实验细胞器分离_第1页
实验细胞器分离_第2页
实验细胞器分离_第3页
实验细胞器分离_第4页
实验细胞器分离_第5页
已阅读5页，还剩6页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验细胞器分离第1页，课件共11页，创作于2023年2月[目的要求]

(1)初步掌握细胞器的分离原理及一般方法。(2)学习并掌握高速离心机和匀浆器的使用方法实验二.细胞器的分离

第2页，课件共11页，创作于2023年2月[实验原理]

细胞器的分离常通过组织细胞匀浆、分级分离和分析三个步骤完成。分级分离方法有两种，即：差速离心法和密度梯度离心法。第3页，课件共11页，创作于2023年2月差速离心：采取逐渐提高离心速度的方法分离大小不同的细胞器。

被分离的分子越小，需要的离心速度越高。

大颗粒首先沉到管底较小颗粒沉降第4页，课件共11页，创作于2023年2月速度区带分离法：预先装入有一定密度梯度的材料（蔗糖或甘油），利用各种颗粒在梯度液中的沉降速度不同，使具有相同沉降速度的颗粒处于同一梯度层内。注：待分离颗粒密度比介质密度都要大：不能离心太久，否则两种颗粒都会沉到底部第5页，课件共11页，创作于2023年2月[内容与方法]内容：

大鼠肝细胞细胞核及线粒体的分离第6页，课件共11页，创作于2023年2月方法：

(3)过滤：将组织匀浆完毕，用尼龙网过滤，每组取2ml的过滤液移入离心管中。(2)匀浆:

每组取适量剪碎组织，放入匀浆器中,加入3ml的0.25mol/L蔗糖溶液进行匀浆。(1)取材：将饥饿24h的大白鼠处死。迅速取出肝组织浸入预冷的生理盐水，洗去血污，滤纸吸干。在小烧杯中剪碎，用少量0.25mo1/L蔗糖液洗涤数次。第7页，课件共11页，创作于2023年2月(4)离心：

第一次:1000rpm,8min。(5)纯化：在沉淀中加入0.34mo1/L蔗糖-0.5mmol/LMg(Ac)2至2ml，混悬。用长针头注射器在混悬液下轻轻加入2ml

的0.88mo1/L蔗糖-0.5mmol/LMg(Ac)2溶液。尽量使两种溶液明显分层。

2000rpm离心15min。加0.25M蔗糖至4ml，混匀第二次:1300rpm,8min。弃上清上清保留于试管1.0处重复一次第8页，课件共11页，创作于2023年2月（7）镜检：观察先用低倍镜。再用高倍镜

(6)细胞核鉴定：

。涂片,空气干燥．浸入95％的乙醇溶液5min，晾干滴加甲基绿-派洛宁染液染色12min分色:快速放入丙酮中，记时90秒,用吸管吸水冲洗，擦干水分固定：染色：悬浮：在离心后的沉淀中加入几滴PBS，混匀第9页，课件共11页，创作于2023年2月线粒体的分离将分离细胞核时收集的上清液以11400离心10分钟,弃去上清,沉淀用预冷0.25mol/l的蔗糖溶液悬浮至离心管1.0处,11400g离心10min,去上清。鉴定:在干净的载玻片中央,用牙签挑取沉淀物均匀涂片.滴加1滴中性红-詹母绿染液染色15min,盖上盖玻片,镜检.被染成亮绿色的即为线粒体.第10页，课件共11页，创作于2023年2月

[思考题]本次实

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 备课教案

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论