分子生物学原核基因表达调控-课件

分子生物学原核基因表达调控Contents基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控第一节基因表达调控的基本概念一、基因表达的概念geneexpression

:基因转录及翻译的过程。对这个过程的调节就称为generegulation

。rRNA、tRNA编码基因转录合成RNA的过程也属于基因表达

永久型性表达(constitutiveexpression)习惯型表达(adaptiveexpression)二、基因表达的方式

1、永久型表达:

指不大受环境变动而变化的一类基因表达。某些基因在一个个体的几乎所有细胞中持续表达,通常被称为管家基因(housekeepinggene)。2、习惯性表达指环境的变化容易使其表达水平变动的一类基因表达。应环境条件变化基因表达水平增高的现象称为诱导(induction),这类基因被称为可诱导的基因(induciblegene);相反,随环境条件变化而基因表达水平降低的现象称为阻遏(repression),相应的基因被称为可阻遏的基因(repressiblegene)。

三、基因表达的规律

——时间性和空间性1、时间特异性(temporalspecificity)按功能需要，某一特定基因的表达严格按特定的时间顺序发生，称之为基因表达的时间特异性。多细胞生物基因表达的时间特异性又称阶段特异性(stagespecificity)。

2、空间特异性(spatialspecificity)基因表达伴随空间顺序所表现出的这种分布差异,实际上是由细胞在器官的分布决定的,因此空间特异性又称细胞或组织特异性(cellortissuespecificity)。在个体生长全过程,某种基因产物在个体按不同组织空间顺序出现,称之为基因表达的空间特异性。四、基因表达调控的生物学意义

习惯环境、维持生长和增殖(原核、真核)

维持个体发育与分化(真核)第二节原核基因调控机制内容提要:原核基因表达调控环节操纵子学说原核基因调控机制的类型与特点转录水平上调控的其他形式

一、基因表达调控环节1、转录水平上的调控(transcriptionalregulation)2、转录后水平上的调控(post-transcriptionalregulation)①

mRNA加工成熟水平上的调控②

翻译水平上的调控二、操纵子学说1、操纵子模型的提出1961年,Monod和Jacob提出获1965年诺贝尔生理学和医学奖JacobandMonod2、操纵子的定义操纵子:是基因表达的协调单位,由启动子、操纵基因及其所控制的一组功能上相关的结构基因所组成。操纵基因受调节基因产物的控制。

1、依照操纵子对调节蛋白(阻遏蛋白或激活蛋白)的应答,可分为:正转录调控

负转录调控

三、原核基因调控机制的类型与特点调节基因操纵基因结构基因阻遏蛋白激活蛋白正转录调控负转录调控正转录调控假如在没有调节蛋白质存在时基因是关闭的,加入这种调节蛋白质后基因活性就被开启,如此的调控正转录调控。调节基因操纵基因结构基因阻遏蛋白激活蛋白正转录调控负转录调控负转录调控在没有调节蛋白质存在时基因是表达的,加入这种调节蛋白质后基因表达活性便被关闭,如此的调控负转录调控。可诱导调节(P235):指一些基因在特别的代谢物或化合物的作用下,由原来关闭的状态转变为工作状态,即在某些物质的诱导下使基因活化。例:大肠杆菌的乳糖操纵子分解代谢蛋白的基因2、依照操纵子对某些能调节它们的小分子的应答,可分为可诱导调节和可阻遏调节两大类:调节基因操纵基因结构基因阻遏蛋白调节基因操纵基因结构基因阻遏蛋白诱导物mRNA酶蛋白酶合成的诱导操纵子模型诱导物假如某种物质能够促使细菌产生酶来分解它,这种物质就是诱导物。可阻遏调节(P235):基因平常是开启的,处在产生蛋白质或酶的工作过程中,由于一些特别代谢物或化合物的积累而将其关闭,阻遏了基因的表达。例:色氨酸操纵子合成代谢蛋白的基因酶合成的阻遏操纵子模型调节基因操纵基因结构基因mRNA酶蛋白调节基因操纵基因结构基因辅阻遏物辅阻遏物假如某种物质能够阻止细菌产生合成这种物质的酶,这种物质就是辅阻遏物。3、在负转录调控系统中,调节基因的产物是阻遏蛋白(repressor),起着阻止结构基因转录的作用。依照其作用特征又可分为负控诱导和负控阻遏:在负控诱导系统中,阻遏蛋白与效应物(诱导物)结合时,结构基因转录;在负控阻遏系统中,阻遏蛋白与效应物(辅阻遏物)结合时,结构基因不转录。4、在正转录调控系统中,调节基因的产物是激活蛋白(activator)。依照激活蛋白的作用性质分为正控诱导和正控阻遏在正控诱导系统中,效应物分子(诱导物)的存在使激活蛋白处于活性状态;在正控阻遏系统中,效应物分子(辅阻遏物)的存在使激活蛋白处于非活性状态。四、转录水平上调控的其他形式1、σ因子的更换

