生物技术实验

生物技术实验精选朱嘉明程龙球周天鸿李月琴梁旭方方玲梁宠荣马三梅徐明芳王莹编著刘大岭邓宁李任强杨维东姚冬生2006年7月生物技术实验精选目录A遗传·基因工程部分实验一果蝇饲养及遗传学研究技术实验二人类染色体基本实验技术实验三DNA的重组、克隆与鉴定实验四功能基因实验技术实验五海洋微藻特异基因的转录和表达分析B细胞工程部分实验六动物细胞培养实验七植物组织培养实验八植物多倍体诱发和鉴定灿实验决九镰转基问因斑穷马鱼医实验很实验竹十鞋植物允转基呜因技暮术绒C塔微生岔物工望程部广分掩实验鞠十一向正交备试验定法在纲微生树物培迟养条宏件优堪化选尾择中岁的应墓用舒实验缸十二烧细菌语mR车NA桃的提刊取及阿其逆识转录般实验戚十三画微生狡物生秃长动什力学滴——肤细菌剑生长虹动力将的测轨定解实验斑十四掉食品得、药覆品和撕水等而的微签生物密检验个技术略D姐生物政化学瑞技术浩·往酶工役程部悼分泛实验棉十五夕蛋白牛质双古向凝母胶电鸽泳鲁实验错十六延人基邻因组音DN暮A棚提取险实验兄十七巷植物庆基因屋组汽DN户A沙提取减实验亚十八扰抗血堪清的呀制备心与效锁价测箩定晋实验笑十九幅酶联童免疫晒吸附生技术唉实验性二十她α北-件地中隔海贫主血的清快速薄基因架诊断讲实验杂二十徒一邀从植伴物材局料中钓提取拥制备凝过氧舞化物丸酶远实验旧二十苗二谊海洋驼微藻闯的实悟验室轧培养习与活堪性成辩分的伴分离彩实验畏二十赚三唤天然占甲壳锅素的武提取俗和分眼离瑞实验杯二十惑四图家兔铸动脉杏血压富与呼杨吸运荒动的饰调节越实验酱二十侵五搜模拟电过氧篮化物覆酶的穷制备鱼、固括定与齐应用秋实验凤二十释六卵以枯笛草杆瘦菌生角产蛋淋白酶枝实验兼二十堡七填包埋裕法、亦交联洒法对首细胞督、酶耐的固检定化聋操作侄及其污比较粪备注拆：红麦字为武精选款出来漠的内咽容烛A嘱遗传框·录基因港工程颤部分贵实验屿三究DN环A澡的重嘱组、扩克隆尿与鉴次定前言指——砍重组录质粒舞的构梁建设思计杠基因顷工程抗又称逃遗传加工程亩、室DN军A案重组猜技术透、分墨子克槽隆等中。它紫是七泊十年动代在卡分子烧生物膜学发慎展股的基旱础上慨形成逃的新搁学科滩。所仪谓基肤因工鹊程，棚就是周在分女子水询平上寸，用汗人工果方法俊提取鉴（或矮合成火）某透一生确物的护遗传斑物质捆，在葛体外父切割缓，拼扯接和台重新妈组合话，然桨后通戏过载精体把蝶重组脂的桃DN知A霸分子旨引入彻受采体细扮胞，扒使外芬源彩DN遭A待在受稠体细错胞中熟进行靠复制凝和表被达。钱按人律们的病意愿务定向况创造龄生物羡新性载状，腐使桶之稳词定地勤遗传肯给下梨一代浓。所驾以基连因工递程具晒有广习阔的平应用遮前景瓣，即蒜能为呈工农肌业生剪产和株工医劈药保辜健等勤开拓写新途机径，旷又能晒为生昼物的底细胞偏分化蹲，生毛长发浮育，条肿瘤伤发生潮等基困础研传究提坊供有惯效的太实验陶手段脉。梯近十角余年蝇来，格基因帖工程孝的发味展和姿应用博，迅和速地侨推动纤了生摩物科南学的资发展责，目鸣前，黎基因套工程披技术膏已成喷为生伯物学伐领域旺许多忙实验亭室的露常用里技术桃，它牢的先普进性著和普针及性遣使人云们感内到有床必要偏在大樱学的双教学哈课程熄中得贺到反店映。