常见流式细胞仪标准操作规程

常见流式细胞仪标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号:XXX生效日期：共页第页1.目的规范流式细胞仪操作和维护程序，正确使用设备，保证检验质量。2.仪器名称及型号设备A：××(品牌)××(型号)流式细胞仪。设备B：××(品牌)××(型号)流式细胞仪。设备C：××(品牌)××(型号)流式细胞仪。3.应用范围适用于免疫组经授权的检验技术人员。4.仪器简介和测试原理多色流式细胞仪一般安装有一根或多根激光器，采用鞘液聚焦原理，样本流经鞘液流体聚焦，形成单细胞液流依次通过流动室。激光器射出的光斑聚焦在流动室的中心处，在激光照射区域，细胞上标记的荧光染料受到激光的激发，产生荧光信号。收光系统有效收集被分析样本中单个细胞或粒子被激光照射时产生的前向散射光、侧向散射光和荧光信号。根据细胞标记的荧光素不同，在不同波长的激光激发下产生相应荧光信号，经光电倍增管放大和不同规格波长的滤光片过滤之后将特定波长的光信号输入到光学探测器。光学探测器将光学信号转换为电脉冲信号，再经过数字化转化被计算机储存分析，得到单个细胞的物理和生物学特征。如前向散射光(FSC)反映细胞大小，侧向散射光(SSC)反映细胞内部复杂程度，荧光信号则反映标记各种细胞功能和相关抗原的表达。部分流式细胞仪还可结合流量测定技术实现绝对值计数。5.开展项目6.工作环境好。散热空间：良好。仪器主机与旁边的物体(例如：墙体)至少间隔20cm以上。设备周围电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备；避免强光直接照射；避免置于热源及风放置在斜面上；室内使用。7.操作规程废液桶，可加入400ml次氯酸钠原液。所有盖子旋紧，保持管路连接无扭曲。7．1．1．4打开电源箱门，依次检查：AirFilter和VacuumFilter必须干燥无水；WaterTrap液体不能超过1／3；VacuumTrap液体不超过1／4；SystemVacuum表应在－17~－30检测。7．1．2．3当仪器采集到5000个微球时，自动停止上样。可自动记录质控图(Levey相符。请联系厂家工程师。看到检测后的统计数值(如图所示)，亦可建立FlowPage或PanelReport报告页，打印报告。图所示样本编辑录入图所示样本检测结果此时机器会用CleanseTank中的清洗液冲洗整个管路3~5min。待软件下方指示列出现“PressIdleModeButtontoInitialize”，清洗结束。此时若按“初始化”键，机器会自动将清洗液le会自动将清洗液排入废液桶内。注意：使用Cleaning液浸泡管路不可超过24h，否则会造成管路受损。关闭流式主机；依次关闭计算机主机、打印机开关。闭电源箱开关，切断所有电源。进行了必要的消毒。保证鞘液、废液的管路无弯折，连接可靠。保证仪器的电源插头安全插入电源插座。保证计算机电缆与仪器连接就绪。登录，进入操作软件界面。系统自动进行初始化、开机倒计时及温控。初始化及温控过程结细胞亚群检测为例)：①单击“”按钮新增样本；②输样本T试管的“位置”框，弹出样本盘示意图，单击盘号两侧的左／右箭头按钮，切换到欲选择的盘号，单击孔位选择T试管在样本盘上的位置；⑤双击待测样本BNK试管的“位置”框，弹出样本盘示意图，单击孔位选择BNK试管在样本盘上的位置(样本下的所有试管的盘号自动保持一致，更换任何试管的盘号，该样本下其他试管会自动更改为与其一致的盘号)；⑥在“样本”界面“样本信息”区中可录入样本及患者信息；将准备好的样本放入与工作单一致的样本盘及试管位，正确安装样本盘；⑦选中工作单列表中待测样本的起始试管T试管；⑧单击“仪器控制”中的“”启动自动进样按钮，仪器自动从设定的起始位置处开始依次执行样本测定。参见图所示。所有试管测定完成后，自动进样停止，仪器状态指示灯恢复为绿色长亮，此时可安全打开仓门，取出试管或卸下样本盘。两管样本都测试完成后，软件自动分析测试结果，并可在报告预览中出具检测报告。同时也可根据需要，调整图形中的设门位置，统计结果随之更新。设备B检测报告参见图所示。图所示设备B样本编辑界面T上，单匀后置于试管托架上，单击“仪器控制”中的“”启动测试；两管样本都测试完成后，软件自动分析测试结果，并可在报告预览中出具检测报告。同时也可根据需要调整图形中随之更新。图所示检测报告图线都连接良好。观察鞘液瓶、冲洗液瓶和清洗液瓶中的液面情况高于容器容量的1／3高度；排空废液容器，并向废液容器中加入50ml的专用清洗液。