中药分析概论

姚美村中山大学药学院第十一章中药分析概论

BriefIntroductionofTCMAnalysis学习要求掌握部分：1、掌握中药分析的特点2、样品前处理和纯化方法3、中药鉴别试验和主要的含量测定方法4、中药指纹图谱及其研究方法熟悉部分：1、中药主要检查项目和浸出物2、中药中有害物质的测定方法了解部分：1、中药体内动态及代谢组学研究方法YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@目录中药分析的特点12鉴别实验3检查4含量测定5中药安全性相关的质量控制项目6中药指纹图谱和特征图谱7中药分析的样品处理方法中药体内分析8什么是中药？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中药ChineseMedicine（中医药）TraditionalChineseMedicine（TCM，传统中医药）ChineseMateriaMedica（CMM，中药）以中医药学理论体系的术语表述其性能、功效和使用规律，并且按中医药学理论指导其临床应用的药物。中医使用的药物称之为中药？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中医药理论中药药性：性（四气）、味（五味）、归经（脏腑经络）等。冰片：辛、苦,微寒。归心、脾、肺经。单味药有性味归经，复方呢？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中医药理论配伍理论：君臣佐使？（复方配伍原则）复方丹参：丹参、三七、冰片大处方（>5味）如何区分和控制质量？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中医药理论整体观（holistictheory）：系统观？小檗碱代表黄连？黄酮类代表黄芩？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中医药理论辨证论治：YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@PrecisionMedicine？中医药现代化？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中医药现代化的优势和不足优势：

临床有效

毒副作用小

费用低？不足：

质量不稳定

成分不清

作用机理不明

YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@质量标准！中国药典2015年版I部药材和饮片植物油脂和提取物成方制剂和单味制剂

中药质量标准第一节中药分析的特点一、以中医药理论为指导，评价中药质量的整体性1、中药药性2、君臣佐使3、整体观4、。。。。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@二、中药成分具复杂性，药效成分非单一性YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第一节中药分析的特点三、中药材质量具有多变性

五倍子鞣质（＞80%）槐米芦丁（＞20%）长春花长春新碱（百万分之一）YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第一节中药分析的特点四、中药炮制、制剂工艺及辅料具有多样性，杂质来源途径多第一节中药分析的特点

例：三黄泻心汤干浸膏（大黄/黄连/黄芩）

常压减压逆浸透成分浓缩浓缩喷雾小檗碱34.537.594.5%黄连碱6.312.093.7%黄芩苷77.477.698.5%第二节中药分析的样品处理方法YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@含量测定检查鉴别取样中药分析的一般程序前处理一、中药分析的前处理方法根据作用机制，可分为：液固提取法，Liquid-SolidExtraction，LSE液液提取法，Liquid-LiquidExtraction，LLE水蒸气蒸馏法，SteamDistillation，SD超临界流体提取法，SupercriticalFluidExtraction,SFEYaoMeicun,TelEmail:Lssymc@1、液固提取法（LSE）YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@用于皂苷类正丁醇氯仿乙醚、石油醚醋酸乙酯也称萃取法－－利用溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同用于生物碱类用于黄酮类用于挥发油2、液液提取法（LLE）3、水蒸气蒸馏（SD）用于提取挥发油，小分子生物碱等4、超临界流体提取法（SFE）超临界流体是指在临界温度和临界压力以上的流体，介于气体与液体之间的一种物相。物质状态密度(g/cm3)粘度(g/cm/s)扩散系数(cm2/s)气态(0.6-2)x10-3(1-3)x10-40.1-0.4液态0.6-1.6(0.2-3)x10-2(0.2-2)x10-5SCF0.2-0.9(1-9)x10-4(2-7)x10-4超临界CO2：Pc=7.37MPa；Tc=31.3℃

超临界流体萃取法CO2萃取过程无味、无臭、无毒，安全性好；CO2价格便宜，纯度高，可循环使用；样品易浓集；Purify，目的：去除干扰，富集组分YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@二、中药分析样品的纯化方法过滤法柱色谱法薄层色谱法YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第三节

鉴别试验（IdentificationTest）假药泛滥，质量难以保证，严重危害群众健康！鉴别是保障药品质量的第一步！YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@鉴别：判定真伪检查：安全性、有效性、均一性含量测定：有效成分的定量药品检验工作的主要内容复习：维生素C的鉴别YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@一般鉴别专属鉴别化学药物的鉴别化学药物的鉴别步骤：（1）性状（2）一般鉴别试验（理化鉴别为主）（3）专属鉴别试验（光谱鉴别为主）YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@例：中药黄芪的鉴别YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@显微鉴别YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@黄芪处理供试品黄芪甲苷对照药材处理对照药材薄层色谱法比较位置Rf颜色大小斑点中药的鉴别（1）性状（2）显微鉴别（3）（薄层）色谱鉴别（4）理化鉴别YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@例：乙肝宁颗粒的鉴别YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@黄芪YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@乙肝宁颗粒处理处理方法1处理方法2处理方法3处理方法4黄芪甲苷原儿茶醛芍药苷何首乌大黄素薄层色谱法比较位置Rf颜色大小斑点YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中药复方不同于单味药的鉴别内容：（1）中药复方，原则上每味药都要鉴别。最少要选择制剂处方中的1/3的药味进行鉴别。（2）按君臣佐使选择药味进行鉴别（黄芪、丹参）。（3）