厦所以只，我格系已羊为十客几届键本科所生、迅研究跨生开橡设了舰基因案工程带技术忍实验野，质选择稳一些放最基例本，就最常怪用的燥技术慧，以臂使同殖学对立基因队工程亏有一直个基别本的和了解协，并倘能掌娱握一舰些基革本技重术。穿但是袭基因告工程浇的实曾际技逢术和申实验依系统龄正在驴不断势的创哭新，墨新方育法、驻新技怪术不以断推片出，注而且储在有瞎限的本学时挨内，彻所能争触及栋的技掀术只勇是基浓因工并程中盏极少版的一瓜部分离，但讽从教谋学角葵度来拍看，访是不握可能碗面面汽俱到颂。我朽们只局是希渴望通却过本吐实验富，让爆同学棋通过静基因栽工程动中最趴基本葬的技柄术训币练，膏为今惑后独话立工忽作打不下基或础。欢本实宏验设脊计主乏要参乔考书编为苹T饰·码Ma捏ni夏at并is丙右的《况Mo寸le赖cu岂ia牺r错c即lo歪ng针》第知三版殿，彭磁秀玲江等编谜著乞的《徐基因位工程岁实验块技术奋》等强。实征验中兽所选学择的寸方法烧和条遮件以停适合翼于本牛实验浙室设殿备为思首选决，具饲体参轧考应街用时春，可乔作适堂当更暑改。箱本套猪实验蓝设计绿过程板如下弦：勇1.么蛮染色俗体睁DN券A幼的抽体提万2.航P霞CR误艘扩增羡分离壮目的产DN居A划片段箱3.道竖载体抵貭粒虹的抽沿提、闲纯化广及检棵测草4.秤帮载体烟及目疯的熊DN脸A扛片段朝的限掏制性吐核酸筹内切柴酶酶识切与虑连接粥5.尼糠重组但貭粒赠转化冷大肠浮杆菌杨6帅．重效组子骗的筛继选、符重组平质粒隆的抽崖提与挂鉴定矩图贝3浓－穿1伯重组怪质粒酬构建调图焰1.闸D转NA昆讨的纯仍度和街分子谦量的勿测定阶一、窑目的签熟练鹊掌握惨琼脂魂糖凝窝胶电抚泳法转。罢利用店琼脂厅糖凝役胶电寨泳测堤DN漏A清分子辽量和讲质粒收DN起A糕分子弟纯度赖，并失熟悉岔各种市核酸潮分子本在琼芒脂就糖凝元胶电猎泳中赴的位匆置分隔布和现某些脚特性单。案二、门原理码琼脂盒糖是序一种厚直链鸽多糖格。它滔是由赴B沿—药D站吡喃凉半乳欢糖和惹3侧，御6庆—凑脱水逝半乳撞糖以帝1膝，泥3烫—β卷糖犬苷键棵相连折的双评糖聚萝合物镰，链邮状琼嘴脂糖英分子胡之间确相互派以氢盈键交先联。你形成匠网络拳系统旬。琼告脂糖消带有垒亲水仍性，另不含卷有带菠电荷零的基倦因，接也不依会引滴起核漫酸分姓子的箩变性恶，而者且不霞吸附药被分驰离的加物质鞋，因迅此成绍为基巩因工池程上摸首选调的凝投胶剂抗。肾当核瓶酸分帅子在缓琼脂毙糖凝朴胶电花场中描时，筑分子害上带做电基氏团在恨pH京8.梳0贷条件呀下带艰负电新荷，叠在电芹场作燥用中嗓移向萍正数胞，至活使核习酸分肿子在催琼脂槐糖凝谷胶电肾泳中挑有其猪迁移锅率。报迁移名率与戒下列沈因素即有关欣：微1.免核酸丙分子坑的大圆小：铅在相牌同的叮条件界下，讯不同寸大小厉的核仪酸分攀子的遣迁移劳率不降同，授小分阅子的其迁病移率等大，顷大分慧子的植迁移唉率小浴。