血片试管浓集法。3.试验材料：枸橼酸钠等。4.操作步骤：见《全国临床检验规程。- - -虫卵及包囊浓缩检查1.标本要求：新鲜粪便取蚕豆大小，放于大小与大号青霉素相似的瓶。2.试验方法：漂浮法、清水沉淀法。3.试验材料：一般检验常规材料。4.操作步骤：见《全国临床检验规程。肛门擦拭子虫卵检查1.标本要求：随机取样送检。2.试验方法：软透明纸肛门拭子检查拭子肛门擦拭法等。3.试验材料：一般常规实验用品。4.操作步骤：见《全国临床检验规程。临床免疫学检查传染病免疫学检查乙型肝炎血清标志物（HBV一M）检测【方 法】ELISA法。【试 剂】国有商品化试剂盒供应但必须按规用经中国药品生物制品检定所检定并贴“中国药品生物制品检定所检定合格字样的防伪- - -标签的试剂。【操 作】按试剂盒说明书书进行。【附 注】1．试剂盒应置冰箱中保存，取出后平衡至室温方可使用，未用完的微孔条须密封保存；2．每次应设空白1孔（不加及标酶试剂余各步相同，阴性对照3孔，阳照2孔；3．洗涤液须用蒸镏水或去离子水配制，洗涤时各孔均应加满洗液，以防孔口边缘有游离酶残净；4．用洗板机洗板，每次洗板反复5遍，最后一次要求微孔不残留洗涤液，如达不到要求，需；5．洗板机洗板时应设定30~60浸泡时间；6．滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体均匀并弃去一滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确，注意勿将试剂滴在孔壁上；737温育须采用水浴箱，不可使用37孔必触37℃水浴水面，不可悬空；8．不同批号试剂不可混合使用。【结果判断】酶标仪双波长450/630nm比色测定；1．HBAg、抗—HB、HBeAg；S S临界值（C.O）=阴性对照孔A值的均值N×2.1（阴性对照A值＜0.05时按0.05；- - -本A值S/C.O≥1为HBsAg抗—HBsg阳（S/N≥2.1；标本A值S/C.O＜1为HBsAg抗—HBsg阴（S/N＜2.1。2．抗—HBe、抗一HB；C临界值（C.O）=阴性对照孔A值的均值N×0.5；标本A值S/C.O≤1者为抗—HBe、抗一HB阳性（S/N≤0.5；C标本A值S/C.O＞1者为抗—HBe、抗一HB阴性（S/N＞0.5。C抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M（Anti-HAV-IgM）测定【方 法】ELISA法。【试 剂】市售合格试剂、要求同HBV两对半；【操 作】按试剂说明书要求进行，要求可参考HBV两对半；【结果判断】要求同HBV两对半中HBsAg。抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白G（Anti-HCV-IgG）测定【方 法】ELISA法。【试 剂】市售合格试剂、要求同HBV两对半。【操 作】- - -按试剂盒说明书进行、要求可参考HBV两对半。【结果判断】1．阴性对照：正常情况下，A≤0.08；2．阳性对照：正常情况下，A≥0.50；3．临界值（C.O）=阴性对照均值×2.8。阴性对照孔A值>0.08应舍弃、如所有阴性对照孔A值均>0.08，试验应重做。阴性对照孔A<0.05以0.05计算。标本A值S/C.O≥1者为阳性。标本A值S/C.O<1为阴性。抗HIV（1+2）测定在选用测定方法时需根据自身条件和需要加以综合考虑管所述方法灵敏度都很高、但在实际工作中，假阳性仍然，为达到最佳的的，一般需采用下列程序。ELISA、金标等过筛试验阴性排除后；阳性者应以同类另一方法免重发出阳果报告。【方 法】1ELA胶凝集试验等。试剂必须使用经中国药品生物制品检定所检定“中国药品生物制品检定合格”防伪标签的商品试剂盒。2．确认：免疫印迹法和放射免疫沉淀试验。- - -使用经国家卫生部正式批准的快速免疫转印相应的放射免疫沉淀试剂盒。【操 作】按试剂说明书要求进行。【结果判断】按试剂说明书要求判定。【附 注】1．判断是否感染HIV应十分慎重，对可能是阳性的样品还应结合其它测定项目的结果和临床情况作出判断。2．