色谱柱的维护及保养

色谱柱的维护及保养第1页，课件共27页，创作于2023年2月色谱填料的种类及参数色谱柱评价的注意事项色谱柱在使用过程中容易出现的问题及解决办法色谱柱的保存第2页，课件共27页，创作于2023年2月色谱柱是液相色谱仪的心脏

现代高效液相色谱中,不要总是首先埋怨仪器!!!分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择.但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解第3页，课件共27页，创作于2023年2月一.色谱填料的种类及性能参数1.种类填料基质

第4页，课件共27页，创作于2023年2月2.填料粒度商品化的填料从1μm~30μm目前常用于分析3μm,5μm,10μm用于半制备10μm,15μm用于制备15μm~40μm

3μm

填料第5页，课件共27页，创作于2023年2月

3.

性能参数

HypersilSinoChrom

第6页，课件共27页，创作于2023年2月

HypersilBDS第7页，课件共27页，创作于2023年2月

BetasilSpherisorb第8页，课件共27页，创作于2023年2月

KromasilLiChrosorb第9页，课件共27页，创作于2023年2月不同品牌填料性能参数比较第10页，课件共27页，创作于2023年2月注意事项:1.参数品牌批号不同分离效果有差异2.

相同粒度球形无定形压力不同3.

国产进口填料寿命不同

如:氟苯法分析氨基酸酯溶性维生素D小结:

1.换不同品牌色谱柱需要重新摸条件

2.能用短柱不用长柱

3.能用进口柱不用国产柱第11页，课件共27页，创作于2023年2月二.色谱柱评价注意事项1.尽量减少死体积第12页，课件共27页，创作于2023年2月2.色谱柱的评价

流动相条件

第13页，课件共27页，创作于2023年2月

流速设定

柱效N=5.54(tr/tg)2

第14页，课件共27页，创作于2023年2月三.色谱柱使用过程中易出现的问题及解决办法1.谱图分叉首先判断柱头是否柱头塌陷?(按色谱柱评价报告的条件评价色谱柱)第15页，课件共27页，创作于2023年2月修补前后现象

第16页，课件共27页，创作于2023年2月样品分解第17页，课件共27页，创作于2023年2月现象原因解决办法柱头塌陷流动相含盐时,冲洗系统要用20%~50%的甲醇／水不要用纯水冲柱,

修补色谱柱柱外死体积检查进样阀,色谱柱,检测器的管路连接有无死体积,

更换密封环(刃环).柱头填料污染严格过滤流动相和样品,

修补色谱柱进样阀密封问题

检修进样阀样品分解光分解,氧化分解,溶剂分解采取相应措施色谱柱填充不实色谱柱填充重新装填色谱柱受到强烈振动重新装填第18页，课件共27页，创作于2023年2月色谱柱的修复第19页，课件共27页，创作于2023年2月柱头塌陷修复办法拧下柱头螺帽(最好在台虎钳上)用尖针轻轻除掉柱头表面的污染填料取少量与色谱柱相同的新填料,调成浆糊状(正相用正己烷,反相用甲醇)填实柱头(轻轻下压)更换柱头过滤板,将柱头螺帽拧紧(柱头填料下陷>3mm修复后效果也不会理想第20页，课件共27页，创作于2023年2月2.泵压力升高不要认为压力高就是色谱柱的问题

首先判断是否是色谱系统管路阻塞?

方法:

(分段检查在线过滤器→进样阀→色谱柱→

检测器→排液管)第21页，课件共27页，创作于2023年2月现象原因及解决办法现象原因解决办法在线过滤器阻塞溶剂过滤不好或密封圈磨损,用30%硝酸超声在线过滤器,再用水超声.进样阀定量管阻塞样品过滤不好,更换定量管管路阻塞缓冲液中的盐遇到甲醇结晶,高压反冲,加热或更换管路色谱柱阻塞柱头滤板阻塞,

缓冲液中的盐遇到甲醇结晶,反冲或更换柱头滤板系统用20%甲醇／水,彻底置换后,接上色谱柱小流量反冲第22页，课件共27页，创作于2023年2月四.色谱柱的保存系统及填料储存溶剂正相系统(CN,NH2,SiO2)正己烷反相系统(C18,C8,C4,CN,NH2)纯甲醇或纯乙腈特殊填料(手性,专用柱)按说明书要求第23页，课件共27页，创作于2023年2月

短期不用必须冲洗干净后保存.

长期不用每隔2~3个月冲洗一次防止强烈振动第24页，课件共27页，创作于2023年2月正相系统换反相系统注意事项

1.

首先用正己烷(硅胶柱)将色谱系统包括正相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现)2.

卸掉硅胶柱,封好保存,3.

将进样阀与检测器短路,用异丙醇冲洗色谱系统10分钟(流速1ml/min).在这期间空拨进样阀三次.4.

换甲醇(或已睛)冲洗系统20分钟(流速2ml/min).此期间空拨进样阀三次.5.

安上反相色谱柱,流速调到1ml/min,用甲醇(或已睛)冲洗系统,,直到系统平衡.6.

进三针标准品,检验面积﹑保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复.第25页，课件共27页，创作于2023年2月反相系统换正相系统注意事项1.首先用甲醇(或已睛)将色谱系统包括反相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现)2.卸掉反相柱,封好保存,3.将进样阀与检测器短路,用异丙醇冲洗色谱系统

10分钟(流速1ml/min).在这期间空拨进样阀三次.4.换正己烷(硅胶柱)冲洗系统20分钟(流速2ml/min).此间空拨进样阀三次.5.安上硅胶色谱柱,流速调到1ml/min,用正己烷冲洗系统,

直到系统平衡.6.进三针标