食用菌菌种标准使用指南

食用菌菌种标准使用指南第1页，课件共46页，创作于2023年2月金科玉律种子法食用菌菌种管理办法黑木耳菌种GB19169-2003香菇菌种GB19170-2003双孢蘑菇菌种GB19171-2003平菇菌种GB19172-2003杏鲍菇和白灵菇菌种NY862-2004第2页，课件共46页，创作于2023年2月一、术语和定义我国食用菌菌种繁育体系菌种culture生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。第3页，课件共46页，创作于2023年2月一、术语和定义母种stockculture经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。

第4页，课件共46页，创作于2023年2月一、术语和定义原种motherspawn由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称二级种。

第5页，课件共46页，创作于2023年2月一、术语和定义栽培种spawn由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也称三级种。

第6页，课件共46页，创作于2023年2月一、术语和定义拮抗现象antagonism具有不同遗传基因的菌落间互相抑制产生不生长区带或形成不同形式线形边缘的现象。

第7页，课件共46页，创作于2023年2月一、术语和定义角变sectoring因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。第8页，课件共46页，创作于2023年2月一、术语和定义高温抑制线（高温圈）high-temperaturedline食用菌菌种在培养过程中受高温和通气不足的不良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象。第9页，课件共46页，创作于2023年2月一、术语和定义生物学效率biologicalefficiency单位数量培养料的风干物质所培养产生出的子实体或菌丝体质量（鲜重），常用百分数表示。如风干料100千克产生了新鲜子实体50千克，即为生物学效率50％。

种性charactersofvariety指食用菌的品种特性。一般包括生理特性、农艺性状和商品性状。第10页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

容器感官检验微生物学检验菌丝生长速度母种农艺性状和商品性状第11页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

母种质量要求容器：使用玻璃试管和棉塞试管18mm×180mm或20mm×200mm棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。第12页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

母种质量要求感官要求：项目要求容器完整，无损棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净、松紧适度，能满足透气和滤菌要求培养基灌入量为试管总容积的四分之一至五分之一培养基斜面长度顶端距棉塞40mm－50mm接种量（3-5）mm×（3-5）mm菌种外观菌丝生长量长满斜面菌丝体特征洁白浓密、棉毛状菌丝体表面均匀、平整、无角变菌丝分泌物无黑木耳黄褐色色素菌落边缘整齐杂菌菌落无斜面背面外观培养基不干缩，颜色均匀、无暗斑、无色素气味有特有香味，无酸、臭、霉等异味第13页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

项目要求备注菌丝生长状态粗壮、丰满、均匀黑木耳菌丝粗细不均，常出现根状分枝锁装联合有双孢蘑菇没锁状联合杂菌无第14页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

母种质量要求：菌丝生长速度：在PDA上，在适温下，长满斜面10d~14d。香菇：24±1℃10d~14d平菇：25±2℃6d~8d黑木耳：26±2℃10d~15d双孢蘑菇：24±1℃15d~20d母种栽培性状：供种单位，需经试验确证农艺性状和商品性等种性合格后，方可用于扩大繁殖或出售。产量性状：平菇生物学效率不低于10％双孢蘑菇需进行EST同工酶类型鉴定，判定与对照相同生物学效率不低于3％.第15页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

原种质量要求容器：使用650ml-750ml，耐126℃高温的无色或近无色的玻璃菌种瓶，或850ml耐126℃高温白色半透明符合GB9678卫生规定的塑料菌种瓶；或15cm×28cm耐126℃高温符合GB9688卫生规定的聚丙烯塑料袋；棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。也可以使用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞第16页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容原种质量要求感官要求：项目要求容器完整，无损棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净、松紧适度，能满足透气和滤菌要求培养基上表面距瓶（袋）口的距离50mm±5mm接种量（4－6）瓶（袋），≥12mm×15mm菌种外观菌丝生长量长满容器菌丝体特征洁白浓密、生长健旺培养物表面菌丝体生长均匀、无角变、无高温抑制线培养基及菌丝体紧贴瓶壁、无干缩培养基表面分泌物无，允许有少量深黄色至棕黄色水珠杂菌菌落无拮抗现象无子实体原基无允许有少量胶质、琥珀色颗粒状耳芽气味有特有香味，无酸、臭、霉等异味第17页，课件共46页，创作于2023年2月原基primordium