其月中线场状双流链防DN传A生分子轿在一形定浓证度琼稳脂糖晶上电荐泳的检速度用与线读状番双链墙DN疏A擦分子俩的分惠子量株对数阿成反胳比（杨图增3求－骆1主）；钻所以倍根据泛迁移魄率大泳小可载测定锁DN肺A伏分子到的大使小。筛不过统实际姥应用夏时，染通常蛛将待袖测定景的斜DN动A泥和已宋知分垄子量衔大小不的标卡准赚DN芒A封片段干进行瞒电泳超对照瞎，观吵察其追迁移朋距离此，就厅可知绸该样资品的肉分子季量大悬小。谷2坦、迁纷移率米与核粪酸构繁象有蓬关关,抛琼脂熊糖凝哨胶电狱泳可染以鉴艺别分推子量科相同登但构僚型不标同的喂DN缘A统分限子。汁在依张常规犬方法炸抽提嫁的质片粒橡DN率A枣通常嗽具有邻三种隙不同仍的构裙象枝:签超螺勿旋型任（贱SC沙）、胶线形串（瞒L备）和暮开环供型（滔OC隐）。冲这三烟种构赠型分闻子有川不同骆的迁诉移率弄。在隙一般柏情况补下膜,许超螺欢旋型纷（毛SC慎）迁栋移速膏度最周快，赴其次匠为线灭状（稍L除）分召子涝,厌最慢都的为凡开环每型（尤OC尚）分红子。吓若提酒取到凯的质率粒波DN肝A杏样品白中粉,漆还有艘染色彻体凝DN戒A瓜或劝RN尽A,丛在琼架脂糖度凝胶裳电泳慰上也抛可以狗分别膛观察宫到电骄泳区类带奔,场由此欣可分娃析样贫品的互纯度头(街图逼3让－反2)轧。牢图钟3敞－桑2蜓凝胶类电泳霜，州DN厅A辰移动裙距离烛和分狡子量想关系栗（缓刑冲液六0.产5轮×石TB置E,第0.壤5u顿g/猫ml份果溴化倘乙锭错电泳兰条件毒1v粗/c着m辰16申小时际）餐图适3宗－定3伯提纯冤和未训提纯委质粒怎DN掀A共电泳载图守3欠、迁勾移率漆与电统泳条垫件有堆关，致低电嫌压时米，线宰状迟DN型A避片段朋的迁脾移速许度与的电压锦成正您比，态当电挡压高式时，风大分榜子量说度蓄DN阴A框片段助的迁虫移速绘度就替不再膏与电筐压成扶正比铅，所般以电汉压一凶般不贝超过棚每厘旋米骑5徒伏。煤电泳物液采般用缓搁冲液董，以阴保证叹较稳若定的隔pH端钻值。棍pH赵帜值的虾剧烈救变化扭会影弦响握DN桐A侮分子砌所带含的丝电荷券，因故而影孕响正瞧常的米电泳瑞速度姿。电误泳温捎度一奖般不补影响本电泳露，但夸若因周电压堂过高足，引主起发贤热将堡会导欧致胶免融解袋。所威以可烂采用些冷却益循环衰系统呢。惠4殊、迁轰移率素与琼椅脂糖饮浓度视有关驴。浓梨度越赵大，芬迁移付率越蹲低，篮当样抵品的详分子番量较照大时班，宜滔用勺较稀蒸的琼线脂糖戚浓度剧，分万子量笑小时界，浓鸽度可象选用房大些魄，通旬常可韵选用故0.做7%闸浓度须的凝便胶。聚此浓狮度忍下分结离绢DN佳A意分子淡的范卡围为芳0.拥8兼—能10负K贩b寺。帽当核滑酸样赢品在梨琼脂剩糖凝伤胶中舒电泳电时，雾加入堂在紫录外线和照射古下能霞发射张荧光精的溴脂化乙创锭（向EB丹），今EB瓦就插陕入储DN却A店分子宿中，羡形成拆荧光退络合昏物，联使其毫发射榜荧光碰增强出几十肝倍，庙这样位极其旅微量鸡的冤DN觉A深也可玻观察榜到。椅例如慧用肉故眼观犬察，衰可检锁测到孟0.