风湿病的检验知识

风湿病的检验知识风湿病的检验知识一、抗核抗体测定(Antinuclearantibody,ANA)ANA是抗核多种成自抗体，无种属及器官特异性。ANA可分为抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体及其他细胞成抗体共同组成ANA谱。抗核抗体(ANA)的检查最常用于筛查全身性风湿病和自身免疫病。ANA的检查可观察到能与细胞核内的核酸和蛋白抗原起反应的自身抗体。细胞存在对多种抗原起反应的抗只有某种抗体的效价很高时IFA才能加以鉴别。1、homogenous(均质型)又称弥散型，相应的抗原是双链DNA和组蛋白复合物。常见于SLE，特别是肾脏受累病人。也可见于其缔组织病，如：风性关节炎，MCTD，干燥综合征皮病，慢性活动炎及原发性胆汁性肝硬变。2、Peripheral(周边型)相应的抗原为双链DNA，多见于活动性SLE病人。3、Speckle(斑点型)主要是针对ENA的抗体，包括SmRNP，SSA，SSBS0。一般认为低效价的斑点型ANA不是结缔组织病的，实际上不代表临床异常。高效价的抗Sm抗体多与SLE有关。高效抗RNP身于MCTD，但也见于SLE。抗SSA和抗SSB抗体，见于S.S，也可见于SLE。当病人有抗SSA抗体时，通常以皮肤表现和光过敏为主。，也存在于ANA阴性狼疮和新生儿狼疮Scl-70抗体与硬皮病有关。4、Nucleoli(核仁型)其靶抗原是与RNA分子相关的核蛋白。多见于硬皮病。5、Centromere(着丝点型)抗着丝点抗(ACA)，多见于全身性硬皮病的CREST综。常用检测方法为IFA、ELISA、免疫印迹法、RIA、免疫斑点法、胶体金标斑点免疫渗滤法等。其中IFA是应用较广的一种方法。一般采用鼠肝切片或Hep-2细胞为底物抗原片，当加入病人血清时，病人血清中的ANA可与细胞中相应抗原成分结合。再加入荧光标记抗人IgG，在荧光显微镜下可见细胞核内亮绿色荧光。〖参考值〗<1:10或阴性〖临床意义〗ANA阳性见于多种疾病，常用于病及自身免疫病断。SLE患者阳性率在95%以上，且常在180以上。在其他风湿病如RA、系统性硬化症、皮肌炎、干燥综合(SS)、混缔组织病(MCTD)等也可阳性。其肝病，病毒染等也可呈价阳性。〖注意事项〗在大约1%的正常人的体内可测到低效价的非特异性抗核抗体，80岁以上老人的检出率可高达50%。高效价的ANA一般与活动期SLE密切相关。采用Hep-2细胞检测ANA，可见到不同的染色模型。此外，口服避孕药的妇女也可检测到ANA。二、可提取性核抗原(ExtractablenuclearantigenENA)抗体ENA是细胞内许多小分子的RNA和多肽组成的非组蛋白的核蛋白颗粒。分布质中的称为小细胞浆核糖核蛋白(scRNPs);分布在细胞核内小细胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已发现的有20余种，其中常用的抗ENA抗体有如下几种。(一)抗Sm抗体Sm是病人Smith的缩写Sm抗原属于SnRNP，由5个RNA和多肽组成，抗原表位在29KD28KD和13.5KD多肽上，抗Sm抗体是酸性糖蛋白，是SLE的标记抗体。(二)抗nRNP(u1RNP)抗体u1RNP是u1RNA和蛋白质组成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是混合结缔组织病(MCTD)的重要血标志。(三)抗SSA抗体SS为干燥综合征的缩写。此抗体又称抗RO抗体SSA抗原是RNA和蛋白质复合物，抗原表位在52KD多肽上，主要见于原发性干燥综合征患者及SLE。(四)抗SSB抗体SSB抗体常伴随SSA抗体同时出现，又称抗La抗体，SSB抗原属于SnRNP，是含有RNA和50KD蛋白质的复合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。与SSA抗体并存对诊断SS有特异性。(五)抗Scl-70抗体Scl-70抗原表位在86KD70KD的片段上，是DNA拓扑异构酶I的'降解产物，抗Scl-70抗体几乎仅见于硬皮病，阳性率30%左右。