尚未分化的原始子实体的组织团。第18页，课件共46页，创作于2023年2月项目要求备注菌丝生长状态粗壮、丰满、均匀黑木耳菌丝粗细不均，常出现根状分枝锁装联合有双孢蘑菇没锁状联合杂菌无原种质量要求和母种质量要求相同微生物学要求：第19页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

原种质量要求：菌丝生长速度：在适宜培养基上，在适温（23±2℃）下，长满容器35d-50d。香菇（23±2℃）35d-50d。平菇（25±2℃）25d-30d。黑木耳（26±2℃）40d-45d。双孢蘑菇（24±1℃）≤45d。栽培性状（无），与母种不同第20页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

栽培种质量要求：容器：可以使用原种规定使用的容器；或≤17cm×35cm耐126℃高温符合GB9688卫生规定的聚丙烯塑料袋；第21页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

栽培种质量要求感官要求：项目要求容器完整，无损棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净、松紧适度，能满足透气和滤菌要求培养基上表面距瓶（袋）口的距离50mm±5mm接种量（30－50）瓶（袋）菌种外观菌丝生长量长满容器菌丝体特征洁白浓密、生长健旺培养物表面菌丝体生长均匀、无角变、无高温抑制线培养基及菌丝体紧贴瓶壁、无干缩培养基表面分泌物无，允许有少量深黄色至棕黄色水珠杂菌菌落无拮抗现象无子实体原基无允许有少量浅褐色至黑褐色菊花状或不规则胶质耳芽气味有特有香味，无酸、臭、霉等异味第22页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

栽培种质量要求和母种、原种质量要求相同微生物学要求：项目要求备注菌丝生长状态粗壮、丰满、均匀黑木耳菌丝粗细不均，常出现根状分枝锁装联合有双孢蘑菇没锁状联合杂菌无第23页，课件共46页，创作于2023年2月二、检测内容

栽培种质量要求：菌丝生长速度：在适宜培养基上，在适温（23±2℃）下，长满容器40d-50d。栽培性状（无），与母种不同，和原种相同第24页，课件共46页，创作于2023年2月三、抽样

质检部门的抽样应具有代表性；母种按品种、培养条件、接种时间分批编号；原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号。按批随机抽取被检样品母种、原种、栽培种抽样量10％、5％、1％抽样数量不得少于10支(瓶、袋)超过100支(瓶、袋)的，可进行两级抽样.第25页，课件共46页，创作于2023年2月四、试验方法感官检验微生物学检验菌丝生长速度母种农艺性状和商品性状留样第26页，课件共46页，创作于2023年2月四、试验方法感官检验肉眼观察必要时使用5×放大镜鼻嗅第27页，课件共46页，创作于2023年2月母种感官检验方法（一）1.棉塞或无棉塑料盖检测方法肉眼观察棉塞的材料、洁净度和干燥与否，手捏棉塞是否松紧适度，是否有弹性,手提棉塞外露部分，棉塞应不松动、不脱落。2.培养基灌入量按常规做培养基斜面的方法目测判断培养基灌入量，应为试管总容积的四分之一至五分之一。3.斜面长度用游标卡尺测量斜面的最上端量起至棉塞的最底部的距离（mm）。第28页，课件共46页，创作于2023年2月母种感官检验（二）4.接种块大小（接种量）

在无菌条件下挑出接种块,用游标卡尺测量接种菌丝面的长和宽，用mm×mm表示，保留整数位。5.菌种外观检测5.1菌丝生长量观察菌丝是否长满整个斜面。5.2菌丝体特征肉眼观察菌丝体的颜色、密集程度，菌丝体是否舒展、旺健及其形态（棉毛状、细羊毛状等）。第29页，课件共46页，创作于2023年2月母种感官检验（三）5.3菌丝体表面肉眼观察菌丝体是否生长均匀、平整，有无角变现象。5.4菌丝分泌物