在E、coli中,当细胞从基本的转录机制转入各种特定基因表达时,需要不同的因子指导RNA聚合酶与各种启动子结合。大肠杆菌中的各种σ因子比较σ因子编码基因主要功能σ70rpoD参与对数生长期和大多数碳代谢过程基因的调控σ54rpoN参与多数氮源利用基因的调控σ38rpoH分裂间期特异基因的表达调控σ32rpoS热休克基因的表达调控σ28rpoF鞭毛趋化相关基因的表达调控σ24rpoE过度热休克基因的表达调控温度较高,诱导产生各种热休克蛋白由σ32参与构成的RNA聚合酶与热休克应答基因启动子结合,诱导产生大量的热休克蛋白,习惯环境需要枯草芽孢杆菌芽孢形成有序的σ因子的替换,RNA聚合酶识别不同基因的启动子,使芽孢形成有关的基因有序地表达σ

70与σ

54的比较(P234)与DNA结合区域不同σ

70-35区和-10区σ

54-24区和-12区与启动子结合顺序不同σ

70

在核心酶结合到DNA链上后才能与启动子结合σ

54

可在无核心酶的情况下独立结合到启动子上,类似于真核TATA区结合蛋白。2、弱化子对基因活性的影响起信号作用的是:有特别负载的氨酰-tRNA的浓度例:大肠杆菌中的色氨酸操纵子、苯丙氨酸操纵子、苏氨酸操纵子、异亮氨酸操纵子和缬氨酸操纵子;沙门菌的组氨酸操纵子和亮氨酸操纵子、嘧啶合成操纵子等弱化子:当操纵子被阻遏,RNA合成被终止时,起终止转录信号作用的那一段核苷酸被称为弱化子。属于转录调节中的微调整。3、降解物对基因活性的调节降解物抑制作用的调节:提高基因的转录水平,使它由原来的低水平表达变成高水平表达。葡萄糖效应(降解物抑制作用):有葡萄糖存在时,即使加入乳糖、半乳糖或其他的诱导物,与其相应的操纵子也可不能启动,可不能产生出代谢这些糖的酶来,这种现象就称~。Why?P236降解物抑制作用是通过提高转录强度来调节基因表达的,是一种积极的调节方式。4、细菌的应急反应应急反应的信号是:鸟苷四磷酸和鸟苷五磷酸。产生这两种物质的诱导物是:空载tRNA当AA饥饿时,空载tRNA大量存在,激活焦磷酸转移酶,使鸟苷四磷酸大量合成,而鸟苷四磷酸的出现会关闭许多基因,也会打开一些合成AA的基因,以应付这种紧急状况。鸟苷四磷酸作用原理有待深入研究影响一大批操纵了,属于超级调控因子。Contents基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控一、乳糖操纵子的结构Z编码β-半乳糖苷酶:将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖。Y编码β-半乳糖苷透过酶:使外界的β-半乳糖苷(如乳糖)能透过大肠杆菌细胞壁和原生质膜进入细胞内。A编码β-半乳糖苷乙酰基转移酶:乙酰辅酶A上的乙酰基转到β-半乳糖苷上,形成乙酰半乳糖。二、酶的诱导——lac体系受调控的证据科学家把大肠杆菌细胞放在加有放射性35S标记的氨基酸但没有任何半乳糖诱导物的培养基中繁殖几代。再将这些带有放射活性的细菌转移到不含35S、无放射性的培养基中,随着培养基中诱导物的加入,β-半乳糖苷酶便开始合成。分离β-半乳糖苷酶,发现这种酶无35S标记。说明酶的合成不是由前体转化而来的,而是加入诱导物后新合成的。