对贵重药、毒性药进行鉴别（何首乌）。（4）凡有原粉入药者，应做显微鉴别。没有显微鉴别的，尽可能做理化鉴别。思考题：中药单味药的流浸膏或提取物是否可以采用显微鉴别的方法？中药及其制剂鉴别方法

形状、大小色泽、表面特征质地、折断面特征气味……性状鉴别YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@

对组织、细胞或内含物进行鉴别

显微特征应明显、易查见多来源药材应选择其共有的特征显微鉴别

多为化学法观察颜色反应或沉淀反应，易受植物中其他成分干扰矿物药及特殊鉴别反应中仍在采用理化鉴别YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@

制备供试液色谱条件选择：获得清晰、圆整、比移值稳定和可重复的色谱图

对照物选择显色与检视鉴别和限度检查色谱鉴别薄层色谱法

采用公认的、相对较短DNA序列进行物种鉴定。适用于难以用性状、显微和理化鉴定的中药及其原物种鉴定。DNA条形码DNA序列YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第四节

检查（PurificationTest）具有中药特色的检查项目水分总灰分酸不溶性灰分农药残留量杂质重金属及有害元素中药制剂特有的剂型及检查项目其他杂质检查项目水分膨胀度酸败度溶出度含量均匀度浸出物测定。。。。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第五章含量测定（Determination）中药含量测定的原则：（1）凡已知有效成分、毒性成分或能反映内在质量的指标成分的药材，应进行含量测定。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@（2）对中药制剂中君药、毒性药、贵重药应进行含量测定。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第五章含量测定（3）制剂含量测定尽可能选择与选用药材相同的分析方法，要对处方中药材做全面考察。如：黄芪——>黄芪甲苷——TLC

乙肝宁颗粒——>黄芪——>黄芪甲苷—TLC

但采用的方法可能不一样！？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第五章含量测定（4）测定干扰大且确证干扰无法排除而难以测定的，可测定与其化学结构母核类似、相对分子量接近的种类成分的含量或测定浸出物。（5）含量限度低于万分之一的，应增加一个含量测定指标或浸出物测定。（6）化学方法测定有困难时，也可建立生物测定方法。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第五章含量测定HPLCGCTLCS其他方法方法

主要用于测定挥发油及其他挥发性组分含量内标法、外标法、归一化法等分光光度法化学分析法高效毛细管电泳法电化学方法含量测定的主要方法

多采用RP-HPLC

酸碱性化合物的流动相系统

梯度洗脱&波长梯度

薄层吸收扫描法&薄层荧光扫描法反射法&透射法直线式扫描&锯齿状扫描主要采用外标法定量校正因子法同时测定多指标成分的含量待测成分标准品可得多指标成分待测成分标准品难得同建立单一成分测定的步骤类似，常采用梯度洗脱的方法以使个待测成分达到满意的分离效果。

一测多评原理是在一定的线性范围内，母核结构类似成分的量与检测器相应成正比计算出各成分吸收系数间稳定的相关数值，仅测定1个对照品，计算其他成分含量中国药典采用此法对黄连中的表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱进行含量测定第六节中药安全性相关的质量控制项目YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@重金属与砷盐检查农药残留量分析黄曲霉素测定中药注射剂中药掺伪掺假和非法添加的检查毒性成分的控制重金属与砷盐检查

YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@重金属与砷盐检查ChP附录收载有四种重金属检查法，参见总论第5章砷盐检查法：古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法双硫腙比色法：选择性地测定制剂中的铅原子吸收分光光度法：铅使用铅空心阴极灯测定；砷用砷空心阴极灯HPLC-ICP-MS

高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（HPLC-ICP-MS）：测定中药中不同价态重金属离子的含量YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@农药残留量分析YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@残留农药种类有机氯类：六六六、DDT、五氯硝基苯、艾氏剂有机磷类：磷酸酯类（敌敌畏、敌百虫）、硫代磷酸酯类（对硫磷）、磷酰胺及硫代磷酰胺（甲胺磷）拟除虫菊酯类：氯氰菊酯、溴氰菊酯氨基甲酸酯类：西维因、呋喃丹ChP2010一部附录IXQ

农药残留量测定法有机氯类农药残留量测定色谱条件与系统适用性试验：

SE-54（30m0.32mm0.25um）或DB-1701，63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度：230℃；检测器温度：300℃；不分流进样；程序升温：初始100℃，每分钟10℃升至220℃，每分钟8℃升至250℃，保持10分钟理论塔板数按α-BHC峰计算，不低于106，分离度应大于1.5。黄曲霉素毒性强，可诱发肝癌，以黄曲霉素B1毒性最强。测定方法：HPLC-荧光法，酶联免疫吸附法和LC-MS/MS法。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中药注射剂的检查YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中药掺伪造假和非法添加的检查YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@mail.sysu.ed