基因工程徐玉华改

哎，这可怎么办啊？2015年，抗虫棉已占全国棉花产量的96%，据估算每年可以减少农药约3万吨，让棉农省力又省钱，同时减少了环境污染。苏云金芽孢杆菌

苏云金芽孢杆菌能合成一种抗虫蛋白，杀死棉铃虫，而且对人和害虫的天敌都无害。怎样使棉花细胞合成抗虫蛋白？思考抗虫基因棉花细胞抗虫蛋白抗虫基因抗虫基因载体重组DNA分子重要工具1——限制性核酸内切酶史密斯（H.O.Smith）内森斯（D.Nathans）揭示限制性核酸内切酶的作用机制，而获得1978年诺贝尔生理学或医学奖。工具1----限制性核酸内切酶一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。EcoRI限制酶酶酶粘性末端粘性末端抗虫基因限制性核酸内切酶DNAGCTTAAGAATTCGGAATTCCTTAA抗虫基因重要工具2——质粒博耶(H.Boyer)科恩(S.Cohen)基因工程的奠基人模拟重组过程讨论：两种溶液混合后加入DNA连接酶，可能得到几种不同的DNA分子限制性核酸内切酶识别位点切开的质粒目的基因+可能得到的连接产物单个质粒环化两个质粒环化目的基因与质粒质粒目的基因两个目的基因连接多个片段连接12345……插入T-DNA区段中第三环节：将重组DNA导入受体细胞如何将重组的Ti质粒导入农杆菌细胞？氯化钙处理，增加细胞壁通透性。农杆菌转化法插入T-DNA区段中第三环节：将重组DNA导入受体细胞植物的何种细胞可作为受体细胞？生产转基因动物一般以何种细胞作为受体细胞？显微注射法第三环节：将重组DNA导入受体细胞思考：这个小个子患过哪种疾病？

侏儒症这种疾病是由于当时体内缺乏哪种激素引起的？

生长激素怎样获得生长激素？从人的垂体中提取来源太少123从动物的垂体中提取过敏、效果不佳化学合成分子量太大思考基因组文库的建立方法提取某种生物的全部DNA用适当的限制性核酸内切酶酶切一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接导入受体菌中储存（基因组文库）目的基因分离部分基因文库的建立方法mRNA反转录酶单链DNA合成

双链DNA（cDNA）

载体插入导入受体菌群（cDNA文库）分离目的基因重组DNA分子导入受体细胞

体细胞受精卵农杆菌转化法显微注射CaCl2处理

重组DNA分子

细菌

植物动物转化菌

未转化菌

（4）筛选含目的基因的受体细胞1234基因工程的步骤（1）获得目的基因（2）形成重组DNA分子（3）将重组DNA分子导入受体细胞存活的大肠杆菌培养培养质粒来源：大肠杆菌含有氨苄青霉素的完全培养基含有四环素的完全培养基人工改造质粒（选择具有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因农杆菌）质粒知识拓展Hind限制性酶ⅠⅡHindIIIHindIII目的DNA质粒构建表达载体四环素抗性基因由于目的基因插入而失活，形成只具有氨苄青霉素抗性基因DNA连接酶人类生长激素的基因培养培养培养导入含目的基因的重组质粒导入大肠杆菌含有氨苄青霉素的完全培养基含有四环素的完全培养基两种培养基均不能生长大肠杆菌Ca2+

处理细胞形成感受态细胞检测（培养不具有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因的大肠杆菌）只有氨苄青霉素抗性基因质粒只具有氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌不具有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因的大肠杆菌完全培养基培养检测含重组质粒的大肠杆菌含有氨苄青霉素的完全培养基含有四环素的完全培养基（大肠杆菌内含有氨苄青霉素抗性基因，不含有四环素抗性基因）只具有氨苄青霉素抗性基因农杆菌不存活存活证明：目的基因已导入质粒证明：重组质粒已导入大肠杆菌培养培养完全培养基基因工程的诞生时间：1972年，斯坦福大学合成第一个人工DNA重组产物

1973年，斯坦福大学实现了细菌之间的性状转移

——标志基因工程的诞生20世纪70年代

不同生物的DNA能拼接在一起基因工程的成功能说明哪些问题？

说明所有生物的DNA都具有相同的化学组成(四种脱氧核苷酸)和空间结构