微生物检验常用技术与方法-微生物商品手工和自动化检验（微生物检验课件）

1.全自动细菌鉴定及药敏分析仪学习目标1.掌握全自动细菌鉴定及药敏分析仪的原理2.熟悉全自动细菌鉴定及药敏分析仪的基本结构和配套试剂第四节微生物检验的自动化和微型化一、微生物自动鉴定仪器的的自动化和微型化（1）数据库由许多细菌条目组成，每个条目代表一个细菌种或一个细菌生物型。（2）编码将细菌生化反应模式转换成数学模式，可把生化反应结果快速转录成数字（编码），经查阅编码检索本或电脑分析系统又可将数字转化成相应的细菌名称。（3）查码在编码检索本内寻找数码信息：如菌名，鉴定结果的评价，生化结果，阳性百分率，必须增加的补充试验项目，指出注意要点等。微生物数码分类1、原理（4）解释

如果一个编码只对应一种细菌，无论几率大小，为该种细菌的可能性(ID%)均为99.99%。如果一个编码对应两种或两种以上种类的细菌，应计算每种细菌出现的几率所占的百分比ID%。如ID%≥99%，为该种菌的可能性非常大；如ID%≥90%，为该种菌的可能性较大；如ID%≥80%，为该种菌的可能性也较大，但需做补充试验进一步确证；如ID%<80%，则一般无法准确区分菌种，必须增加多个补充试验才可得出准确结果。2、微生物自动鉴定仪器的基本结构和配套试剂（1）数码分类鉴定系统的组成由鉴定卡、添加试剂及检索工具配套形成的完整的微生物鉴定体系。鉴定卡常用的生化反应有：①发酵试验；②同化试验；③同化或发酵抑制试验；④酶试验；⑤其他传统的生化反应。添加试剂：有些试验经孵育后需添加试剂才能呈现颜色变化。添加的试剂有配套试剂盒或单种试剂。检索工具：检索工具可由电脑自动处理并报告。

自动化药敏试验使用药敏试验卡进行检测，实质就是微型化的肉汤稀释试验。根据不同的药物对不同菌种最低抑菌浓度（minimalinhibitoryconcentration,MIC）的不同，每一种药物一般选用3种或以上不同药物浓度，每一药敏试验卡（板）可同时检测约20种抗生素的药敏试验结果。药敏试验检测原理有：光电比浊法测定细菌浓度、荧光标记法测定荧光强度的变化、氧化还原指示剂检测细菌生长代谢产物等方法。经数小时孵育后，每隔一定时间自动测定每一药敏试验孔中细菌生长情况，与细菌生长对照孔的结果进行比较计算出生长率。

将药敏试验卡中各测定孔的生长率在数据库中进行比较分析，可得到最低抑菌浓度MIC值，常参照相关标准，判断最终结果为敏感(S)、中度敏感(MS)和耐药(R)，并对结果进行解读。二、

微生物药敏试验的自动化和微型化1、原理

微生物自动鉴定系统大多与药敏试验系统组合在一起，药敏试验系统常配备计算机专家系统。

药敏试验卡是系统的工作基础，一般与鉴定卡配套，常分为革兰阴性菌、革兰阳性菌、厌氧菌、苛氧菌、酵母菌等的药敏试验卡。

（1）药敏试验卡的保存（2）接种的菌液浓度（3）检验信息系统的应用2、仪器的基本结构和配套试剂3、注意事项及影响因素2.血培养仪学习目标1.掌握血培养仪的操作原理2.熟悉血培养仪的基本结构和配套试剂（一）放射性物质标记法一般采用放射性碳14标记法：细菌生长时利用标记底物产生含14C的CO2，当14C标记的CO2量超过界限时，检测器报告阳性生长。（二）二氧化碳感受器每一血液培养瓶底部都含有Novel颜色感应器，当血液培养瓶内有微生物生长释出之CO2后，感应器之酸碱值也跟着改变，从深绿色变为黄色，检测器报告阳性。（三）均质荧光技术在血培养基内含有发荧光物质。微生物生长代谢过程中产生各种带电荷的原子团，培养瓶发出的荧光，即可检测有细菌存在。一、工作原理

全自动恒温孵育系统包括恒温装置和震荡培养装置，仪器培养瓶容量常分为60瓶、120瓶、240瓶等，对培养瓶进行震荡恒温培养，温度常设为37℃。仪器均配置电脑，在电脑上可设置培养时间、温度等参数，显示阳性或阴性瓶所在的位置，及自动分析。（一）注意事项及结果报告制度1.培养瓶的选择

如果患者未使用抗生素，可选择一般需氧菌培养瓶，如果已经使用抗生素则选用可中和血液中抗生素的培养瓶。如怀疑厌氧菌、L型菌、真菌、分枝杆感染，则选用厌氧菌培养瓶、L型菌培养瓶、真菌培养瓶、分枝杆菌培养瓶。2.采血时间

对入院患者中有高热、寒战、白细胞增多或疑有感染者，最好在使用抗生素前采血送检。住院患者出现发热等败血症症状时，应及时采血，尽可能在使用抗生素前采血。已使用抗生素的患者最好在下次使用抗生素前采血。二、仪器的基本结构和配套试剂3.采血量

采血量一般为血培养瓶中肉汤培养基量的1/4-1/5为宜，成人一般每次采集3-10ml，以8-10ml最佳，小儿一般每次采集1-3ml即可。每天最好采血2-3次，以提高检出率，并帮助判断是感染菌或污染菌。4.采血方法

一般多从肘静脉采血，采集前应严格消毒采血部位，采血过程中注意无菌操作，否则易被皮肤表面细菌污染，导致假阳性。使用真空采血系统，利用配套的一次性使用的无菌采血管，血液因负压作用进入培养瓶中。5.标本送