妇产科学专业优秀论文-人间充质干细胞携带dcc基因治疗卵巢癌的实验研究

【精品】毕业论文优秀毕业论文本科论文专业学术论文参考文献资料妇产科学专业优秀论文人间充质干细胞携带DCC基因治疗卵巢癌的实验研究关键词：卵巢肿瘤基因疗法充质干细胞摘要：目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。

正文内容目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。《《《特别提醒》》》：正文内容由PDF文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为/file/75571905。如还不能显示，可以联系我qq1627550258，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。"垐垯櫃换烫梯葺铑?endstreamendobj2x滌甸??*U躆⒌跦??ǜ?l,

墀VGi?o嫅#^4K錶c&伣嘰呐q 虻U節鉡c姥? ?BL偤7.X哖?]驳疗"g讍`l/<5蔍`7sQ\Ivs疖

?S[J%J

vI雓1傀7鑥伍妰遠Y魥靤/W鐼E霯q聊湝

ECu?knb?.:?澍羈

7┮坋:;俐hEan[2

P6?!八帊/=櫕貵`Wp?U脞姦%?qj?颬儼噃IV壂G邊??Vг忣鏕裚?靈模??慞

擭昄X?;萕屄P,'

枍U霩R嚵蝆RC`珵墂锬襵")焟滫?ob#噡滴覇羘幥d<?讫\E鼠

U閥?甅Y_HT軷糣Q\渿拜&应U躨?淊Nv祌|揜JJ9B9?_+.^\\|莭?桌O姺

?踱:R?截d襛jL`k崌?[謹

6m図?b2頔??YU???拰泅?E

稛擈?cHB㈨?pR枣渹唱?上鴰\A

Uq
陶誼?a_€坩j?劷'
a

?eb軌嬲
6?65苡?喱U椁致a?頟狃鑃鋻?牥I?鄞??摉敊?(毆s?6仿?K@}2l肂F蚻{盜?J琬{C瓃!炻!鸌8?]?壽8??S鰬FQ=*?闲d(N该辭O

?!蕍池?E柪8頬4syXr移Js??脋翟?PB[针旌汉R紡斮銒0eh尸?XTHz{K輫獞谪k伬.K!e鼚V?
?;驭s磇嗔5巐奌1 ;a/w,価*w=U#深@

啦厣#霵??懑刉覶瑼?l灏8Na?谺[|mL駰麲?橆C啟拡铵

邢@哎"橶軹<??峾?

I^铈N?T蠿h?暵^l2錛豵岂鋁釯訑9|@U忡H奙`{鑧n!挈嬶颊tKラ犨绸萑m

E遰D5€`KU/燏闪g菬3≦?6iL绌?'?8L]愒?黴萧懨间蚷";0苸@|Z@~?牫氀k鱟m智{tC\呿腩%陏砂?

婁琊

蚩?p炊匌QE秝)Ｑ?3祲翓?l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l┳a

空/?鈈1贿$F<0佚&煿网澟?釤h

裝y

:M?^瘃d€€襅絧?曄d鈅7橵

ZngQY穴甯?c

繋圁?麾璃c旿^T珤z'4

v?/

鰍w玣●9樂]濖?峐晻?娴╞翖H鎉詤闽s癜/?

Z[┝

骫/吐莁鳝恪叓?c緂羗燤蘦<?a:?编o6h挛W腃m
d寙妗M檂戴J`炀??砡Z?d

?獊嚘槏F劃?徎耡?a汚?螻8?ザ^

冚窉`&竕?/t€R

氍猜r'鴅兂su勢J`嫓-

?貀

鯼吔?啪"?l匢k耭聨蕞?霡耋艔続

6挬aF溭ku 罡?{0埪^怍m莫グ袍`逷 6&?+T?貇KPN:椴歋9wp?@?$%?

粿?感,腑?U_?w?豒濈

?J€_.cy鰻PY<腹g卨b5啨喻$?€??梉?娐厝糈Nò娻#g?z%0

v_JU倧3x8碂F?憛權J?B憹丽腃

苐创

a{唨喂辙??E,f|灯掌亣3姬鄾壿摟妝?3?萌l>Peブt?Pf臕?m稅盠?恁

v_關lm,OMK?^'vOp牯V睟艶頛4.?鮠4l

O??鼎?#濔%滷?腵鳐#C?另v|j'珬i|葙K羇胞Tt?"1鱳忞1??#1??#谺?豣?豅?[Fb癳$[Fb癳$[Fb懊U虶:}獊{u餕n梕炯鈝羡n馴弁?裦$k~琽腌羨鯞x8dz阞睩飫

諥?R蛨)傣Nc鐓婤嬬踋D铅,j豃杮?03o膰澴饿垱,3cLY

尧3?搮4kKh費QC幎鲟f?

洭孺V饞?\tY囝_?鮶}量躞W
蔋/<??枞:蚢]w龃欦恈宖xF?G??<雅M餕K聭?W境O∽?赧M

E6?诖佟U9y伞?t3吁或i扡椌Ti/]'u?h4涱谌]f盭纐?匌%]囗

w祝綧7啚W嬓駳谣酗8簮镄炯a*鞠?l?娮Lp-6?鏷4?uve2欐鈗锯bmIi滝多"?[4橳婱fbC貇?吷d#=驰D梟3E凂

NIupG诘V陭s?i4l@暺ォ窴誵w鰕?彽餥?靭.{n宒D喇1K??)?J癊{Y睬Aw??s?銲€洃摀Ｂ?ゆ娒糍j鋷￠稣9苣s骹囈x丏麈(j?錞斊恘迃觸達沭?l瑶f?>熁疆??6??a瘄伮幨?.寒癧Ｋ拲梡ф?貃'毽?狎裦&癿??紣兩D??孧璞?*讅A~?G哊$(L?翞漷獔苐眄\^?

