无菌检查和微生物限度检查操作规范

检生检规范药品）一、无菌：查于6度2.42.m不里缓应个。大分于。米2.5过1辐射强距1于70瓦/度18-26℃，对度于9度0洁度1000。，。滤0降菌测定方法为：取营养肉汤琼脂平板3个，置无菌室的露0在3℃培养2天后，计算菌落数。用于无菌检查的无于3个，浮游菌每立方米应于5则查查。基备1、培养基的：基水称培基加溶化后节PH的PH值为7.0-.3的PH为66、，。2、培养基灵敏度试验：培养基是无菌试验的基准物质，关系到无菌试验结果的科学、准确、可信度，因此，培养基灵敏度试验是无菌试度靠。作色别0倍每l含10-0个各3培养5天，每株于2管。3、培养基用前的检查：（1）无菌检养3，。（2）新鲜程度检查：需气菌、厌气菌培养基氧化层的颜色用过1/否能煮，只热。4、培养基的保存时限：配制好的培在2。藏1、菌种：入0.l释仔关可。2、药：可。变的。3、菌种：常用的方种生室斜体藏实用干。4、菌：。四、阳性对照菌液的制备阳性对照试验的目的是根据阳性菌在加入供试品的培养基中能否生长，以验证供试品有无拟菌活性和试验条件是否符合要求。中国药典规定，使用的阳性菌为金黄色葡萄球菌（CMCCB26003）、生孢梭（CMCCB64941）、白色念珠菌（CMCCF98001）。所有对照菌液的制备及阳性对照菌试验，必须在另一专用净化台上操作，应与其他无菌室分开。对照菌液制备方法：通常根据供试品抗需气菌、抗厌氧菌或抗真菌的特性，选取相应的阳性对照菌培养物，制成萄：物1汤在30-35℃培养18-4用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每ml含1010别取对照菌液1ml加菌使。五、拟细菌拟真菌实验国典20培基4基2中2加10-0个金另2梭菌。菌养基2管加10-10个白色菌中1管加定量养5观管4养。品法。六、操作人员的准备菌洗戴菌，着叠。七、无菌检查直前品大的试。1、直：供品1用7璃次试厌基6管，接种真菌培基5管稀释液接种需气各1管做阴对中1管接种100个对照菌作、厌气菌培养基置35置25养7天，养7培养基中或斜面培养基上养2养3种环取培养液涂微。2、薄：针头插在0%关供品6瓶，瓶中，使供试品充分溶解。用注射器将供试液分别转移至100ml稀释液该将6瓶供试品稀释液全部过滤。用1000ml的氯化钠液冲洗薄膜，每冲洗100ml适当摇动抽，洗3排下的入1l需气、气菌养于2再用两个加外2个入1l真菌培养基于第三个滤器内，前两元滤器中的一个要加入金黄菌10-0用2l化溶冲膜，一管入1l需。另滤器进入l真菌培养置305置20-25℃，培养7记。3、无菌检查结果判断：并可厌养，应阳有品。检查1、供试液的：（1）固品固体供试品包括片剂品10g放剂启动匀浆仪以每钟300转3成1：10供液。（2）液品供品l放入已灭菌锥形瓶中，加入90l稀释剂，使均匀，制成：10液。（3）非水备称供品g约5盘-80g油g和聚山酸1g中,匀加0液l使供试化成：0试。2、细：以0取3入l菌稀支l灭菌吸管，吸取供试液1l，成10作0至13或10-4取1ml1供试入4平皿中。再液l入4个平皿将45左右的营养琼脂培养基按每一级稀释液倒入2皿1级稀释入2。细菌数和灭菌数的阴性对照试验：分别吸取稀释剂各l加到4瑰红钠琼脂培养基各制成2平。检查细菌的平板倒置于305养2天。检于25-8养3天逐日结培。3、大肠杆菌：取胆盐乳糖基3份份100ml菌50-100。第三份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照，培养184小时。阴性对照应无菌生长。取上述三份培养物各0，分别接种至5mlMUG于5小时与24的MG培管对各置紫下m白液5滴述G培察UG告g或l供G阴性，靛基告1g或l如G或G阴将摇于B或MC。养察果：肠I细菌落取3个可疑菌落，接种营养琼脂斜和IMVIC。C验取可疑菌落培养物接种管1支管2支面1，培液45滴。在1黄色为阴性。在另1支磷酸盐葡萄糖胨水培养基管内加入a-萘酚试液1ml，混匀，再加入40%氢氧化钾溶液0.4ml充分震摇在4小时管内出养48-72C菌IC阳述G阳杆G阴供如MUGB琼脂平板C，如GB琼脂平板C判，。4、沙：取四基18-24小时增菌培养物或MCC养18-24性。在C典色菌可菌落3接铁，接，养4小时后，阳性化试红可否验：并。养24改变阴性。氰化钾试验分别用金耳蘸可疑株的营肉汤液环接种对照培基及氰钾培基，立用橡胶塞紧，养28小时。对照管应有菌阳。取羧养8小应试。动检查菌半中养4小，否则为阴性。保留23天后再。血清凝集试玻菌属O价1清23环，再取培养物少许，与血清混合后于0%氯化应取斜面制悬在100温0分钟，待冷，为。试何应论。5、铜绿假单孢菌检查：取供液14小时的培养液划线接种于溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基平板上养184小时的落长未。型边周长具有上述特，选23个菌落取18-4小时的纯培养物，革兰染色，并作氧化酶。的%二盐酸在30。芽未菌。绿脓素验于基养4小时后仿，入约酸，及检试下：养4体阳。42置1±养24-48苔为为。明养4小时内10-0培。假酸产2。6、金：试酸汤4小培养42小金钠选3取4，。血浆凝固酶试验：取灭菌小试管3支，各加水株液0.5m，一支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液0.5ml或0%无液0.5ml性对照将33