金标法必须使用当天新鲜血清才能保证最佳结果，否则易产生非特异性显色反应血浆必须去掉纤维蛋白否则易造成膜过滤阻塞。肥达氏反应【方 法】大孔反应凝集试验。【试 剂】试剂市售。【操 作】按试剂盒使用说明书执行在大孔反应板进行较传统的肥达氏反应结果更每次试验均须做阴、阳性对照管（孔。【结果判断 】为便于观察，每10ml稀释菌液中（70亿菌，入20.0g/L- - -液5u1(微升，结果更清晰。凝集价O＞180、H＞1160才有诊断价值。近斯接伤寒，付菌苗者其凝集价升高。“O抗体属IgM出现早维间数日抗H体属IgG，出现较晚、但维持时间可达数年。抗链球菌溶血素O（ASO）检查【方 法】胶乳凝集法。【试 剂 】市售成套商品试剂。【操 作】按试剂说明书进行。1．A、S、O胶乳加入后轻摇动到指定间应立刻纪录结清不性低10，在胶乳试剂加入后应延长反应时间2min，室温升高10℃应缩短反应时间2min。阳性质控血清应在本说明书指定的时间出现清晰凝集，但不能将阳血清出现凝集的时间视为判果的时间界限。2．溶血、脂血、高胆红素血症、高胆固醇血症、类风湿因子阳性以及标本被细菌污染都不会验。3放在4效达1，但用前必须摇匀。4．本试验用的滴管口径以及装胶乳试剂的塑料瓶的口径应同样- - -大小，保证液滴大小一致。梅毒血清学检查快速血浆反应素环状卡片法（RPR）【试 剂】本试验有商品试剂盒RPR抗原液匀灰黑色无杂质6～10℃暗处可保存1年。【操 作】按试剂盒说明书进行。【结果判断】阴性标本不凝集阳性标本反应液中可见明显黑色凝集颗粒根据颗粒大小报+~++++。如有需要，阳性标本也可在RPR卡片上将血清用生理盐水作1:2~1:32稀释后，按定性试验方法做半定量试验。【附 注】1．此试验的最佳温度为23~29高。温度过低，灵敏度可能下降；2．观察结果要及时；3前半定验有助于澄清题因此呈粗糙非反应结果的血清宜再做半定量试验。甲苯胺红不加热血清法（TRUST）【试 剂】本试验有商品试剂盒。- - -【操 作】按说明书进行。【结果判断】+~++++。【附 注】1待测血清及TRUST抗原于测定前放室温平（23～ 29℃；2．阳性反应需做半定量试验，操作方法同RPR半定试验。螺旋体血球凝集法（TPHA）【试 剂】市售成套试剂。【操 作】按试剂说明书进行。【结果判断】定性试验：将标本最终稀释成1:40与未致敏的红细胞反应，作为阴性；同样将该标本稀释成1:80与致敏的红细胞反应，如出现明显之凝集现象为阳性对出现阳性的标本可进一步作1:5、1:10…的最高稀释倍数作为该血清样本的凝。【附 注】1以致病的梅毒螺旋体致敏明胶粒子代替细胞的TPPA试验与TPHA试验一样，在试原理，操作及的判断方面基致。TPPA商品化试剂盒供应；2．梅毒血清学检查，传统的康一华氏反应已被汰，目前常用的- - -方法除上述不加热血清反应素试（USRRPRTRUSTTPHATPPA外性病研试验VDRL及荧光螺旋体抗体吸收试验FTA-ABS等；其中的FTA-ABS、TPHA、TPPA，属特异性的密螺旋体抗原试验，而VDRLUSRPTRUST则用时常以其一筛选检查，而用FTA-ABS或TPHA或TPPA作证实试验。肿瘤免疫学检查甲胎蛋白（AFP）测定【方 法】ELISA法。【试 剂】本试验有商品试剂盒。【操 作】按试剂说明书进行。【结果判断】1．定性：显色为阳性，无色为阴性；2测492nm线（吸光度为纵坐标AFP含量为横坐标，得出标本中AFP含量，乘以稀释倍数后发出定量报告。【附 注】操作中有关要求可参考乙肝两对半试验定量的试剂目前以进口的ELISA法AFP测定试剂盒为佳。此外，也可用放疫（双抗体）- - -对AFP行定量测定，操售放免试剂盒说明书进行。自身抗体──类风湿因子（RF）测定类风湿性关节炎和红斑狼疮患者的血清中常存在高滴度的F，国普通使用胶乳验进行测定。此可用双抗原夹心ELISA法测定，其测作程序按市售试剂盒进行。【方 法】胶乳凝集试验。【试 剂】市售试剂盒。【操 作】按说明书进行。【结果判断】按说明书要求。【附 注】1．每次试验必须设阴、阳对照；2RF胶乳试剂应于4~10℃保存但不应冰冻贮藏使用前要摇匀，并使试剂温度与室温平衡；3本试验的RF主要是IM型RF关于测定F的G和A型的临床意义目前尚无明确定论。