钢05悟ug箱—罗0.纤1u君g魄的鞭DN脸A冻。斑三、芝材料茅1负、朗DN腔A案样品续样品宇A农：针λ命DN它A破（限与制性雅核酸广内切蛛酶嫌Ec用oR碰I镇，奋Hi白nd嫂II粒I宅酶切唇后样毯品）君样品党B卡：染粱色体读DN转A+诞RN铁A厦样品仔C猴：质端粒红DN佛A玻（三猴种构盼型吼DN脾A湿）饱2揭、电懒泳缓仓冲液吓：燃Tr泥is挡—勇乙酸危0.执04罢mo吩l/谢L闸PH损8.陵0诵0.史00佣2m捕ol鸣/L邻E宇DT闯A词3怪、加待样缓习冲液少：禾0.郑25包%姐溴酚拼兰滨40坡%捞w/膝v觉蔗糖禽4准、溴惯化乙稍锭溶复液：胡0.惹05招mg肚/m性l狐溴化粒乙锭降/震水纺5头、琼限脂糖增6靠、水淹平式锡微型激电泳爆槽；流电泳屡仪；姨微量疲取样唱器，补玻片抹等。超四、躲实验惕步骤假1缴、用蹄胶纸状带把悲电泳梦槽两仪端封焰好，召以免兴凝胶批溶液况漏出谊，将督电泳痛槽置辣于平责面水腥平。系2适、选盆择孔渔径适缴宜的嗽点样渠板（叙梳板堡）。档将梳胁板置练于距店凝胶另槽一获端一盲厘米悄并与眼该端远平行虚的榜位置村。梳玉板垂理直架氏在槽花上，默使梳博板底啊部不讲要触局到槽耕底部亡，大挠约相草距便1也毫米益左右赴。匪3踪、称弄取琼戒脂糖论0.斗3应克置距三角咱瓶中揭，加今入崖40企生毫升钻电泳委缓冲胳液，躲于电歼炉上昨加热兽，至贤琼脂朽糖完泊全融摩化，活取少轨量凝辱胶溶怨液沿需胶带时纸边梅缘封库好，窝防止筛倒凝棚胶板步时出丛现渗帝漏。备4择、在炮凝胶傲溶液汇中加蠢入金0.投4棕毫升墨溴化木乙锭鼓溶液钢（攀EB撑谷最终沃浓度温为吐0.辱5u享g/舞ml渣）摇叶匀，碑待凝辅胶溶英液冷捆却至迷55樱℃甩（手盾摸烧亚瓶不剖烫手扫）轻共轻地雨倒入示水平料微型奉电泳负槽内矿。除次掉气洞泡，雄或用管梳环板将贤气泡脑排至钟凝胶巧边缘谋。斥5劣、室滑温下漠，凝狠胶放屈置顷30皱令分钟骡，待浴其凝敌固后蛛，拔鸦去梳测板，律保持费电样风孔完扎好。泡除掉桃防渗讯漏的倡胶带换纸。牢把制升备好励的装够凝胶幕块的糟微型垦电泳父槽，斜放入危水平萝大电耀泳槽踢，点沉样孔网一端誉应在遣大电评泳槽遍电极胜负极顾一端绪。然睡后在须水平晚大电坑泳槽运内加晶入电逗泳缓姥冲液若，使尚其液戚面高虾于凝框胶诊1咬毫米匙左右害。遍6枪、按词以下虹混合晚好样搬品（该以下名为参驻考值日，可走__拥__投__念__永__谨_更视实瞒际样它品作素调节卡）。助①翁：军2榜微升爹样品败A希，辽2燃微升洁加样全缓冲减液，开10病落微升寇电泳栋缓冲爷液。记②辟：荒2很微升扶样品台B为，卫2兄微升浊加样硬缓冲色液，恶10彻茎微升撒电泳里缓冲晴液。瓜③盾：求2帅微升朗样品俊C误，去2越微升半加样刺缓冲基液，折10迫锯微升桌电泳名缓冲贤液。撇7粉、在荣玻片惰上各锈把上停述样截品混绳合均滚匀，酬用微趴量取回液器兼分别卸吸取骗样品啊，小创心将许样品游注入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