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全内反射荧茫显撒镜展局展优势应用分型及结构基原理发展历史发展历史英光里微镜的概念细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发光;另有一些物质本身虽不能发樊光,但如用荧光染料或樊光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。发展历史全内反動英光显微术的发展历程在细胞生物学方面,传统光学显微镜始终不能解决生物枰本星微中的几个重要问题:1.显微图像的信噪此不高;2.光娠对生物样本照射的损伤3光学衍射所致的分辨极限(R≥0.61λ/nsin6):传统的光学星微饶由于受到光曈远场衍射效应的彩响存在分辨极限瑞利将之归纳为R≥0.61λ/nsin(u/2),其中R为分辨力,λ为成像光破波长,nin如/2)为物透镜的教值孔径,即NA值,u为孔径角,因此光学星微镜空间分辨极限~250nm全内反射英光显微术的发展历程近年来人们开发出了一系列光学显微镜。其中,全内反射荧光显微术Totalinternalreflectionfluorescencemicrosc。py,TRFM是近年来新兴的一种光学成像技术。肌纤后量,肌物探力的产,光所正地动蛋点动迹所)195年5(19年Yanagida小Moerner小组该项技术已经应用到组用TRFM技又用这项技术手)三华3单分子的研究中术首次在液体实现了限制在溶液中得到了丙烯酰胺胶体反射荧光荧光标记的单将金的米孔中的子的菱步个蛋白质分子单分子的三维全新的成像。成像。90年代80年代早1965年20新型物镜透镜、聚光如Aeod等生物物理学家对TRFM技术Hirschfield世镜和超灵敏探测器的世及基本原理进行描完成了纪出现,使TRFM技术纪述并探索了其生第一个得到充分发展「物应用。全内反射荧光实验基本原理全内反射荧光显微镜的基本设计思路全内反射荧光显微镜的基本原理基原理全内反射荧光显微镜的基本原理全内反射荧光显微镜的基本设计思路荧光激发原理金鲜杀全内反射荧光显微术是利用全内反射产生的消逝波激发样品从而使样品表面数百纳米厚的薄层内的荧光团受到激发荧光成像的信噪比大大提高。可以看到样品表面,单分子的活动情况。这种方法的成像装置简单,极易和其它成像技术、探测技术相结合,目前已成功的实现100nm甚至更低的空间分辨率。荧光激发原理<全的别Refractedsn定律:nisine1=n2sin82TR当n1大于∩2时,全反射就可能发生:62=9o°6c=sin-1(n2/n1)即所有的入射光线全部反射出来,称为全内反射荧光激发原理<Refracted非均匀波e,TIRn1>n2沿

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