安慰诱导物:

假如某种物质能够促使细菌产生酶而本身又不被分解,这种物质被称为安慰诱导物,如IPTG(异丙基-β

–D-硫代半乳糖苷)。三、乳糖操纵子调控模型主要内容:①Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码

②这个mRNA分子的启动子紧接着O区,而位于I与O之间的启动子区(P),不能单独起动合成β-半乳糖苷酶和透过酶的生理过程。lacP:从I基因结束到mRNA转录起始位点止,共长82bp(-82～+1)③操纵基因O是DNA上的一小段序列(仅为26bp),是阻遏物的结合位点。位于P区后半部分和转录起始区。实验表明,阻遏物与O区的结合影响了RNA聚合酶与启动子结合形成转录起始复合物的效率。RNA聚合酶结合部位阻遏物结合部位

④当阻遏物与操纵基因结合时,lacmRNA的转录起始受到抑制。

⑤诱导物通过与阻遏物结合,改变它的三维构象,使之不能与操纵基因结合,从而激发lacmRNA的合成。当有诱导物存在时,操纵基因区没有被阻遏物占据,因此启动子能够顺利起始mRNA的合成。永久型突变:lacOc

——改变“锁头”永久型突变:lacI-——丢失“钥匙”

不可诱导突变(超阻遏)——改善钥匙四、影响因子1、lac操纵子的本底水平表达有两个矛盾是操纵子理论所不能解释的:①诱导物需要穿过细胞膜才能与阻遏物结合,而转运诱导物需要透过酶,后者的合成又需要诱导。解释:一些诱导物能够在透过酶不存在时进入细胞？一些透过酶能够在没有诱导物的情况下合成？√②真正的诱导物是异构乳糖而非乳糖,前者是在β-半乳糖甘酶的催化下由乳糖形成的,因此,需要有β-半乳糖甘酶的预先存在。解释:本底水平的组成型合成:非诱导状态下有少量的lacmRNA合成。2、大肠杆菌对乳糖的反应培养基:甘油

依照lac操纵子本底水平的表达,每个细胞内有几个分子的β-半乳糖苷酶和β-半乳糖苷透过酶;培养基:加入乳糖少量乳糖透过酶进入细胞β-半乳糖苷酶异构乳糖诱导物诱导lacmRNA的生物合成大量乳糖进入细胞多数被降解为葡萄糖和半乳糖(碳源和能源)异构乳糖(诱导物)乳糖诱导物的加入和去除对lacmRNA的影响3、阻遏物lacI基因产物及功能Lac操纵子阻遏物mRNA是由弱启动子控制下组成型合成的,每个细胞中有5-10个阻遏物分子。当I基因由弱启动子突变成强启动子,细胞内就不估计产生足够的诱导物来克服阻遏状态,整个lac操纵子在这些突变体中就不可诱导。4、葡萄糖对lac操纵子的影响假如将葡萄糖和乳糖同时加入培养基中,lac操纵子处于阻遏状态,不能被诱导;一旦耗尽外源葡萄糖,乳糖就会诱导lac操纵子表达分解乳糖所需的三种酶。代谢物阻遏效应5、cAMP与代谢物激活蛋白代谢物激活蛋白CRP由Crp基因编码,它可与cAMP形成复合物(cAMP

