基因工程疫苗

PAGEPAGE1基因工程疫苗第一篇：基因工程疫苗基因工程疫苗发布时间：20XX-03-09|基因工程疫苗是用基因工程方法或分子克隆技术，分离出病原的保护性抗原基因，将其转入原核或真核系统使表达出该病原的保护性抗原，制成疫苗，或者将病原的毒力相关基因删除掉，使成为不带毒力相关基因的基因缺失苗。戊肝疫苗研制基因工程疫苗是用基因工程方法或分子克隆技术，分离出病原的保护性抗原基因，将其转入原核或真核系统使表达出该病原的保护性抗原，制成疫苗，或者将病原的毒力相关基因删除掉，使成为不带毒力相关基因的基因缺失苗。包括多肽或亚单位疫苗、颗粒载体疫苗、病毒活载体疫苗、细菌活载体疫苗、基因重配疫苗以及基因缺失疫苗如乙肝疫苗等。20XX年1月11日——一个原本并不特殊的日子，却因一份捷报而注定要被载入史册。科技部在这一天宣布：由厦门大学和养生堂万泰公司联合研制的“重组戊型肝炎疫苗（大肠埃希菌）”已获得国家一类新药证书和生产文号，成为世界上第一个用于预防戊型肝炎的疫苗。这是50年来，人类在经受了10余次万人以上的戊肝重大疫情后等来的一份捷报。14年“磨”出世界第一戊肝疫苗的成功研发，标志着我国在生物制药原始创新领域取得重大突破，它的面世让中国在基因工程病毒疫苗的原始创新上实现了零的突破。11.3万人、30余万针次的研究显示，该疫苗具有良好的安全性和保护性。2月28日，疫苗研发团队的核心成员——厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心主任夏宁邵教授，在接受科技日报记者采访时表示：“重组戊肝疫苗是迄今唯一使用大肠杆菌表达系统研制的病毒疫苗。它的成功研制扭转了国际医药界中‘原核系统不能用于病毒疫苗研制’的传统认识。”“传统的疫苗研制方法主要有两种途径。一种是将病毒放在细胞内进行大量培养、灭活，再辅以佐剂，用这种方法制成的疫苗叫灭活疫苗；第二种是将病原体在体外反复传代，去除其致病性，但保留其免疫原性，用这种方法制成的疫苗叫减毒活疫苗。而我们这次是采用的基因工程技术。”夏宁邵告诉记者，“与传统灭活疫苗和减毒活疫苗比较，基因工程疫苗的研发不依赖于病原体的培养，因此对于大量尚未建立成熟体外培养技术的病原体也能进行疫苗的研制。在生产过程中，基因工程疫苗完全不涉及病原体，消除了由于病原体灭活不彻底或减毒不完全导致的安全性问题。不仅如此，基因工程疫苗的研发还可通过精心设计的纯化过程实现对生产过程中伴随的各类杂质的高效清除和残余成分的高度可控，降低了由于杂质导致的各类接种副反应的风险，提高了疫苗的安全性和耐受性，同时还能提高不同疫苗生产批次间的均一性。”从1998年开始，时任国家试剂与疫苗中心主任、厦门大学公共卫生学院院长的夏宁邵便带领着他的团队，着手进行戊肝疫苗的研发。与所有的新药研发一样，重组戊肝疫苗的研发并非一路坦途。历经14年艰苦研发，由厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心和企业的20XX名科研人员组成的课题组，在基础研究领域、应用基础研究领域和应用研究领域，取得了保护性抗原识别及结构表征、病毒颗粒组装机制等多项发现成果，并突破了原核表达类病毒颗粒、高效纯化及体外自组装等一系列关键技术障碍，创建出具有多项全球自主知识产权的核心技术体系。夏宁邵告诉记者，该体系的关键技术已在14个主要国家申请了12项发明专利，对我国发展具有自主知识产权的创新疫苗并高起点地参与国际竞争具有深远意义。基于该体系关键技术，团队研制的另一个疫苗“人乳头瘤病毒16/18型二价疫苗”（宫颈癌疫苗）已经打破了美英技术封锁成为全球第3个、国内第1个获准进行临床试验的宫颈癌疫苗，目前已基本完成Ⅱ期临床试验，初步结果显示该疫苗安全并能刺激人体产生高滴度抗体。夏宁邵说：“戊肝疫苗是国家工程的成果，也是产学研协同创新的成果。”这份30微克的戊肝疫苗，不仅见证着研发人员的辛劳，同时也记录着我国重大科技专项自主创新的步伐：自20XX年起，国家863计划开始对戊肝疫苗项目进行支持，有效地带动了地方、企业投入研发资金近5亿元，其临床研究也被列入“十一五”863计划重大项目中，这为课题组在国内外率先研制成功戊型肝炎疫苗提供了重要支撑。谈及疫苗研发的前景，夏宁邵显得信心满怀。他的信心来自于国家对这个产业的大力支持：20XX年，国家将生物医药确定为“十二五”期间重点发展的战略性新兴产业，尤其是用于应对突发生物事件的疫苗及免疫佐剂等还被列入了公共安全领域生物安全保障方面的优先发展主题。