- - - 临床化学检验蛋白质测定血清总蛋白（TP）测定双缩脲法（常规测定，标化测定）【试 剂】选用市售优质试剂蛋白标准液使用市售定值参考血（非定值质控血清）【操 作】按试剂盒仪器专用说明书设置程序输入参数用自动或半自动生化分析仪自动测定或手工操色测定，波长540nm。【标 本】血清（血浆）一般空腹为宜，忌溶血。尿液：收集24小时的尿液，防腐，并记。血清白蛋白（ALB）测定溴甲酚绿法【试 剂】市售优质试剂。【操 作】按试剂盒及仪器使用说明书设置程序输入参数动或半自动生化分析仪自动测定，或手色测定，波长630nm。【标 本】- - -血清（浆）空腹为宜，忌溶血，室温可保存8小时,2~8℃可保存48小时。糖类测定体液葡萄糖测定1．葡萄糖氧化酶（GOD）法，波长505nm。2．已糖激酶（HK）法，波长340m。3．邻甲苯胺（O—TB）法，波长630nm。4．葡萄糖脱氢酶（GDH）法，波长340nm。【试 剂】市售优质试剂。【操 作】1如DO~TB法；2．按试剂及仪器的使用说明书设置程序，输入参数，用自动或半自动生化分析仪测定；3．手工测定推荐GOD，HK法宜用自动生化分测定，该法为公认的参考方法。【标 本】1．血清（一般空腹血为宜）或草酸钾—氟化钠抗凝血浆，若暂不能测定，应即时分离出血清密封4~8℃保存；2用GODHKO~TB应4~8℃保存；3集24h以OTB及GOD氧- - -电极法测定为宜。葡萄糖耐量试验（OGTT）【方 法】1．空腹抽血、留尿，送检空腹血糖及尿糖；2称取葡萄糖75克溶於20~300ml开水中令受试者一次服下，记下开始服糖的时间；3．服糖后每隔0.5h、1hh3h，各抽血留尿一次，送检血、尿糖；4．将各次所测血糖和尿糖定性结果以数字或曲线报告。受试者受试前三天可正常进食应停用胰岛素或其它降糖药；服糖后每血应准时，时间误差制在±3分钟以。无机离子测定钾钠测定火焰光度法（参考方法）【试 剂】钾、钠标准，市售，或自配。【操 作】严格按各厂家出售的火焰光度计的说明书操作用直接法或标法测定法每次测钠前测定几个标准液发光强度绘制准用12010160mmo/L三个钠标准液作比较法测定计算，钾可用单一标准液来计算测定。- - -离子选择电极（ISE）法【试 剂】由生产该仪器的厂家提供不同厂家其配方不尽相同不可相互代用。【操 作】按各厂家出产的电解质分析仪用说明书操作，经定标通过，稳定后用直接电位法或间接电位法测定。【标 本】当倍数稀释，使尿钾浓度在10mmo1/L以，尿钠测定读数应在高、中、低，三个标准液中的两个标准读。氯化物测定电极法【试 剂】定标液由生产该类分析仪的厂家提供各厂家的配尽相同不可相互替代使用。【操 作】各厂家生产的电解质分析仪一次进样可时测定KNa+CL—，操作程序与钾、钠电极法测定同。硝酸汞滴定法【试 剂】- - -市售试剂或参照有关书刊文献自配，滴定指示剂宜选二苯卡巴腙，该应贮於棕色瓶中保存。【操 作】按试剂说明书或相应文献规定的程序操作对溶血黄疸及混浊的血清，可用其无蛋白滴定。硫氰酸汞比色法【试 剂】市售现成试剂。【操 作】按试剂说明书的程序操作比色测定或试剂及仪器使用说明书要求设置程序输入参数用自动或半自动生化分析仪自动测定波长460m。【标 本】离子转移作用使测得结果偏高。血钙测定1．EDTA络合滴定法；2．邻甲酚酞络合酮比色法。波长：575n；3．甲基麝香草酚兰比色法。波长：610n；4．离子选择电极（ISE）法。- - -【试 剂】市售现成试剂。ISE法需用仪器生产厂家提供的定标（同钾钠氯IE测定法。【操 作】按ISE法钾钠氯钙电解质分析仪说明书操作；滴定法与比色法测得的是总钙，ISE法测得的为离子钙，离子钙的含量与样品的pH关,故所用的仪器应带有pH测定校正程序，以计算出在生理pH7.4）下的钙离子浓度。【标 本】血清或肝素抗凝之血浆，不可螯合剂或草酸盐抗凝的血浆。血气分析用血气与酸碱分析仪进分析，同时测定PCOPO、与pH三2 2项基本指标由此演算出气体酸碱断的其它各项指标血气分析属危重，抢救病人的监测项目。【试 剂】严格使用各仪器生产厂提供的与其仪器配套专用试剂厂家的试剂不可任，定标液清洗液室温存放即可。