色，仪器自动对液体管路进行清洗。用户名登录。：仪器提供部分项目的预设检测方案模板，可直接选择相应测试，仪器自动完成分析和报告。图所示T淋巴细胞亚群模板标本1节点下面的空白管，箭头所指表示即将要采集检测的样本，见图所示。充分混匀各管样本，进行样本采集。调淋巴细胞门，十字门以及其他各门的位置以适应于淋巴细胞群以及各群圈门，关注TimeCount图所示按钮保存数据。图所示待测样本指示图所示淋巴细胞亚群数据分析图所示绝对值计数设置检查每个标本的报告，确认报告无误后，在软件界打印，见图所示；也可以在报告界面直接打印报告。计数，根据实际的上样体积和稀释总体积设置计算。图所示淋巴细胞亚群报告查看图所示淋巴细胞亚群批量打印报告结果文件导出和导入源”按钮。系统进入关机流程，电源按钮灯变成闪烁的绿色指示灯，仪器自动执行关机清洗流程。关机流程结束后，电源自动切断，指示灯熄灭。8.质量控制8．1．2．2制备ImmunoTrol质控血样本：制备方法与外周血淋巴细胞检测的制备方法一致，取100μl的质控血和质控血低值，根据说明书加入相应体积抗体，孵育15min后，加入溶血素溶血，然后上机检测。如需进行绝对计数，请反向加样法加入质控血，并在上机前，在样本管内反向加样法加入100μlFlowCount微球。加入微球后2h内必须上机检测。Products(编辑产品)”对话框中已正确地输入了QC产品信息。质控血样本程序选择“ManualAbsoluteCountCalibrationValue”中“Enable”，并输入绝对计数微球校准系数(如：RejectAll需要排除系统故障后重新进行QC。PMT电压情况，其差异应在均值±5％之间，表示仪器处于稳定状态，并记录结果。s旋混匀仪上充分震荡，在流式试管中滴加1滴微球，用0．5ml的流式鞘液稀释，使用前充分混匀。选择一个预先保存的质控物批号，如图所示所示。该批号对应的质控物信息自动显示在当前页面。存储介质中读取、手动录入等方式进行质控物信息的设置，具体方法如下：●从质控物包装中找到厂家提供的二维码(码制：QRCode)，如图所示所示。●使用条码扫描仪，逐个扫描二维码，识别成功的二维码显示为绿色，不成功的二维码显质控二维码信息确认●三个二维码全部扫描成功后，软件自动解析质控物信息。解析完成后，质控物信息被录入当前界面。项目各通道之间补偿值。录入完整后，内容被实时保存。输入框中单击，即可出现样本盘位置图，在该图上选择质控试管放置的盘号和位置号。单击“”按钮，启动测试。仪器自动完成系统校准和电压标定。测试。。可以执行QC测试功能，通过主菜单“仪器”一“QC测试报告”可以查看QC测试报告，如图所示9.维护保养用70％乙醇清洗样本台周围，特别要注意样本台和样本针探头。数据稳定。关闭主机电源，小心取出过滤网以免损坏，清洗并拧干过滤网，至少干燥30min，图所示设备C的QC测试报告并用吸水纸彻底吸干水分，将滤网放回，盖上滤网盖板。晃清洗，倒掉双蒸水，如此反复3次。分别向鞘液盒和清洁液盒注入鞘液和清洁液，拧紧盖子，反复摇晃清洗后弃掉液体；重新放回试剂盒。做flowcheck检测重复性，仪器除尘等。维护。为了仪器在最佳状态运行，推荐按照表所示定期维护仪器。表所示设备C定期维护频率维护内容推荐频率开机维护关机维护排空废液预防性维护：清洁样本针、清洁拭子、储液瓶除菌等更换液路系统耗材每次开机、开机过程中仪器自动冲洗管路完成维护每次关机、关机过程中仪器自动清洗和冲洗管路完成维护每次实验前检查储液瓶中鞘液、清洗液、冲洗液液体，需要时及时添加每次实验前检查废液液面，如有需要及时排空废液每月耗材更换达2个月或系统提示需更换时在必要的时候，仪器的元器件需要不定期地清洁与维护。维护的频率取决于流式细胞仪的使用频率和仪器性能状态。参见表所示设备C不定期维护频率。表所示设备C不定期维护频率不定期维护推荐使用排气泡清除样本针堵塞清洁仪器外表面清洁样本针长期停用时液路系统维护运输前管路排空储液台校准清洁滤光镜片数据的变异系数偏大QC测试不通过测试中，每秒事件数过低当天测试量较大仪器表面较脏样本针表面有明显样本残留停用2个星期以上仪器搬运前储液瓶中液体量误报警拔插滤光片或更换滤光片等操作后10.校正由相关设备公司技术支持人员对仪器进行校正。11.报警及处理器相关报警指示灯闪烁，仪器会发出报警音。点击软件界面状态栏，关闭报警音，可查看故障对话框提供的故障名称及故障详细信息。选中故障的帮助信息。操作者可根据故障帮助的内容进行故障处