现阶段疫苗研发应以集成创新为主作为全国政协委员，中国食品药品检定研究院菌种室主任王国治一直关注着疫苗领域的发展。对夏宁邵团队所取得的成功，他难掩心中的喜悦和激动：“我国能在世界上第一个研发出戊肝疫苗确实非常令人振奋！”但就国内疫苗研发的整体水平，王国治直言不讳：“我国在疫苗研发领域的基础研究力量还比较薄弱，十个研发有九个都出不了结果。而国家又太过于强调疫苗研发的完全自主知识产权，这与我国目前的疫苗研发水平不相符合。”“中国的疫苗研发，前期工作几乎都是由大专院校的研究生在做，其可信度和创新性都不够，后期工作也往往跟不上。多数人的研究都以仿制为主，尽管拿了专利，出了蛋白，但真正要作出成果却很难，常常是实验完了，出来一大堆报废产品。”王国治认为，针对我国在疫苗领域现有的研发水平，“在引进国外成熟技术的基础上进行整合创新、集成创新才是这个阶段的重点。”王国治在考察了发达国家的疫苗生产企业后发现：在疫苗研发上，中国缺的不是硬件，也不是钱，缺的是技术和管理规范。中国对疫苗生产企业的硬件要求比国外更严格，可在软件方面比如管理规范上却放得比较宽。而事实上，疫苗生产过程中，后期主要是规范性管理的问题。在王国治看来，目前整个疫苗产业还缺少一种系统的协作。他认为，“这与国家在疫苗研发领域和产业规划上缺乏一种整体的顶层设计有关。”王国治告诉记者，受多种因素制约，国家免疫规划疫苗政府定价总体水平偏低，利润空间较小，以一支重组蛋白类的乙肝疫苗为例，国家定价只有3块多钱每人次，这在一定程度上影响了企业提高产品质量和进行产品升级换代的积极性。而第二类疫苗为市场调节价格产品，流通环节较多，市场价格偏高。“疫苗产业是关系国计民生的朝阳产业。”对此，王国治建议，国家在制定产业发展策略时，应当充分考虑产业自身的特点和不同的发展背景。在投入上，对与老百姓生命利益息息相关的和研发成本高、失败风险大的一类疫苗，以及人兽共患病的疫苗，国家应当加大扶持力度，而对具有良好发展前景和自主知识产权的二类疫苗，则应当以引导企业生产为主。加大投入优先发展疫苗产业对疫苗产业的明天充满同样期待的，还有全球第一支甲流疫苗的生产企业——北京科兴生物制品有限公司的总经理尹卫东。在甲流肆虐的20XX年，尹卫东带领着自己的员工在短短的87天中成功生产出全世界第一支甲流疫苗。在他看来，接种疫苗不但是保护自己的一种措施，同时也是保护他人的一种手段。“然而目前，人们对接种疫苗的社会认知度却还远远不够。”尹卫东举例说，为了减少老年人群因流感并发症带来的死亡，北京市政府每年都为60岁以上的老人免费接种流感疫苗，然而却只有约50%的老年人进行了自愿接种。“如果能让老年人接种流感疫苗的百分比从现在的50%提高到80%，老年人因老年病和流感造成的死亡率就会有所降低，这样，实现‘十二五’期间将我国人均寿命提高1岁的目标就会立竿见影。”尹卫东说，“但如果没有疫苗产业的发展就提供不了这样的服务。疫苗产业不仅具有技术高附加值的特性，而且还能节省资源和能源，对整个经济社会的发展具有保驾护航的作用，应该得到优先发展。”作为一个企业家，尹卫东对疫苗产业的前景非常看好，同时，他也有着不为人知的担忧和顾虑：疫苗研发实现产业化之后，国家如何使用这种疫苗决定了疫苗使用的范围和方向。而在现行的政府采购“双信封”机制中，却常常出现重价格信封、轻质量信封的现象。对此，尹卫东有些无奈：疫苗研发本身具有不确定性，企业自身控制风险的能力就较小，而实现产业化需要有除技术以外的生产要素的巨大投入，包括产业化基地的建设等都是必不可少的投资，如果国家在生产要素的政策上不加以扶持，这个战略性新兴产业就很难得到进一步发展，最终只会让外国的企业和资本乘虚而入。第二篇：基因工程疫苗的概况内蒙古师范大学学年论文内蒙古师范大学学年论文基因工程疫苗的概况生命科学与技术学院指导教师摘要疫苗是人类目前可以彻底消除某一疾病的唯一武器，随着分子生物学及重组DNA技术的发展，基因工程疫苗的研究不断深入。基因工程疫苗有很大的发展前景，它包含了植物基因工程疫苗，动物基因工程疫苗，主要在医学方面有巨大的贡献。关键词基因工程疫苗基因工程疫苗是用分子生物学技术,对病原微生物的基因组进行改造,以降低其致病性,提高其免疫原性,或者将病原微生物基因组中的一个或多个对防病治病有用的基因克隆到无毒的原核或真核表达载体上制成疫苗,接种动物产生免疫力和抵抗力,达到防制传染病的目的。疫苗也是当前制药业最热门的产品之一，全球疫苗市场一直处在一个快速增长期，过去的20XX长了十倍。近两年的增长率约为10%+20XX，全球疫苗市场约为130亿美元。