需氧和兼性厌氧性球菌鉴定-葡萄球菌的鉴定（微生物检验课件）

需氧和兼性厌氧球菌对人有致病性的球菌主要引起化脓性炎症,又称化脓性球菌。G+：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、肠球菌G-:脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌葡萄球菌属

(Staphylococcus)分布广泛，多为非致病菌。模式种：金黄色葡萄球菌（S.aureus）。（一）形态与染色

G+，球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。一、生物学特性（二）培养特性营养：要求不高，某些菌株耐盐(10-15%)。普通琼脂平板、血液琼脂平板生长特点不同。

液体：均匀浑浊生长。金黄色葡萄球菌：高盐甘露醇平板为淡橙黄色菌落；羊血琼脂平板为金黄色菌落。

金黄色葡萄球菌菌落特征（高盐甘露醇平板）金黄色葡萄球菌菌落特征（血平板）中等大，突起，有色素，S型菌落。葡萄球菌菌落形态（普通琼脂平板）金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌金黄色葡萄球菌有透明溶血环。表皮葡萄球菌无溶血环。（三）生化反应

活泼，分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。(如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇）

分解甘露醇、产生血浆凝固酶、耐热核酸酶阳性是致病菌的主要特征。

触酶（＋）（区别于链球菌属）血浆凝固酶试验［原理］致病性葡萄球菌能产生２种血浆凝固酶：一种为结合型凝固酶，细菌表面的纤维蛋白原受体与血浆中的纤维蛋白原结合，导致细菌凝集。另一种为游离型凝固酶，可被人或兔血浆中的协同因子激活，成为凝血酶样物质，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固。

［检测方法］结合型凝固酶：玻片法游离型凝固酶：试管法玻片法操作：（1）准备玻片（2）金葡白葡（3）滴加兔血浆（4）观察结果试管法操作：耐热核酸酶试验液体培养物煮沸15min

37℃3h甲苯胺蓝核酸琼脂（四）抗原构造１、蛋白抗原（staphylococcalproteinA,ＳＰＡ）只存在于金黄色葡萄球菌表面。２、多糖抗原

金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（检测磷壁酸Ａｂ有助于金葡菌感染诊断）凝固酶（－）葡萄球菌：甘油磷壁酸葡萄球菌A蛋白（SPA）的意义：（1）降低抗体的调理作用，抗吞噬（2）协同凝集试验:辅助诊断疾病。SPA的检测模式示意图致病性葡萄球菌（SPA)兔抗羊红细胞Ab（IgGFc）SRBC致敏羊红细胞（五）分类:３5个种及亚种１、按色素分类：金、白、柠２、按凝固酶分类：凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌３、按噬菌体分类：

4、据色素、生化反应分：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性葡萄球菌（六）抵抗力无芽胞菌中最强，耐热、耐干燥、耐高盐，对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。易产生耐药性变异，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillinresistantstaphylococcus,MRSA）。MRSA常呈多重耐药，成为医院感染的常见菌。

长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤或有伤口的病人及与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素。MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）MRSA对所有头孢菌素类、青霉素类、碳青霉烯类和内酰胺酶抑制剂类等抗生素耐药，对氨基糖甙类和大环内酯类抗生素常协同耐药。体外头孢药敏试验敏感也不宜报告。目前敏感药物：万古霉素、替考拉宁、氟喹诺酮类的环丙沙星以及利福平和复方磺胺甲噁唑。二、致病性和免疫性(一)致病物质金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。

1．血浆凝固酶（coagulase)：结合型凝固酶、游离型凝固酶。

鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。3．杀白细胞素4．肠毒素：（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H9个血清型）5．表皮剥脱毒素6.毒性休克综合征毒素1（toxicshocksyndrometoxin1,TSST1）2．葡萄球菌溶血素（二）所致疾病

金黄色葡萄球菌

1．侵袭性疾病：（1）皮肤软组织感染

特点：病灶局限且脓汁粘稠

（2）内脏器官感染（3）全身感染（4）尿路感染2．毒素性疾病（1）食物中毒（2）烫伤样皮肤综合征由表皮剥脱毒素引起。（3）葡萄球菌性肠炎人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。

CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。凝固酶阴性葡萄球菌的致病性三、微生物学检验（一）标本采集（二）检验程序（三）检验方法三、微生物学检验（一）标本采集：根据病情采集标本种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。注意：无菌操作，避免污染。（二）葡萄球菌检验程序脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐物直接涂片染色增菌培养分离培养（血平板）分离培养（高盐甘露醇平板）取可疑菌落鉴定试验药敏试验涂片染色血浆凝固酶耐热核酸酶其他鉴定试验报告初报（三）检验方法

1、直接涂片重要价值：正常情况下无菌的标本（如脑脊液）伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等初步报告：

“查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”

2、分离培养

50ml葡萄糖肉汤（增菌）

浑浊无菌（7天）报告：无菌生长脑脊液、脓液、穿刺液、咽拭、尿液血平板血液标本5ml粪便、呕吐物高盐甘露醇平板（三）检验方法3、鉴定试验（1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+）（3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（４）肠毒素测定：金黄色葡萄球菌产生（5）SPA检测：金黄色葡萄球菌（6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定（7）葡萄球菌鉴定试剂盒肠毒素测定病人呕吐物、粪便、剩余食物高盐肉汤37℃24h分离培养肉汤煮沸30min，离心，取上清夜幼猫观察症状（4h出现）几种常见葡萄球菌的鉴别细菌菌落颜色溶血触酶凝固酶甘露醇新生霉素

金黄色金黄色β+++S葡萄球菌表皮葡萄白色γ+--S球菌溶血葡萄白色β+--S/R球菌腐生葡萄柠檬黄γ+--R球菌Staphylococcusaures

（S）表皮葡萄球菌（S）腐生葡萄球菌(R)阴性结果>16mm（S）新生霉素耐药试验（四）结果评价和报告1、金黄色葡萄球菌：无论任何标本中分离到均应鉴定并报告临床。2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：从输液导管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。3、尿培养计数：>103-104为阳性菌尿标准。4、其他凝固酶阴性葡萄球菌：引起感染流行或治疗失败时，应鉴定到种。5、金黄色葡萄球菌（MRSA)：头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因体内试验已证实MRSA对该类抗生素耐药。病例男性，16岁，右下肢疼痛7天，发热（最高39.4C）4天，呼吸困难3天。双下肺可闻及少量湿罗音。患者当日运动后出现右膝关节疼痛；次日剧烈活动后疼痛加重，出现右下肢肿胀，呈进行性胀痛，给予消炎镇痛药物无缓解。第三天出现发热，寒战，体温39.8度，无咳嗽咳痰。第四天出现呼吸困难，给予左氧氟沙星治疗后，症状无缓解。

病理诊断：金黄色葡萄球菌感染(Staphylococcus)概况：金黄色葡萄球菌可引起肺内化脓性细菌性感染，主要为血源性或支气管源性。其破坏组织能力很强，发展快，容易引起组织坏死。在肺部，组织坏死伴小支气管活瓣阻塞，可引起气肿，形成肺气囊。临床症状较重，高热、胸痛、咳嗽、脓血痰等，并多伴全身症状。

CT表现：早期CT表现无特异性，可为双侧广泛分布小斑片影，少数可为节段性或大片实变。本病特点为病变变化迅速，可从小片发展为大片，从单一病灶发展为多发病灶，短期内出现肺脓肿，可有或无气液平面，肺气囊形成，常为两肺多发。炎症吸收，气囊也消失。可伴有脓胸。

病例分析：