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实验二蛋白质的沉淀与透析生物化学实验之－－山东师范大学生命科学学院【实验目的】

1.学习蛋白质沉淀和透析的基本原理2.掌握蛋白质可逆沉淀、透析的基本操作方法

【实验原理】某些试剂（如硫酸铵、氯化钠）与蛋白质作用，可使蛋白质沉淀；但当除去使蛋白质沉淀的因素后，蛋白质又可再次溶于原来的溶剂中，这种沉淀作用称为可逆的沉淀作用。一些物理因素（如剧烈震荡、搅拌等）或化学因素（如重金属离子、有机酸等），会破坏蛋白质的稳定的构象，引起蛋白质变性。即使除去了使蛋白质沉淀的因素，蛋白质也不能再溶于原来的溶剂中,即为不可逆沉淀作用。

在实验室分离纯化蛋白质的过程中，常利用透析的方法除去蛋白质溶液中的小分子物质（无机盐、单糖等）。利用透析膜的半透膜作用，小分子物质可以自由通过与周围的缓冲溶液进行物质交换，大分子物质（蛋白质）保留在透析袋中而彼此分离。【实验步骤】1.蛋白质的检查取卵清蛋白/NaCl溶液2ml和10%NaOH溶液1ml，摇匀，加1%CuSO4溶液1~2滴，边加边摇。2）清蛋白沉淀过滤，除去盐析出的蛋白质。向滤液中加入硫酸铵粉末至饱和。

3.蛋白质的透析（1）装样：取一段透析袋，将一端夹住，由开口端加入含有硫酸铵的清蛋白沉淀（不可装太满，并适当排出空气），夹住袋口。（2）透析：取10倍以上蛋白质体积的去离子水，将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部。在烧杯底部放一个磁子，缓慢搅拌以促进溶液交换。更换洗脱溶液数次（约30min一次），至达到透析平衡为止。4.蛋白质透析效果检查1）Cl-的检查：取洗出液约2ml，加10%HNO3溶液1~2滴至酸性，加1%AgNO32~3滴，观察有无白色沉淀。

2）NH4+的检查：

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