20XX80年代随着现代生物学技术的兴起，特别是DNA重组技术的出现，为研制新一代的疫苗提供了崭新的方法。基因工程疫苗是用分子生物学技术,对病原微生物的基因组进行改造,以降低其致病性,提高其免疫原性,或者将病原微生物基因组中的一个或多个对防病治病有用的基因克隆到无毒的原核或真核表达载体上,制成疫苗，接种动物,产生免疫力和抵抗力，达到防制传染病的目的。目前利用基因工程技术已经和正在研制开发的新型疫苗主要有亚单位疫苗、活载体疫，传统疫苗在预防和控制传染病过程中起到了重要的作用，但随着现代生物学技术日新月异的发展，尽管目前基因工程疫苗研究还未获得全面突破性进展，但由于传统疫苗的缺陷和基因工程疫苗的潜在优势，基因工程疫苗逐渐内蒙古师范大学学年论文成为疫苗研究的热点。[1]一植物基因工程疫苗近年来的许多研究已经显示，动物和人体摄取表达抗原的转基因植物能激发机体的血清和黏膜产生特异性抗体，植物口服疫苗的研究是当今疫苗研究领域的热点之一。下面综述亚单位抗原在转基因植物中的表达水平及方式、转并基于植物口服递送疫苗的免疫原性及免疫保护、基因植物疫苗面临的问题等，展望其研究趋势和应用前景。植物基因工程疫苗是利用植物系统表达病原菌抗原蛋白一个或几个亚单位的疫苗，他没有病原菌完整的侵染能力，却可以使机体对特异的病毒或细菌产生免疫应答反应。由于转基因植物产生的疫苗对动物实施免疫只是简单地摄取含这种疫苗的植物组织或种子。所以这种疫苗不会被酶类所破坏，可通过机体肠道粘膜作用激发特异性免疫应答，食动物或的持久性疾病防御能力，且没有或很少出现病原体的过敏反应。[2]传染病一直是威胁人、兽健康的重要疾病．已消灭的传染病都得益于疫苗的使用．疫苗的类型由菌体疫苗发展到亚单位疫苗、DNA疫苗等，但这些产品价格昂贵，不易推广使用。与常规的注射疫苗相比，植物基因工程疫苗生物量大，可大范围种植与栽培；成本低廉，容易运输与保存，可直接通过食用(口服)接种，无需提取纯化；由于植物细胞壁的存在，使免疫时抗原的释放具有缓释作用，所以，植物转基因疫苗的研究和应用前景广阔，是近年来疫苗学研究的热点。证明，在转基因植物中表达的蛋白不仅可保持蛋白的天然构象，还保留了激发B细胞和T细胞免疫反应的抗原决定簇．依此首次提出的可食疫苗的概念，引起了学术界和企业界的广泛关注．Kapusta等利用表达HBsAg的转基因生菜通过志愿者的口服免疫，初步测试了疫苗的免疫效果．结果表明，转基因植物口服疫苗能有效地诱导人体的特异性免疫应答。现已证明，植物转基因疫苗口服免疫后不但可以诱导机体产生体液免疫、细胞免疫，而且可诱导机体产生免疫。1990年Curtiss等在烟草种子中成功表达变异链球菌表面蛋白A(SPaA)，该转基因烟草所表达的SPaA具有免疫原性．1992年Mason等将乙肝表面抗原(HbsAg)转基因烟草生产乙型肝炎疫苗的研究收稿日期：内蒙古师范大学学年论文20XX-08-27基金项目：湖南农业大学人才科学基金(03WD07)作者简介：黄复深(1964-)，男，湖南新邵人，博士，湖南农业大学教授．216湖南农业大学学报(自然科学版)20XX年4月病原微生物、毒素等)结合，从而产生免疫保护作用．粘膜内参与体液免疫的B淋巴细胞被激活后，分泌血清型抗体到血液中，参与免疫保护．粘膜免疫的Th细胞产生的细胞因子，也可激活细胞毒性T淋巴细胞，产生细胞免疫。可见，转基因植物疫苗口服免疫后，不但可诱导粘膜免疫，还可引起体液免疫和细胞免疫．研究表明，粘膜免疫可对胃肠道和非胃肠道传染病产生免疫保护作用。转基因植物疫苗研究进展植物转基因疫苗的免疫保护效果到目前为止，植物中得到了表达的抗原已有几十种。[3]二动物基因工程疫苗近10多年是世界生物技术迅速发展时期，无论在基础研究方面还是应用开发方面，都取得了令人瞩目的成就，生物技术在生命科学的所有领域得到了广泛的应用，促进了相关学科的发展。尤其是近年来利用生物高新技术研制成功了许多动物基因工程疫苗，展示了其广阔的应用前景，将在动物疫病的控制上具有巨大潜力。本文拟就动物基因工程疫苗的特点、研究现状、存在问题及其对策作一简要叙述。１动物基因工程疫苗的特点目前用于防制人和动物传染病的疫苗，无论是灭活苗、弱毒苗，还是亚单位苗，其研制都是以大量培养致病微生物为基础的，这不仅给疫苗的制造带来了局限性，同时在疫苗的安全性、免疫性能、产量及保存等诸多方面存在缺陷，如病原微生物灭活不彻底，导致强毒散播；致弱的疫苗返强等。近几年发展起来的基因工程技术为研制新的更为有效的疫苗带来了希望，已成为目前生物技术的热点之一。