【标 本】肝素抗凝动脉血或动脉化的毛细血管血采血针管不得留有气泡血采出后立即用小塞或塑料塞密封采血管隔绝血液与外界空气的接触并立送检如暂不能送检应即时置4~8℃冰箱中保存，时间以不超过2小时为宜。【操 作】- - -血气与酸碱分析仪基本上分为带有电解质测定和不带有电解质测定二大的除带有电外尚带有葡萄糖Uea及乳酸的测定，在气体定标上，一类为直接标准气定标，另一类为仪器配气定标，严格按仪器明书规定操作、保养，测样前进行仪器，并输入病人抽血样时的体温，Hb含量等参数，定标通过，稳定后方可进行血样测定。酶类测定血清丙氨酸氨基移换酶（ALT）测定血清门冬氨酸氨基移换酶（AST）测定这两个酶的测定在方法上操作程序及试剂等的要求上本一致。赖氏（Reitman）法（比色法）【试 剂】0.015A此围则应试剂及仪器等方问题。【操 作】按试剂盒的说明书手工操作比色测定波长505nm先绘制好准曲线中查得该活性。酶偶联速率法（连续监测法）【试 剂】盒均可使用，目前推荐双试剂法，它是ALT、AST测定的首选法，市售- - -的ALTAST底物溶液其起始吸光度必须大於1.2A空须於5u/L，否则提示此试剂已不合格，不能使。【操 作】按试剂及仪器使用说明书设定程序输入参数化分析仪测定，波长340nm。【标 本】血清，忌溶血，血清应即时分离，室温可保存二天，4℃可保存一周，-25℃可保存一月，但不推荐冰冻保存，更不宜反复冻溶，遇有严重脂血或黄疸的血清样品，测定时应作血清标本对照管（赖氏法。血清碱性磷酸酶（ALP）测定连续监测法【试 剂】市售现成试剂，其中的磷酸对硝基苯酚底物液要求：1．酶水解转换率（4-NPP→4N）必须大於98%。24-NPP长311nm介质10mmo1/LNaOH温度25℃=986776L.mol–1·m–1。3．游离4-NP＜0.3mmo1/mo14-NPP；4．无机磷酸＜10mmo1/mo14-NPP。试剂应贮于棕色瓶中4~8℃保存。【操 作】按试剂盒及仪器说明书要求设定程序输入参数用自动或半自动生化分析仪测定，波长450nm。- - -比色法【试 剂】市售或按正式出版的书刊文献自配。【操 作】按试剂盒或相应文献规程比色测定波长510n标准曲线绘制，样品测定，查标准曲线求得ALP活力单位。【标 本】血清或肝素抗凝血浆。忌用草酸盐、柠檬酸盐，EDTA－Na抗凝2血。血清（尿液）淀粉酶测定碘一淀粉比色法【试 剂】底物缓冲淀粉液配好后其PH应在7.0±0.1围，贮冰箱保存。【操 作】长600nm。肝功能试验血清总胆红素（TBIL）和结合胆红素（DBIL）测定改良J~G法【试 剂】配- - -制标准液的胆红素应符合如下标准，纯胆红素的氯仿溶液在25℃当光径1.00±0.001m,波长453nm条件下其摩尔系数应在60700±1600围，偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74380±866围，配制标准液的稀释剂须含白蛋白可用牛血清白蛋白或人血清代替人血清白蛋白标应贮於棕色瓶中避光保存在市售试剂中以含碱性酒石酸的灵敏异性高。【操 作】按试剂盒说明书或相应书刊文献规程手工操作比色测定长.求IL及BIL的含量以mo1L报告。也可按厂家提供的试剂及仪器使用的说明书的要求将相应的程序及参数设入，用自动生化分析。【标 本】血清，空腹血为宜，脂血、脂色素及严重溶血干扰此测定，暂不能测定的标本应避光保存稳定8h8℃可保存48h。含叠氮钠作防腐剂的质控血清不宜用此胆红素。胆红素氧化酶（BOD）法【试 剂】市售成套试剂。BOD试剂复溶后2~8℃可保存一周。【操 作】按厂家提供的试剂及仪器说明书要求设置程序输入参数用自动生化分析仪测定。波长450或460nm。- - -【标 本】血清要求与改良J一G法相似。二甲亚枫（DMSO）法【试 剂】市售现成试剂。【操 作】按试剂盒说明书手工操作比色测定或用自动生化仪测定。波长560nm。【标 本】血清、轻度脂血，溶血标本对结果无明显影响、重度脂血、溶血标本须作标本空白进行较正。血清肌酐（Cr）测定碱性苦味酸去蛋白终点法【试 剂】市售试剂。【操 作】按试剂说明书手