白血病淋巴瘤免疫分型

白血病淋巴瘤免疫分型1当前第1页\共有33页\编于星期五\20点2流式细胞术的基本概念流式细胞术（FlowCytometry,简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量当前第2页\共有33页\编于星期五\20点3散射光信号和荧光信号前向角散射光（FSC,ForwardScatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积侧向角散射光（SSC,SideScatter） 入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强。当前第3页\共有33页\编于星期五\20点4CD45/SS示意图当前第4页\共有33页\编于星期五\20点5抗原分布

表面,胞浆,核内是共同检测还是分别检测?表面胞浆核内CD3,CD4,CD8,tetramercytokinesDNACD3,4,8,tetramer+CytokinesCD3,4,8,tetramer+DNACytokines+DNACD3,4,8,tetramer+Cytokines+DNA当前第5页\共有33页\编于星期五\20点6设门08-03307当前第6页\共有33页\编于星期五\20点7设门全部细胞门内细胞08-03307当前第7页\共有33页\编于星期五\20点8当前第8页\共有33页\编于星期五\20点9血液肿瘤分类进程当前第9页\共有33页\编于星期五\20点10白血病免疫分型的理论基础

白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴瘤细胞的存在。当前第10页\共有33页\编于星期五\20点11细胞类型鉴定Borowitzetal(1993)AJCP100:534-40.Steltzeretal(1993)AnnNYAcadSci667:265-280当前第11页\共有33页\编于星期五\20点12CD45/SS示意图正常骨髓细胞血液肿瘤细胞老化粒细胞、噬酸细胞早幼—成熟粒细胞M3、CML单核细胞M4、M5LGL淋巴细胞CLL、ALL、CLD正常前体细胞M0、M1、M2、嗜碱性粒细胞M4、M5、ALL成熟红细胞、血小板M6、M7、MM细胞碎片Pre-B-ALL

非血液来源细胞当前第12页\共有33页\编于星期五\20点13B淋巴细胞分化与抗原表达关系图WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine当前第13页\共有33页\编于星期五\20点14T淋巴细胞分化与抗原表达关系图WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine当前第14页\共有33页\编于星期五\20点15粒细胞分化与抗原表达关系图WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine当前第15页\共有33页\编于星期五\20点16单核细胞分化与抗原表达关系图WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine当前第16页\共有33页\编于星期五\20点17非肿瘤T淋巴细胞表型当前第17页\共有33页\编于星期五\20点18非肿瘤B淋巴细胞表型当前第18页\共有33页\编于星期五\20点19非肿瘤粒细胞、单核细胞表型当前第19页\共有33页\编于星期五\20点20非肿瘤粒细胞、单核细胞表型当前第20页\共有33页\编于星期五\20点21白血病免疫分型根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如：早前B，前B，普通B…当前第21页\共有33页\编于星期五\20点22初治急白分型AcuteLeukemia–BlastsPresent>20%MyeloidLineageCD13+and/orCD117+and/orCD33+CD7+and/orCD2+CD19+T-LineageB-LineageMyeloid,noorminimalmaturationCD34+/-CD117+/-HLADR+CD56+CD15-/+CD11b-,CD14-PromyeloidCD15+/-CD117+/-CD34-HLADR-CD11b-,CD14-CD14+CD4+/-HLADR+CD15+CD11b+Myelomonocytic&Monocytic红系和巨核系的鉴定需要另外增加二线抗体。如:CD71、GPA、CD41、CD61当前第22页\共有33页\编于星期五\20点23AML-M3当前第23页\共有33页\编于星期五\20点24AML-M4当前第24页\共有33页\编于星期五\20点25AML-M4当前第25页\共有33页\编于星期五\20点26初治急淋分型AcuteLeukemia–BlastsPresent>20%CD7+and/orCD2+CD19+T-LineageB-LineageCommonThymocyteMatureThymocyteCD2+CD5+DualCD4+/CD8+sCD3-CD2+CD5+CD4+orCD8+sCD3+CD2-/+CD5-/+sCD3-CD4-CD8-TdT+CD10-clg-sig-Pre-BCD10+cig+TdT+sig-Bsig+CD10+/-clg+/-TdT-CommonTdT+CD10+clg-sig-EarlyThymocyteEarlyB-Precursor当前第26页\共有33页\编于星期五\20点27B-ALL当前第27页\共有33页\编于星期五\20点28Pre-BALL当前第28页\共有33页\编于星期五\20点29

白血病免疫分型的价值确定ALL的细胞类型（B细胞或T细胞）和ALL的分化阶段。鉴定AML的特征。对形态学上未分化的急性白血病有助于鉴定细胞类型。诊断一些少见类型的白血病。如：M6、M7、M0等。当前第29页\共有33页\编于星期五\20点30多发性骨髓瘤（MM）

多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生性疾病。正常浆细胞为CD38+/CD45dim/-，使用CD38/CD45双标记检测外周血和骨髓标本，可以准确划定浆细胞群。通常使用CD38和CD45，结合轻链检查，对多发性骨髓瘤细胞进行分析。另外，正常浆细胞的表面标记为CD19+/CD56-，而多发性骨髓瘤细胞通常为CD19-/CD56+。CD138目前认为是浆细胞最特异的指标。这样，使用流式细胞仪对外周血或骨髓标本进行多参数分析，并计算异常浆细胞含量，对于多发性骨髓瘤的诊断和治疗评估具有重要意义。

当前第30页\共有33页\编于星期五\20点31MM当前第31页\共有33页\编于星期五\20点32流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势1、纤维化、硬化的骨髓可能没有足够的细胞分析。2、细胞太多聚集或成团也可能没有足够的分析细胞。3、硬化的组织也很难得到足够的分析细胞。4、组织结构关系、形态关系丢失。5、比例太低的单克隆B细胞很难检测到。当前第32页\共有33页\编于星期五\20点33流式免疫表型诊断