Jenner用痘苗病毒免疫接种使机体产生抗传染免疫，经过10多年的发展，疫苗已成为控制多种动物传染病的有效方法，由于某些病原评的遣传结构容易改变导致现有的一些疫苗无效，某些病原体不能在体外培养中生长或不能在体外传代。至今尚无相应的疫苗此外用常规方法生产的毒力致弱活疫苗容易引起病原体扩散且某些疫苗表现出残余致病力引起不良副作，甚至导致死亡。所以有必要寻找新的方法，生产更有效更安全性能更好的疫苗。内蒙古师范大学学年论文传统疫苗的研制和生产主要是通过改变培养条件，或在不同寄主动物上传代使致病微生物毒性减弱，或通过物理、化学方法将其灭活来完成的。随着人类知识的不断进步，传统疫苗的局限性也日益显露出来：(1)动物和人类的病毒需要在动物细胞中培养，这使得疫苗生产的成本很高；(2)疫苗中的致病物质在疫苗生产过程中有可能没有完全杀死或充分减毒，这会导致疫苗中含有强毒性致病物质，进而使得疾病在更大的范围内传播；(3)减毒菌株有可能会发生突变；(4)有些疾病(例如艾滋病)用传统的疫苗防治收效甚微。与传统疫苗相比，基因工程疫苗有以下优点：(1)把保护性抗原基因插入载体的能力,修饰的载体能表达来自病原微生物的保护性抗原基因,细菌和病毒载体，都能产生兼有活疫苗和灭活苗优点的疫苗,这种类型的疫苗具有亚单位苗的安全性又具有活疫苗的效力；(2)它们易于大规模使用(喷雾或气雾)；(3)生产费用相对较低,目前世界上几个研究组织正在生产特定的禽用疫苗载体。基因工程提供了一个研制疫苗的更加合理的途径,现在可以在相对可以预测的情况下生产无致病性的、稳定的细菌和病毒,这与常规活疫苗研制的经典发展历程相反,同时还能生产与自然型病原可区分的疫苗,这将大大有助于疫病的诊断和扑灭程。基因工程疫苗应该比目前应用的常规疫苗具备更多优点,为了被人们接受,它们必须具备安全性、生产工艺、免疫效力、免疫期、免疫途径、生产成本等方面的优点,并被有关管理部门和公众接受。参考文献[1]崔宝安动物基因工程疫苗研究进展第7卷第1期1995年6月[2]王伟青植物基因工程疫苗研究进展《兽药市场指南》20XX年第1期5-6页[3]袁鑫植物基因工程疫苗研究进展第34卷第2期20XX年4月[4]李林，习佳飞.转基因植物口服疫苗的免疫机制研究进展[J].国外医学免疫学分册，20XX[5]于源华，何秀霞，郭中满，等．乙肝表面抗原小蛋白S基因导入番茄的遗传转化体系的建立[J].东北师范大学学报：自然科学版，20XX，35(4)：72-75．致谢内蒙古师范大学学年论文第三篇：“十三五”重点项目-基因工程疫苗项目可行性研究报告“十三五”重点项目-基因工程疫苗项目可行性研究报告编制单位：北京智博睿投资咨询有限公司0本报告是针对行业投资可行性研究咨询服务的专项研究报告，此报告为个性化定制服务报告，我们将根据不同类型及不同行业的项目提出的具体要求，修订报告目录，并在此目录的基础上重新完善行业数据及分析内容，为企业项目立项、申请资金、融资提供全程指引服务。可行性研究报告是在招商引资、投资合作、政府立项、银行贷款等领域常用的专业文档，主要对项目实施的可能性、有效性、如何实施、相关技术方案及财务效果进行具体、深入、细致的技术论证和经济评价，以求确定一个在技术上合理、经济上合算的最优方案和最佳时机而写的书面报告。可行性研究是确定建设项目前具有决定性意义的工作，是在投资决策之前，对拟建项目进行全面技术经济分析论证的科学方法，在投资管理中，可行性研究是指对拟建项目有关的自然、社会、经济、技术等进行调研、分析比较以及预测建成后的社会经济效益。在此基础上，综合论证项目建设的必要性，财务的盈利性，经济上的合理性，技术上的先进性和适应性以及建设条件的可能性和可行性，从而为投资决策提供科学依据。投资可行性报告咨询服务分为政府审批核准用可行性研究报告和融资用可行性研究报告。审批核准用的可行性研究报告侧重关注项目的社会经济效益和影响；融资用报告侧重关注项目在经济上是否可行。具体概括为：政府立项审批，产业扶持，银行贷款，融资投资、投资建设、境外投资、上市融资、中外合作，股份合作、组建公司、征用土地、申请高新技术企业等各类可行性报告。报告通过对项目的市场需求、资源供应、建设规模、工艺路线、设备选型、环境影响、资金筹措、盈利能力等方面的研究调查，在行业专家研究经验的基础上对项目经济效益及社会效益进行科学预测，从而为客户提供全面的、客观的、可靠的项目投资价值评估及项目建设进程等咨询意见。