石大生药学实验指导14显微标本片的制作方法

二、显微标本片的制作方法生药的显微鉴定是使用显微镜检查药材内部构造特征，因此必须将药材制作成适当的显微标本片，才能在显微镜下进行观察。显微鉴别根据观察对象、目的、要求的不同，制作不同的标本片，一般可分为徒手切片、石蜡切片、表面装片、粉末制片、组织解离片等。一、徒手切片徒手切片法可以直接而又准确地观察和了解药材组织的本来面目，其设备简单、操作方便，不需经过复杂的处理，但是，此法对微小、柔软、硬型或水分过多及肉质药材不易切成薄片以供观察。1、基本操作=1\*GB2⑴取材：选取材料时要注意有一定的坚韧性，材料不宜太硬或太软。=2\*GB2⑵切片：先将材料的断面削平，用左手的姆指和食指夹住材料，材料上端伸出1～2mm的长度，右手执刀，刀口向里(刀片可用单面刀片或剃刀)，刀口与材料的断面平行，切时自左方向右方斜滑，亦可自内向外切，同时挥刀要快，用力要均匀，不可拉锯样切割。每切1～2片，用毛笔蘸水取下切片放于水中或50～70％乙醇中，同时用水湿润材料的切面和刀口，不可使之干燥。如材料较薄或较小，可用萝卜或向日葵茎等解剖一切口将材料在切口内夹住再切。选取较好的切片备用或直接放置在载玻片上，在显微镜下观察。2、制片临时观察的切片，可自水或乙醇中取出切片，放置在载玻片上，加一滴水或甘油或先滴水或甘油，再放入材料，盖上盖玻片，置显微镜下观察。二、永久制片法(略)三、粉末标本片粉末标本片主要用作粉末、丸、散、膏、丹等成药材料的观察，所用材料不宜有粗颗粒混入，否则可将盖玻片顶起，不便观察，故须将材料用三号筛(60目)筛筛过。1、临时性粉末标本片用解剖针尖挑取少量粉末药材放置在载玻片的中央偏右一些，根据需要加入适宜的试液1～2滴，用解剖针或细玻棒(试液为酸或碱时)轻轻搅匀，然后用小镊子(或盖片镊)夹住盖玻片的一边，使相对一边与液面接触，将盖玻片轻轻放下(注意放盖玻片时动作要轻而慢，以免产生气泡或使材料溢出)，盖玻片放好后，若有液体溢出，可用滤纸吸去溢出的液体，最后在载玻片左端做上标记。挥发性强的液体(如乙醇)很容易挥干，制片后须立即观察。如果要保存标本片达数小时以上，通常可加稀甘油；如需要保存数天以上，则应在盖玻片下及时补加甘油，并防止灰尘落在盖玻片上。2、半永久性粉末标本片将粉末药材放在载玻片上，加一滴稀甘油使粉末充分湿润后，用滤纸吸去过多的甘油，将盖玻片在酒精灯上略加热，使盖玻片稍温热，立即用玻棒滴加熔化的甘油明胶1～2滴，并按前法加盖盖玻片，注意加甘油明胶的量须适当，不宜过少也不宜过多。标本片应在无尘处放置，待其充分冷却凝固后用小刀轻轻刮去溢出盖玻片的甘油明胶，后用湿布擦净，加贴标鉴，即可使用。如须将经过水合氯醛试液透化处理过的粉末标本片改用甘油明胶封藏，则可先将水合氯醛试液尽量滤去，加入1～2滴甘油混匀，再滤去甘油，然后加熔化的甘油明胶封藏。3、永久性粉末标本片粉末一般以能通过《中华人民共和国药典》五至六号筛为度。方法一：将粉末药材放在载玻片上，先用无水乙醇充分湿润，滤去无水乙醇，加二甲苯1滴，使其充分混匀，滤去二甲苯，再加1滴二甲苯，使材料透明，将二甲苯吸去，用加拿大胶封片。方法二：取粉末药材少量，放置于离心管内，加50～70％乙醇使药材完全被浸没，用玻棒不断搅拌，10分钟后，离心，使粉末沉集于管底，倾去醇液，再加50％洒精，搅拌，倾去醇液，再加无水乙醇二次，每次10分钟，然后加入纯二甲苯(中间更换一次)，使材料透明，搅匀后，用滴管吸取混悬液少量置于载玻片上，滴加加拿大胶，加盖玻片封藏。永久性粉末片制作时可以染色，染色方法可在脱水、透明之前进行。四、表面标本片需要制作表面标本片的药材主要是叶片、萼片、花瓣和雄蕊，此外草质茎、浆果等的表皮也常需要做成表面标本片观察其表皮特征。制做表面片，较薄的材料可以进行整体封藏。整体封藏此种制片法适用于很薄的叶片、花瓣、萼片。剪取需要的部分二小片，各约4mm见方，一正一反，放置在载玻片中央，加水合氯醛试液1～2滴，以能完全浸泡材料为宜，加盖盖玻片，在小火焰上慢慢加热，加热时应使载玻片保持水平状态，在火焰上缓缓移动，保持透化液处于微沸状态，并随时补加透化液，注意勿使火焰过猛，加热到材料略呈透明时，常约需1～2分钟，可放置待凉，然后在显微镜下观察。如发现透化不完全，可再反复加热，直至透明为止。为了防止干燥和水合氯醛试液结晶的析出，可加稀甘油一滴。稍厚的叶片、花瓣等材料，当用上法不能完全透明时，可剪取2mm见方的所需材料，放入试管中，加透化液2～3ml，在沸腾的水中加热至呈透明状态(通常约需20～30分钟)，将材料小心取出，放在载玻片上，切成大小相近的两片，一正一反，放置在载玻片上，加透化液或稀甘油1滴，盖上盖玻片即可观察。很厚的叶片、花瓣或茎的表皮材料，用上法直接透化不能使材料透明，因此需要将表皮撕离下来，将撕下的表皮表面朝上，放置于载玻片上，加透化液1滴，加盖盖玻片，稍稍加热，就可使其透化。五、组织解离片法在鉴别生药时，为了观察某些单个细胞(如纤维、石细胞、导管等)的完整形状，可利用化学试剂来进行药材的组织解离，使胞间层溶解，细胞互相分离，这种方法叫做组织解离。所选用的试剂依所鉴定药材的性质而异，如药材的木质化组织少，可用氢氧化钾法；如药材的木质化组织较多，则可用硝铬酸法或氯酸钾法。在进行组织解离前，应将要解离的材料切成不粗于火柴杆的细长条或小片。1．氢氧化钾(钠)法：将少量材料放置在试管中，加50％氢氧化钾(钠)溶液适量(应将材料完全淹没)，加热，用玻棒挤压至材料全部离散时为止，倾去碱液，材料用水洗涤后，取少许放置在载玻片上，用解剖针撕开，以稀甘油封藏后观察。2．硝铬酸法：将材料切成小薄片放入小玻璃皿中，加20％硝酸与20％铬酸的等量混合液放置2小时至一日，或以加温(35℃左右)缩短浸渍时间，然后用水冲洗，取少量材料于载玻片上，用解剖针或镊子轻压，使其细胞分离，制成临时