2020新冠病毒核酸检测标准操作流程

经典word整理文档，仅参考，转Word此处可删除页眉页脚。本资料属于网络整理，如有侵权，请联系删除，谢谢！2020新冠病毒核酸检测标准操作流程构，在有限的硬件条件下，如何科学、规范、有效地做好生物安全防的生物安全防护和核酸检测方案。核酸检测流程（一）核酸检测前的生物安全防护（工作人员个人三级防护的穿戴）穿戴流程：N95服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双层乳胶手套，进入样本处理工作区域或实验室。戴好个人三级防护。需佩戴医用N95口罩，若无医用N95口罩，可以考虑用普通N95/KN95口罩外加一次性外科口罩的组合方式，但不要佩戴有呼吸阀的N95口罩。佩戴N95口罩时需检查密闭性，通过双手按压、深呼吸、左右转头等动作严格检查口罩是否佩戴正确。时可以考虑加穿一次性反穿隔离衣，穿衣时需由他人协助。展工作，严禁穿戴三级防护后再进入普通实验区域或办公区域。（二）样本的灭活处理是否为严格密闭；对密封袋表面进行消毒后，对送检样本进行下30分钟的灭活，灭活后的样本管需在生物安全柜内打开最内层的容器，将拭子保存液混匀后进行分装和用于核酸提取。【要点提示】涉及高致病性病原微生物的实验室活动，需由两名工作人员完成，其中一人负责主要实验操作，一人提供必要的协助。主操应避免反复多次进出安全柜。外打开和操作。应特别检查采样管是否拧紧、有无样本溢漏等情况。生的意外溢洒事故，有条件时建议在安全柜内配备一次性吸水台布。（三）样本的核酸提取1、手工核酸提取操作流程（以凯杰的52906柱提法核酸提取试剂盒为例）（1）裂解液配制：在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的普通试剂配制实验室中，准备核酸提取所需的洗液1（AW1）、洗液2（AW2）和carrierRNA。按照要求，分别向洗液1和洗液2中加入分子生物学级别的130ml和160ml的无水乙醇并及时做好标记；取310μl洗脱液（AVE）溶解310μg/支的CarrierRNA。配置好后，通过传递窗进入核酸提取区或由工作人员送入核酸提取专用实验室。（2）样本裂解：取560μlAVL裂解液到1.5ml无菌EP管中，加入5.6μl配制好的Carrier140μl样本（例如咽拭子、血浆等），混匀振荡15秒，室温静置10分钟，充分EP管瞬时离心后加入混匀15秒，再次瞬时离心后备用。吸取630μl裂解产物，小心加入至离心柱中，8000rpm（或6000g）离心1分钟，转移离心柱至新收样本体积大于140μl，则在此步骤重复将630μl裂解产物过滤收集在一个离心柱上）。500μl洗液（或6000g）离心1分钟；换新收集管后，取洗液2（AW2）至离心柱中，8000rpm（或6000g）离心1分钟；换新收集管后，用14000rpm（或20000g）离心3分钟，去除洗液2（AW2）；换新收集1分钟，充分甩离残留的洗液2（AW2）。1.5ml无菌EP18000rpm离心1分钟回收核酸，以备PCR检测使用。新鲜裂解液的配制应尽可能在专门的洁净区域或单独的实验室进行。封圈，这可能会导致乙醇残留，抑制后续PCR反应。中的滤过残液污染。加入洗液2（AW2）后的第二次空管全速离心非常关键，能帮助充分甩离离心柱滤膜中残留的洗液2残液，确保洗脱核酸的纯度。膜，充分洗脱核酸，提高核酸提取的产量。手工核酸提取可优选使用检测试剂盒说明书推荐的配套手工提取试剂，也可选用通用手工提取试剂。乳胶手套。2、采用核酸提取仪提取核酸的操作流程根据核酸提取仪和试剂的说明书准备好提取试剂，取样本上机提取核酸，并按照要求回收提取好的核酸备用。【要点提示】照提取试剂盒的说明书进行核酸提取操作。要做好生物安全防护及样本的防污染保护。在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的专用实验室，配制PCR体系。根据试剂盒说明书的要求，将试剂盒的不同组分（一般包括反应液、酶、引物等）按照各自必须的体积量进行配制混合，充分混匀制实验室送至核酸提取和加样专用实验室。在加样专用生物安全柜PCR一个阳性对照和3个阴性对照。全柜内进行，以确保试剂不会有被污染的可能。要包括3个阴性对照和1配过程中的正常损耗等消耗。加样可以和样本处理/核酸提取在同一分区或同一间实验室进行，但如有条件最好在单独的加样区或至少使用专用安全柜进行加样。交叉污染。应配置体系加样登记表，确保加样过程准确无误。PCR密闭管盖应特别谨慎，建议更换新的手套，防止手套等接触管盖内部带入污染的风险。在扩增区或专用扩增实验室，由专人取出配制好的PCR检测管，析判读结果。进行结果分析时，应认真阅读试剂盒说明书，在了解该次阴性质控的结果，综合判读样本的检测结果。检测结束后，为防止可能的扩增污染，扩增结束后的PCR管严禁开盖或带离扩增实验室，桶中做进一步处理。分割。不同操作区域的工作服不要混穿，特别是基因扩增区的工作服，建议仅在扩增区域或扩增实验室内使用。熟悉检测用PCR果。（1）生物安全柜内：在完成样本核酸提取后，应在安全柜内用75%消毒酒精对外层手套进行消毒处理，并将外层手套取下后弃至安全柜内的垃圾桶中。小心收纳并丢弃使用过的一次性吸水台布，用0.5%~1%的有效氯消毒剂或75%酒精擦拭安全柜台面、移液器等安全经3生物安全柜，时间应大于30分钟。（2）样本核酸提取工作人员实验室内：他人协助用有效氯消毒剂或将外层反穿隔离衣脱下至新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高压处理。0.5%~1%的有效氯消毒剂或消毒实验室台面和地面；开紫外灯进行大于30分钟的空间消毒。（4）工作人员摘脱三级防护：在缓冲区戴新的外层手套，摘护目镜置于75%酒精浸泡消毒，从头开始，自上而下、由内而外缓慢翻于新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高压处理。摘口罩、帽子、内层鞋套和内层手套后同样置于新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高压处理。（5）新型冠状病毒相关医疗垃圾：所有新型冠状病毒相关医疗菌处理，高压参数为分钟。高压要做物理、生物指示，以确保高压灭菌的效果。脱在安全柜内。须防水，以确保在实验室内发生意外遗洒时可隔离污染。变远而减弱，故在紫外线消毒前，仍需对各种仪器表面、台面、地面用消毒剂进行擦拭消毒。