报告用途：发改委立项、政府申请资金、申请土地、银行贷款、境内外融资等关联报告：基因工程疫苗项目建议书基因工程疫苗项目申请报告基因工程疫苗资金申请报告基因工程疫苗节能评估报告基因工程疫苗市场研究报告基因工程疫苗商业计划书基因工程疫苗投资价值分析报告基因工程疫苗投资风险分析报告基因工程疫苗行业发展预测分析报告可行性研究报告大纲（具体可根据客户要求进行调整）第一章基因工程疫苗项目总论第一节基因工程疫苗项目概况1.1.1基因工程疫苗项目名称1.1.2基因工程疫苗项目建设单位1.1.3基因工程疫苗项目拟建设地点1.1.4基因工程疫苗项目建设内容与规模1.1.5基因工程疫苗项目性质1.1.6基因工程疫苗项目总投资及资金筹措1.1.7基因工程疫苗项目建设期第二节基因工程疫苗项目编制依据和原则1.2.1基因工程疫苗项目编辑依据1.2.2基因工程疫苗项目编制原则1.3基因工程疫苗项目主要技术经济指标1.4基因工程疫苗项目可行性研究结论第二章基因工程疫苗项目背景及必要性分析第一节基因工程疫苗项目背景2.1.1基因工程疫苗项目产品背景2.1.2基因工程疫苗项目提出理由第二节基因工程疫苗项目必要性2.2.1基因工程疫苗项目是国家战略意义的需要2.2.2基因工程疫苗项目是企业获得可持续发展、增强市场竞争力的需要2.2.3基因工程疫苗项目是当地人民脱贫致富和增加就业的需要第三章基因工程疫苗项目市场分析与预测第一节产品市场现状第二节市场形势分析预测第三节行业未来发展前景分析第四章基因工程疫苗项目建设规模与产品方案第一节基因工程疫苗项目建设规模第二节基因工程疫苗项目产品方案第三节基因工程疫苗项目设计产能及产值预测第五章基因工程疫苗项目选址及建设条件第一节基因工程疫苗项目选址5.1.1基因工程疫苗项目建设地点5.1.2基因工程疫苗项目用地性质及权属5.1.3土地现状5.1.4基因工程疫苗项目选址意见第二节基因工程疫苗项目建设条件分析5.2.1交通、能源供应条件5.2.2政策及用工条件5.2.3施工条件5.2.4公用设施条件第三节原材料及燃动力供应5.3.1原材料5.3.2燃动力供应第六章技术方案、设备方案与工程方案第一节项目技术方案6.1.1项目工艺设计原则6.1.2生产工艺第二节设备方案6.2.1主要设备选型的原则6.2.2主要生产设备6.2.3设备配置方案6.2.4设备采购方式第三节工程方案6.3.1工程设计原则6.3.2基因工程疫苗项目主要建、构筑物工程方案6.3.3建筑功能布局6.3.4建筑结构第七章总图运输与公用辅助工程第一节总图布置7.1.1总平面布置原则7.1.2总平面布置7.1.3竖向布置7.1.4规划用地规模与建设指标第二节给排水系统7.2.1给水情况7.2.2排水情况第三节供电系统第四节空调采暖第五节通风采光系统第六节总图运输第八章资源利用与节能措施第一节资源利用分析8.1.1土地资源利用分析8.1.2水资源利用分析8.1.3电能源利用分析第二节能耗指标及分析第三节节能措施分析8.3.1土地资源节约措施8.3.2水资源节约措施8.3.3电能源节约措施第九章生态与环境影响分析第一节项目自然环境9.1.1基本概况9.1.2气候特点9.1.3矿产资源第二节社会环境现状9.2.1行政划区及人口构成9.2.2经济建设第三节项目主要污染物及污染源分析9.3.1施工期9.3.2使用期第四节拟采取的环境保护标准9.4.1国家环保法律法规9.4.2地方环保法律法规9.4.3技术规范第五节环境保护措施9.5.1施工期污染减缓措施9.5.2使用期污染减缓措施9.5.3其它污染控制和环境管理措施第六节环境影响结论第十章基因工程疫苗项目劳动安全卫生及消防第一节劳动保护与安全卫生10.1.1安全防护10.1.2劳动保护10.1.3安全卫生第二节消防10.2.1建筑防火设计依据10.2.2总面积布置与建筑消防设计10.2.3消防给水及灭火设备10.2.4消防电气第三节地震安全第十一章组织机构与人力资源配置第一节组织机构11.1.1组织机构设置因素分析11.1.2项目组织管理模式11.1.3组织机构图第二节人员配置11.2.1人力资源配置因素分析11.2.2生产班制11.2.3劳动定员表11-1劳动定员一览表11.2.4职工工资及福利成本分析表11-2工资及福利估算表第三节人员来源与培训第十二章基因工程疫苗项目招投标方式及内容第十三章基因工程疫苗项目实施进度方案第一节基因工程疫苗项目工程总进度第二节基因工程疫苗项目实施进度表第十四章投资估算与资金筹措第一节投资估算依据第二节基因工程疫苗项目总投资估算表14-1基因工程疫苗项目总投资估算表单位：万元第三节建设投资估算表14-2建设