肉眼观察有无分泌物，如有则记录分泌物的颜色和数量。5.5菌落边缘肉眼观察菌落边缘是否整齐。5.6杂菌菌落用放大镜观察菌丝体颜色和外观形态，根据颜色和形态是否有差异判定是否有杂菌菌落。第30页，课件共46页，创作于2023年2月母种感官检验（四）5.7虫（螨）体用放大镜观察培养物上有无虫（螨）体。6.斜面背面外观根据培养基是否与试管相脱离判断是否干缩；在充足的光线下，对着光源方向，观察颜色是否均匀，有无色素和暗斑。7.气味在无菌条件下打开棉塞（或无棉塑料盖），闻试管内气味是否正常。第31页，课件共46页，创作于2023年2月菌种退化在母种阶段的表现1.菌落形态不正常，如本来菌落平展的品种表现为菌落紧皱；丝状的气生菌丝变为雪花状；气生菌丝变多或变少甚至没有了；菌丝色泽变化，如多数种和品种在母种斜面上菌丝呈白色，退化了品种常呈现微黄色、浅褐色或其他色泽，或由鲜亮变暗淡；2.菌丝倒伏，生长势弱；3.长速变慢,过快或过慢都是不正常的；4.个体间长速和长相不均一；5.色素的出现。多数食用菌菌种在母种阶段不形成色素,如果出现色素,说明品种退化严重。第32页，课件共46页，创作于2023年2月四、试验方法微生物学检验菌丝生长状态和锁状联合用≥10×40的光学显微镜对培养物的水封片进行观察，每一检样应观察不少于50个视野。细菌检验：取少量疑有细菌污染的培养物，按无菌操作接种于(营养肉汤培养液)GB/T4789.28，25℃-28℃振荡培养1d-2d，观察培养液是否混浊。若混浊，则有细菌污染。霉菌检验：取少量疑有霉菌污染的培养物，按无菌操作接种于(PDA)GB/T4789.28，25℃-28℃培养5d-7d，菌落出现白色以外的杂色者，或有异味者为霉菌污染。必要时进行水封片进行观察。第33页，课件共46页，创作于2023年2月菌丝生长状态取干净载波片，滴1滴无菌水，用无菌操作方法挑取少量菌丝涂于水滴中，盖上盖玻片，置于10×40显微镜下观察菌丝形态，是否粗壮、丰满、均匀，是否有锁状联合。每一检样应检查不少于50个视野。第34页，课件共46页，创作于2023年2月锁状联合第35页，课件共46页，创作于2023年2月杂菌—细菌检验根据不同菌种选择适用的方法1.1在无菌条件下，挑取少许疑有细菌污染的培养物接种至肉汤培养液中，于25~28℃振荡培养1~2天，观察培养液是否浑浊，若浑浊则有细菌污染，澄清透明为未污染细菌。1.2在无菌条件下，挑取可疑或有代表性的样品，接种于肉汤培养基斜面或平板，于25~28℃振荡培养1~2天，观察培养基斜面是否有细菌菌落长出，有细菌菌落长出者做显微镜检查，确认是细菌，则判定为细菌污染；否则为无细菌污染。第36页，课件共46页，创作于2023年2月杂菌—霉菌检验挑取少许可疑的霉菌污染的培养物或有代表性的样品接至PDA培养基中，于25~28℃培养4天，出现其他色泽的菌落或其他形态的菌落或有异味的为霉菌污染物，必要时进行水封片镜检。第37页，课件共46页，创作于2023年2月第38页，课件共46页，创作于2023年2月四、试验方法菌丝生长速度母种：PDA24℃±1℃原种和栽培种：规定的培养基（24℃±1℃）计算长满天数。第39页，课件共46页，创作于2023年2月母种生长速度检测方法菌种不同,对母种生长速度的测定方法和要求亦不同：选择A.1或A.2培养基配方，配制后按菌种生产标准要求分装于试管（18×180mm或20×200mm）中，121℃灭菌30min，取出摆成斜面或制备培养基平板（90mm），冷却，随机抽取10~20支斜面或3个培养基平板置于28℃±2℃培养24小时，确认灭菌良好后使用。将待检菌种接种于PDA培养基或CPDA培养基上，接种块（3~5）×（3~5）mm，置于斜面中央偏下或培养皿中央，恒温培养箱适宜条件下培养，计算长满斜面的天数。三个重复。第40页，课件共46页，创作于2023年2月四、试验方法母种农艺性状和商品性状将被检母种制成原种。规定的培养基；菌棒45根接种后，分三组进行管理做好栽培记录与该母种的出发菌株设为对照黑木耳含水量62％±2％双孢蘑菇含水量68％360kg，分3组，每组2m2双孢蘑菇酯酶同工酶母种长满所需时间总产原种长满所需时间单产菌棒长满所需时间单菇质量第一潮产量最高的时间生物学效率