(六)抗Jo-1抗体Jo-1抗体是组氨酰tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗体是多发性肌炎和皮肌炎的标记抗体，阳性率25-40%。(七)抗核糖体抗体核糖体在核成，然后转入胞浆，抗位在大亚基上的38KD16KD和15KD多肽上。抗核糖体抗体阳性主要见于SLE，阳性率20-30%。检测以上抗体的方法主要有：对流免疫电泳法(CIE)、双相免疫扩散法，免疫印迹试验(IBT)，免疫斑点技术和ELISA法等。一般采用兔胸腺或提取物或细胞提取物作为抗近年来，应用分子重组制备的试剂盒已市场。〖参考值〗阴性〖临床意义〗1.抗nRNP抗体：见于35-40%的SLE病人，在MCTD病人中阳性率可达95-100%，也可见于其他风湿性疾病。2.抗Sm抗体：主要见于SLE及重叠综合征，急性期病人75%为阳性。一般SLE者30-40%阳性率。但Sm抗体阳性者90%以上为SLE，故称之为SLE的标记抗体。3.抗SSA和抗SSB抗体：见于40-45%的SS病人。抗SSA抗体也可见于2%的SLE病人及其他风湿疾病;抗SSA抗体与新生儿狼疮和先天性传导阻滞有关。抗SSA抗体也可病毒感等非风湿性疾病。抗SSB抗体对原发性干燥征较特异，但阳性率仅27%左右。4.抗Scl-70抗体：一般仅见于系统性硬化症病人性率20-60%。5.抗Jol-1见于30%的多发性肌炎病人及1%的皮肌炎病人。抗Jol-1抗体与多发性肌炎质性肺炎的发生率增加有关。6.抗rRNP抗体：主要见于SLE患者，阳性率20%左右，与中枢神经系统病变有关，多在疾病现。〖注意事项〗判断试验结果时要结合临床表价，也应根据试验方法来作出解释。疫电泳法和双相扩散法敏感，但特异性较高;免疫印迹法、斑点免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特异性相对减少。三.抗双链DNA抗体(Antidouble-strandedDNA，A-dsDNA，)A-dsDNA对SLE有高度特异性，是针对细胞核脱氧核糖核酸的自身抗体。临床上常用的检测方法有：①Frrs法：125I-DNA与待检标本中的A-dsDNA形成免疫复合物，加饱和使复合物沉淀，以γ计数器分别测定上清中游离及沉淀物中已结合的125I-DA含量，可出血清中A-dsDNA的结合活性。②EA法：将小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入清，如有A-dsDNA则结合到微孔板上，加入酶标抗人IgG，加入底物显色后经酶标仪比色可知血清中A-dsDNA抗体的量。③免疫荧光法：采用马疫锥虫或短膜虫作为基质，加入病人血清。血清中的dNA与膜上的天然DA结合，加入荧标记抗人IgG。马疫锥虫和短膜虫的动基体会发出绿色荧光。④金标法：双链DNA包被于硝酸纤维膜上，加入病人，加入金标记抗人IgG，如有A-dsDNA存在，会显示红色斑点。〖参考值〗依方法不同参考值也有不同。Farrs法：≤0.20免疫荧光法：<1:10ELISA法：依试剂盒而定，一般<70u金标法：阴性〖临床意义〗A-dsDNA阳性对SLE有较高的特异性。大约60%的活动性SLE病人会出现A-dsDNA。其他风湿性疾病也会出现，但阳性率非常低，如RA、SS。〖注意事项〗假阳性结果非常少见，但阴性亦除SLE的诊断。四.抗中性粒细胞胞浆抗体(Antineutrophilcytoplasmicantibody,ANCA)测定ANCA是针对中性粒细胞胞浆多种成分的自身抗体，主要有髓过氧化物酶(PO)和蛋白酶3(Proteinase3，PR3)的抗体。主要用于诊断Wegener肉芽肿和系统性血管炎别是伴有肾病呼吸疾病或其他类型血管炎引起多器官损害的患者检测方法有IFA、ELISA、IBT等。〖参考值〗阴性。〖临床意义〗免疫荧光法检查ANCA阳性一般分为两种荧光类型，一种是胞浆型，称为cANCA，一种是核周型，称为pANCAcANCA产生弥漫性细胞浆染色，是针对PR3的抗体，一般见于wegener肉病(WG)，特别是肾和肺受累的病人。pANCA产生核周染色，是针对MPO抗体，主要见于系统性血管炎病人。在WG病人中，cANCA阳性率在活动期可达80%，且有较高的抗体效价。在缓抗体阳性率低，且效价，或完全消失。〖注意事项〗ANCA阳性也可见于Good-Pastares综合征和SL