投资估算表单位：万元第四节基础建设投资估算表14-3基建总投资估算表单位：万元第五节设备投资估算表14-4设备总投资估算单位：万元第六节流动资金估算表14-5计算期内流动资金估算表单位：万元第七节资金筹措第八节资产形成第十五章财务分析第一节基础数据与参数选取第二节营业收入、经营税金及附加估算表15-1营业收入、营业税金及附加估算表单位：万元第三节总成本费用估算表15-2总成本费用估算表单位：万元第四节利润、利润分配及纳税总额预测表15-3利润、利润分配及纳税总额估算表单位：万元第五节现金流量预测表15-4现金流量表单位:万元第六节赢利能力分析15.6.1动态盈利能力分析16.6.2静态盈利能力分析第七节盈亏平衡分析第八节财务评价表15-5财务指标汇总表第十六章基因工程疫苗项目风险分析第一节风险影响因素16.1.1可能面临的风险因素16.1.2主要风险因素识别第二节风险影响程度及规避措施16.2.1风险影响程度评价16.2.2风险规避措施第十七章结论与建议第一节基因工程疫苗项目结论第二节基因工程疫苗项目建议第四篇：基因工程《基因工程论文》嗜热解烃基因工程菌SL-21的构建学院：生命科学学院班级：生物技术12-2学号：701120XX09姓名：陈昆任课教师：张锐嗜热解烃基因工程菌SL-21的构建摘要﹕从以C15—C36直链烷烃为惟一碳源生长的解烃菌———地芽孢杆菌MD-2细胞中获得了1个新的烃降解基因———烷烃单加氧酶基因sladA。将基因sladA克隆到质粒pSTE33上,构建了重组质粒pSTalk。通过电转化将pSTalk转化入嗜热脱氮土壤芽孢杆菌ZJ-3内,构建了基因工程菌SL-21。SL-21兼具嗜热和解烃的功能,在70℃条件下,14d后对原油的降解率达75.08%。研究结果表明,可以通过体外重组的方式向嗜热菌中引入烃降解基因,从而构建嗜热解烃基因工程菌。关键词:微生物采油;烃类降解菌;嗜热解烃基因;质粒;基因工程菌微生物降解原油是微生物提高原油采收率的主要机理之一。研究结果表明,在解烃菌作用下原油的族组分发生变化,轻质组分增加,粘度下降,改善了原油的流动性;同时,解烃菌还可以将烃类分子转化成有机溶剂、表面活性剂、酸和气体等驱油物质。迄今为止,从自然界筛选的高效解烃菌绝大多数为嗜温微生物,最适合生长温度一般为20XX5℃,很难适应油藏的高温环境。笔者从1株解烃菌细胞中分离出1个新的烃降解基因———烷烃单加氧酶基因sladA,并采用基因工程手段将此基因转化到另外1株最适合生长温度为70℃的嗜热菌体内,构建了嗜热解烃基因工程菌SL-21。该基因工程菌既具有高效的解烃功能,又能适应油藏高温环境,在微生物采油中具有良好的应用前景。1.1实验材料实验材料包括限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ;UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒、PCR片断回收试剂盒;大肠杆菌感受态细胞E.coliDH5α;pGEM-Teasy载体;质粒pSTE33kanr,Ampr,EcoRⅠ/XhoⅠ;异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)、十二烷基硫酸钠(SDS)、氨苄青霉素(Amp)、卡那霉素(Kan)。LB培养基按文献配制。无机盐培养基组成:Na2HPO40.06g;KH2PO40.02g;NaNO30.2g;CaCl20XX01g;FeSO40.001g;MgSO40.03g;蒸馏水100mL;pH值为7.2。嗜热脱氮土壤芽孢杆菌ZJ-3,分离自胜利油区孤岛油田中一区馆3区块采出液,最适合生长温度为70℃;地芽孢杆菌MD-2,以C15—C36直链烷烃为惟一碳源生长,分离自胜利油区原油污染土壤。1.2实验方法DNA的操作基因组DNA小量提取,利用聚合酶链式反应(PCR)对DNA扩增、PCR产物的回收、酶切与连接,质粒DNA提取和基因序列测定等均按文献[13-14]方法进行。菌株培养所涉及到的菌株培养均在温度为70℃,转速为180r/min的条件下进行振荡培养。基因工程菌的构建和筛选方法ZJ-3感受态细胞的制备按文献[13-14]方法进行。用构建的重组质粒pSTalk在最佳条件下电转化ZJ-3感受态细胞构建基因工程菌。在含有50μg/mLKan的LB琼脂平板上挑选10个阳性克隆接种到5mLLB培养基中,培养过夜,获得种子液。