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文档简介
关于实验六血细胞计数及血涂片制作第1页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三血细胞计数1.熟悉并清洗计数板和盖玻片2.稀释血液:
血样采集:兔耳缘静脉采血血样抗凝:肝素钠抗凝血样稀释:如下第2页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三实验操作
红细胞稀释液:生理盐水白细胞稀释液:冰醋酸(盐酸)红细胞计数:0.9%NaCl1.99mL+0.01mL血,稀释200倍白细胞计数:1%HCL0.38mL+0.02mL血,稀释20倍3.充池:(混匀,从中间取)4.静置计数板2min5.计数6.计数原则:数上不数下、数左不数右7.计算:红细胞数/L=N*50*106*200=N*1010
白细胞数/L=N/4*10*20*106=N*5*107第3页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三血细胞计数计数板第4页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第5页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第6页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第7页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第8页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第9页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第10页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三保证计数板和盖玻片清洁;以防影响计数结果的准确性。一次完成充池,如充池过少、过多、有气泡或出现任何碎片,应拭净计数板及盖玻片后重新操作。充池后平放计数板,不能移动盖玻片。计数板中细胞如果严重分布不均,应重新充池计数。凡压线的细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则,避免漏数或重复计数。注意事项第11页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三血细胞的分类与计数第12页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三血液涂片的制备1、每份样本制作3张血涂片。要求所用玻片清洁、干燥、无尘,大小为25mm×75mm,厚度为0.8~1.2mm。并有明确标记。如果样本中白细胞数量少时,需要制备更多血涂片(如6张)。2、使用EDTA-K2抗凝血液样本时,应在采集后4小时内制备血涂片。在制片前,样本应充分混匀。注意,样本不能冷藏。3、用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处,加一滴(约0.05ml)充分混匀的血液,握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片,以30º~45º角使血滴沿推片迅速散开,快速、平稳地推动推片至玻片的另一端。4、在1小时内,用染液染色;或在1小时内,用无水甲醇(含水量﹤3%)固定后染色。第13页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三推片技巧
推片倾斜45°±1,推成血膜长度25~35mm,宽度18~20mm,血膜四周留有空隙区,血膜终尾离玻片终端至少10mm,血膜均匀,薄如蝉翼,尾端形如弧状,迅速扇(摇)干,血膜具有头、体、尾不同厚薄区域。此外,涂片时,还要考虑患者的血液状态,如贫血程度、血液粘稠度、WBC或有核细胞多少等因素,调整推片技巧。第14页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第15页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第16页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第17页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三血膜至玻片边缘约5mm血膜至玻片一端约为总长1/3血涂片头部,涂片厚血涂片体部的检查区域血涂片尾部,涂片太薄第18页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第19页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三染色步骤取新鲜血液涂片,晾干;加刘A溶液(覆盖血涂片为宜),染色30s;加刘B溶液于A液上(约为A的2倍),以洗耳球吹出微风,使液面产生涟漪,染色30s-1min;水洗,干燥,镜检;第20页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第21页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第22页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第23页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第24页,讲稿共28页,2023年5月2日,星期三第25页,讲稿共28页,2023年5月2日,星
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