-CRP),此复合物是激活lac的重要组成部分,细菌对它的需要是独立的,与阻遏体系无关,转录必需有cAMP

–CRP复合物结合在启动子区域上。cAMP-CRP复合物是一个不同于阻遏物的正调控因子。Lac操纵子的功能是在这两个相互独立的调控体系作用下实现的。ZYAOPDNA调控区CAP结合位点启动序列操纵序列结构基因Z：β-半乳糖苷酶Y：透酶A：乙酰基转移酶cAMP—CRP复合物P244图7-15cAMP-CAP不但能与DNA相结合,造成双螺旋弯曲,易于形成三元转录起始复合物,它还能直截了当影响RNA聚合酶的活性。ATP腺甘酸环化酶cAMP(环腺甘酸)

大肠杆菌中,cAMP的浓度受到葡萄糖代谢的调节:缺乏碳源,cAMP浓度高有葡萄糖,cAMP浓度低只有甘油或乳糖等不进行糖酵解途径的碳源,cAMP浓度高;——推测糖酵解途径中位于葡糖-6-磷酸与甘油之间的某些代谢产物是腺苷酸环化酶活性的抑制剂。

++++转录无葡萄糖,cAMP浓度高时促进转录有葡萄糖,cAMP浓度低时不促进转录ZYAOPDNACAPCAPCAPCAPCAPCAPCAP的正调控TheLacOperon:

WhenGlucoseIsPresentButNotLactoseRepressorPromoterLacYLacALacZOperatorCAPBindingRNAPol、RepressorRepressorRepressormRNAHeyman,I’mconstitutiveeon,letmethroughNowayJose!CAPTheLacOperon:

WhenLactoseIsPresentButNotGlucoseRepressorPromoterLacYLacALacZOperatorCAPBindingRepressorRepressormRNAHeyman,I’mconstitutiveCAPcAMPLacRepressorRepressorXThislactosehasbentmeoutofshapeCAPcAMPCAPcAMPBindtomePolymeraseRNAPol.RNAPol、Yipee…!TheLacOperon:

WhenNeitherLactoseNorGlucoseIsPresentRepressorPromoterLacYLacALacZOperatorCAPBindingCAPcAMPCAPcAMPCAPcAMPBindtomePolymeraseRNAPol、RepressorRepressormRNAHeyman,I’mconstitutiveRepressorSTOPRighttherePolymeraseAlright,I’mofftotheraces...eon,letmethrough!五、Lac操纵子中的其他问题1、A基因及其生理功能半乳糖苷分子β-半乳糖苷酶分解产物(体内积累,抑制生长)β-半乳糖苷乙酰基转移酶半乳糖苷分子乙酰化半乳糖苷分子β-半乳糖苷酶×2、lac基因产物数量上的比较β-半乳糖苷酶:透过酶:乙酰基转移酶=1:0、5:0、2,Why?不同的酶在数量上的差异是由于在翻译水平上受到调节所致。(1)lacmRNA估计与翻译过程中的核糖体相脱离,从而终止蛋白质链的翻译;(后续的AUG密码子再度起始翻译的概率)(2)在lacmRNA分子内部,A基因比Z基因更容易受内切酶作用发生降解。3、操纵子的融合与基因工程(基因融合技术)POZYAtsxPOpur结构基因缺失lacoperonpuroperon控制细胞对T6噬菌体敏感性Contents基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控一、色氨酸操纵子的结构

调控基因结构基因

催化分枝酸转变为色氨酸

的酶(P247图7-77)

trpRtrpGF特点:(1)trpR和trpABCDE不连锁;

(2)操纵基因在启动子内

(3)有衰减子(attenuator)/弱化子(4)启动子和结构基因不直截了当相连,二者被前导序列(Leader)所隔开二、trp操纵子的阻遏系统低Trp时:阻遏物不结合操纵基因;高Trp时:阻遏物+Trp结合操纵基因三、trp操纵子的弱化机制衰减子(attenuator)/弱化子前导序列(leadersequence)1、弱化子:DNA中可导致转录过早终止的一段核甘酸序列(123-150区)。123~150