将该种子液接种到20XXL以液蜡为惟一碳源的无机盐培养基中,培养5d后用CCl4抽提剩余的液蜡,用红外测油仪测定烃的剩余量,根据菌株降解液蜡的速率筛选出目的基因工程菌。基因工程菌的诱导表达及SDS检测挑取阳性克隆接种于含100μg/mLAmp的10mL的LB液体培养基中,180r/min下振荡培养至光密度值达到0.6(检测光波波长为600nm),加诱导物IPTG至终浓度为1mmol/L,振荡培养8h,收集表达菌体,加SDS上样缓冲液,于100℃水浴10min后上样,用12%的SDS电泳检测。基因工程菌降油能力测试将基因工程菌接入20XXLB培养基中,培养12h,以5000r/min的速度离心5min收集菌体,用无菌生理盐水洗涤菌体1次,加20XX无菌生理盐水悬浮,作为菌株利用烷烃生长的种子液。取菌悬液按1%接种量接入20XXL无机盐培养基中,加入2%孤岛油田中一区馆3区块原油或2%的液体石蜡作为惟一碳源培养,取样稀释涂布计数。原油降解实验在无机盐培养基中添加2%的原油,按1%接种量接入基因工程菌,培养14d。用正己烷萃取降解后的原油,用气相色谱仪测定原油饱和烃组分的降解情况。原油降解率为菌株降解前、后原油量的差值与菌株降解前原油量的比值。2实验结果与分析2.1MD-2基因组DNA的检测对MD-2基因组进行提取和纯化。提取后的染色体DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测,相对分子质量不小于23kb,说明提取的DNA完好。在检测光波波长为260280nm条件下分别测出DNA的光密度,其比值为1.95,换算出DNA的质量浓度为1400g/mL,表明DNA纯度较好,无蛋白、RNA、酚和多糖物质的干扰。2.2烷烃单加氧酶基因的克隆与序列分析依据美国国立卫生研究院基因序列数据库(Genbank)中的烷烃单加氧酶基因开放阅读框两端保守序列,设计了一对兼并引物以MD-2基因组DNA为模板进行PCR扩增,将约1.3kb的PCR产物回收后连接到pGEM-Teasy载体上,转入E.coliDH5α,挑取阳性克隆质粒进行测序。测序结果经Genbank检索,表明该DNA序列是个新的烷烃单加氧酶基因,命名为sladA。2.3基因工程菌的构建及筛选通过PCR扩增sladA后,将PCR产物用EcoRⅠ或XhoⅠ消化,分离纯化出1329bp的片断,与经EcoRⅠ或XhoⅠ消化的pSTE33质粒连接,构建成含sladA的重组质pSTalk。经电泳鉴定表明(图1),重组质粒构建成功。2.4基因sladA在基因工程菌SL-21中的诱导表达由基因工程菌SL-21全蛋白的SDS图谱可见(图2),在烷烃单加氧酶基因sladA对应蛋白大小的地方扫描到高信号强度,表明sladA基因在SL-21中得以表达。2.5基因工程菌SL-21碳源生长基因工程菌SL-21在以原油和液体石蜡为惟一碳源的无机盐培养基中培养,在70℃和180r/min条件下,经过3d的延滞期后进入对数期,菌体数增加。17d后,菌体数为接菌初期的5倍,表明SL-21能够利用原油或液体石蜡作为惟一碳源生长。2.6对原油的降解作用由原油饱和烃组分的降解情况可看出(图3),基因工程菌对原油有很明显的降解效果,几乎将饱和烃降解完全。经对气相色谱各峰面积对比,计算出各峰面积的含量和饱和烃组分降解率(表2)。基因工程菌SL-21对原油的降解率为75.08%。实验结果表明,烃类降解菌地芽孢杆菌MD-2细胞提取的烷烃单加氧酶基因sladA可以在嗜热脱氮土壤芽孢杆菌ZJ-3中表达。但不同的基因工程菌株中烷烃单加氧酶基因sladA表达的效率不同,需要通过菌株对原油的降解评价进一步筛选。获得的对原油降解速率最高的基因工程菌SL-21能在70℃高温条件下生长,并且对原油降解效果明显。因此以体外重组方式向嗜热菌中引入烃类降解基因构建嗜热解烃基因工程菌在技术上是可行的。3结论以地芽孢杆菌MD-2为目标菌株,克隆和表达了降解长链烷烃的单加氧酶基因sladA,并在嗜热脱氮土壤芽孢杆菌ZJ-3中正确表达了基因sladA,构建了基因工程菌SL-21。基因工程菌SL-21在70℃条件下,能以原油或液体石蜡为惟一碳源生长。14d对原油的降解率为75.08%,对原油饱和烃组分均有明显的降解效果。该基因工程菌既可以用于微生物驱油技术,又可以用于高温油田污水的生物处理。利用基因工程的方法可以获得既能耐受极端环境,又具有良好功能的基因工程菌株,是石油微生物菌种选育的重要方向。参考文献:[1]周金葵,王大威,廖明清,等.一株石油烃降解菌的筛选及性能研究[J].大庆石油地质与开发,20XX,26(6):119-123.[2]汪卫东,汪竹,耿雪丽,等.美国微生物采油技术现场应用效果分析[J].油气地质与采收率,20XX,9(6):75-76.[3]袁长忠,宋永亭,段传慧.微生物采油用营养物质在石英砂上的静态和动态吸附规律[J].油气地质与采收率,20XX,16(4):74-76.[4]修建龙,董汉平,俞理,等.微生物提高采收率数值模拟研究现状[J].油气地质与采收率,20XX,16(4):86-89.[5]路璐,向廷生,黑花丽.本源微生物降解原油的饱和烃色谱分析[J].油气地质与采收率,20XX,15(1):77-79.[6]宋智勇,张君,马继业,等.微生物菌液的界面特性[J].油气地质与采收率,20XX,15(3):73-75.[7]蒋焱,曹功泽,赵凤敏,等.聚合物驱后微生物提高采收率的可行性分析[J].油气地质与采收率,20XX,15(5):63-65,68.[8]陈爱华,方新湘,吕秀荣,等.克拉玛依油田内源微生物驱油机理探索[J].油气地质与采收率,20XX,15(5):75-77.[9]宋绍富,刘菊荣,张忠智.微生物采油替代营养源的研究[J].油气地质与采收率,20XX,14(2):96-98.[10]李希明.微生物驱替盲端类剩余油的微观实验[J].油气地质与采收率,20XX,15(3):91-92.[11]沈萍.微生物学[M].北京:高等教育出版社,20XX:143.[12]唐赟,冯露,刘沐之,等.嗜热解烃菌NG80-2的鉴定及其特[J].南开大学学报,20XX,39(2):46-50,70.[13]SambrookJ,FritschEF,ManiatisT.分子克隆实验指南[M].金冬雁,译.北京:科学出版社,1992.[14]卢圣栋.现代分子生物学实验技术[M].2版.北京:高等教育出版社,1993.4第五篇：基因工程宁波大学科学技术学院考核答题纸（20XX--20XX学年第学期）课号：:EK5G04A00课程名称：现代生物技术概论阅卷教师：班级：10级生物工程学号：104177306姓名：郭兆峰成绩：基因工程摘要：基因工程是20XX70年代在分子遗传学、细胞生物学基础上发展起来的，是一种可以按照人们的意愿设计、改造和组建生物品种的新技术。包括它通过基因操作，将目的基因活DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因以及蛋白质的活性表达，使转基因生物获得新的遗传性状。关键词：生物技术；基因工程一、基因工程的诞生：从20XX40年代开始，受分子生物学、分子遗传学发展的影响，基因分子生物学取得巨大进步，为基因工程的诞生奠定了基础。现在人们公认的诞生日期是1973年，其中现代分子生物学领域上的三大发现及技术上的三大发明起了决定性作用。理论上的三大发现包括：第一，20XX40年代，Avery在美国的一次学术会上报道了肺炎球菌的转化，证明了遗传信息的携带者是DNA而不是蛋白质；第二，1953年，Watson和Crick提出的DNA分子的双螺旋结构以及半保留复制机理，解决了基因的自我复制和传递问题；第三，20XX50年代末的“中心法则”，60年代由Monod和Jacob提出的操纵分子学说，并成功的由一批科学家破译了遗传密码从而阐明了遗传信息的流向和表达问题。以上问题的解决使得人们自主改造生物遗传性状从理论上成为现实。技术上的三大发明：第一，1967年发现的DNA连接酶，以及1979年发现的具有更高活性的T4DNA连接酶。在1970年Smith和Wilcox从流感嗜血杆菌中分离并纯化的限制性核酸内切酶HindⅡ和1972年发现的EcoRⅠ核酸内切酶。后来发现的大量的限制性核酸内切酶。第二，一些病毒、质粒和噬菌体等载体技术的发现使把目的基因的导入更加容易。第三，DNA分子序列分析及琼脂糖凝胶电泳、Southern杂交技术的发展使得基因工程的诞生越来越近。1973年，斯坦福大学将抗四环素质粒和抗新霉素的质粒用限制性内切酶切割并连接成重组质粒导入到大肠杆菌中是基因工程诞生的标志。二、基因工程有几个重要特征：（1）、打破了物种的界限，实现跨物种的基因转移；（2）、通过已知功能基因的遗传转化，进行物种的定向改良；（3）、创造出自然界中本来不存在的物种。三、基因工程技术流程包括：（1）、目的基因克隆，即从特定生物基因组和cDNA中分离提纯和扩大繁殖目的基因；（2）、选择合适的载体，并对载体DNA进行克隆；（3）、将目的基因与载体宁波大学科学技术学院考