研究引起终止的mRNA碱基序列,发现该区mRNA通过自我配对能够形成茎-环结构,有典型的终止子特点。2、前导序列:在trpmRNA5'端trpE基因的起始密码前一个长162bp的mRNA片段。3、弱化机制

前导肽转录终止结构细菌通过弱化作用弥补阻遏作用的不足,因为阻遏作用只能使转录不起始,关于差不多起始的转录,只能通过弱化作用使之中途停下来。阻遏作用的信号是细胞内色氨酸的多少;弱化作用的信号则是细胞内载有色氨酸的tRNA的多少。它通过前导肽的翻译来控制转录的进行,在细菌细胞内这两种作用相辅相成,体现着生物体内周密的调控作用。

——翻译如何调节转录终止？

——转录终止有哪些机制？Contents基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控第五节其他操纵子一、半乳糖操纵子(galactoseoperon)异构酶(galE)乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶(galT)

半乳糖激酶(galk)。gal操纵子的特点:①它有两个启动子,其mRNA可从两个不同的起始点开始转录;②它有两个O区,一个在P区上游,另一个在结构基因galE内部。二、阿拉伯糖操纵子(arabinoseoperon)araB基因、araA基因和araD,形成一个基因簇,简写为araBAD三个基因的表达受到ara操纵子中araC基因产物AraC蛋白的调控。

ara操纵子的调控有两个特点:第一,araC表达受到AraC的自身调控。第二,AraC既是ara操纵子的正调节蛋白(需cAMP-CRP的共同参与,起始转录),又是其负调节蛋白。这种双重功能是通过AraC蛋白的两种异构体来实现的(Pi和Pr)。Contents基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控一、翻译起始的调控RBS(核糖体结合位点):mRNA链上起始密码子AUG上游的一段非翻译区。RBS的结合强度取决于SD序列的结构及其与起始密码子AUG之间的距离。SD-4-10(9)-AUG第六节转录后水平上的调控二、稀有密码子对翻译的影响dnaG(引物酶)RNA引物dnaG、rpoD和rpsU属于大肠杆菌基因组上的同一个操纵子50个拷贝的dnaG蛋白、2800个拷贝的rpoD和40000个拷贝的rpsU几种蛋白质中异亮氨酸密码子使用频率比较蛋白质AUU/%AUC%AUA%结构蛋白37621σ亚基26740DnaG蛋白363232细胞内对应于稀有密码子的tRNA较少,高频率使用这些密码子的基因翻译过程容易受阻,影响了蛋白质合成的总量。三、重叠基因对翻译的影响TrpB–谷氨酸-异亮氨酸-终止GAA--AUC--UGA--UGG--AAAUG--GAA

甲硫氨酸–

谷氨酸–trpAtrpE—苏氨酸—苯丙氨酸—终止

ACU--UUC--UGA--UGG--CUAUGAUG–GCU

甲硫氨酸--丙氨酸--trpD翻译终止时核糖体马上处在起始环境中,这种重叠的密码子保证了同一核糖体对两个连续基因进行翻译的机制。1、关于管家基因叙述错误的是

(A)在生物个体的几乎各生长时期持续表达

(B)在生物个体的几乎所有细胞中持续表达

(C)在生物个体全生命过程的几乎所有细胞中表达

(D)在生物个体的某一生长时期持续表达

(E)在一个物种的几乎所有个体中持续表达D2、一个操纵子(元)通常含有

(A)数个启动序列和一个编码基因

(B)一个启动序列和数个编码基因

(C)一个启动序列和一个编码基因

(D)两个启动序列和数个编码基因

(E)数个启动序列和数个编码基因B3、下列情况不属于基因表达时期特异性的是,一个基因在

(A)分化的骨骼肌细胞表达,在未分化的心肌细胞不表达

(B)胚胎发育过程不表达,出生后表达

(C)胚胎发育过程表达,在出生后不表达

(