A+y鯱\

h'Q伛R濵崇@~練谰澠蕱劜(頓r)g?雴s

?l7g缣t1@苬?

h蚫芦窼????媢J?|`兊欨^y镩飃袩?lN1囁9廥ZＪ薩j屻猆??5郜?呁%8赻誵?揃^6査9??狥U?噶8??l抔'瓫湾?摽郒i鯦

捶摭?sr&螨?鶶呁菸?%`毎磆*?R閁b太?.?

6柧靘発

蕯?俔;

#x刔彟2Z皙{８笜'?D剧>珞H鏋Kx時k,褝仆?稀?i攸'闥)荮vJ釔絓|?殢D蘰厣?籶(柶胊?07姻R♀l遜ee醳B?苒?甊袝t弟l?%G趓毘N蒖與叚繜羇坯嵎憛?

>U?Xd*蛥?.臟兄+鮶m4€嵸/@E厤U閄r０塎偨匰忓tQL綹e[b??抔搉ok怊J?l?

庮蔘?唍@*舶裤爞K誵┅X

r

蛈

翏磾寚缳nE駔殞梕壦e櫫蹴友搇]6碪近躍邀8顪??z'╨Fi?U钮嬧撯暼坻7/??W?3RQ碚螅T憚磴炬B-垥n國0fw丮"eI?a揦(?^7鳁?H?弋睟

栴?霽N濎嬄!盯鼴蝔4

sxr?溣?檝皞咃hi#?攊(?v擗谂馿鏤刊x┶偨棆鯍抰}Lyy^|y箲丽膈淢m7汍衂法瀶?鴫C??﹊Q貖澔?wC(?9m.Ek?腅僼}碓靔奲?D|疑維d[袣箈Q|榉Ｅ慓採紤婏(鞄-h蜪`7I冑?'匨+蘮.

懸6鶚?蚧?铒

鷈?叛牪?蹾r
R????*[t?檸??

籕基于C8051F单片机直流电动机反馈控制系统的设计与研究基于单片机的嵌入式Web服务器的研究MOTOROLA单片机MC68HC（8）05PV8/A内嵌EEPROM的工艺和制程方法及对良率的影响研究基于模糊控制的电阻钎焊单片机温度控制系统的研制基于MCS-51系列单片机的通用控制模块的研究基于单片机实现的供暖系统最佳启停自校正（STR）调节器单片机控制的二级倒立摆系统的研究基于增强型51系列单片机的TCP/IP协议栈的实现基于单片机的蓄电池自动监测系统基于32位嵌入式单片机系统的图像采集与处理技术的研究基于单片机的作物营养诊断专家系统的研究基于单片机的交流伺服电机运动控制系统研究与开发基于单片机的泵管内壁硬度测试仪的研制基于单片机的自动找平控制系统研究基于C8051F040单片机的嵌入式系统开发基于单片机的液压动力系统状态监测仪开发模糊Smith智能控制方法的研究及其单片机实现一种基于单片机的轴快流CO〈,2〉激光器的手持控制面板的研制基于双单片机冲床数控系统的研究基于CYGNAL单片机的在线间歇式浊度仪的研制基于单片机的喷油泵试验台控制器的研制基于单片机的软起动器的研究和设计基于单片机控制的高速快走丝电火花线切割机床短循环走丝方式研究基于单片机的机电产品控制系统开发基于PIC单片机的智能手机充电器基于单片机的实时内核设计及其应用研究基于单片机的远程抄表系统的设计与研究基于单片机的烟气二氧化硫浓度检测仪的研制基于微型光谱仪的单片机系统单片机系统软件构件开发的技术研究基于单片机的液体点滴速度自动检测仪的研制基于单片机系统的多功能温度测量仪的研制基于PIC单片机的电能采集终端的设计和应用基于单片机的光纤光栅解调仪的研制气压式线性摩擦焊机单片机控制系统的研制基于单片机的数字磁通门传感器基于单片机的旋转变压器-数字转换器的研究基于单片机的光纤Bragg光栅解调系统的研究单片机控制的便携式多功能乳腺治疗仪的研制基于C8051F020单片机的多生理信号检测仪基于单片机的电机运动控制系统设计Pico专用单片机核的可测性设计研究基于MCS-51单片机的热量计基于双单片机的智能遥测微型气象站MCS-51单片机构建机器人的实践研究基于单片机的轮轨力检测基于单片机的GPS定位仪的研究与实现基于单片机的电液伺服控制系统用于单片机系统的MMC卡文件系统研制基于单片机的时控和计数系统性能优化的研究基于单片机和CPLD的粗光栅位移测量系统研究单片机控制的后备式方波UPS提升高职学生单片机应用能力的探究基于单片机控制的自动低频减载装置研究基于单片机控制的水下焊接电源的研究基于单片机的多通道数据采集系统基于uPSD3234单片机的氚表面污染测量仪的研制基于单片机的红外测油仪的研究96系列单片机仿真器研究与设计基于单片机的单晶金刚石刀具刃磨设备的数控改造基于单片机的温度智能控制系统的设计与实现基于MSP430单片机的电梯门机控制器的研制基于单片机的气体测漏仪的研究基于三菱M16C/6N系列单片机的CAN/USB协议转换器基于单片机和DSP的变压器油色谱在线监测技术研究基于单片机的膛壁温度报警系统设计基于AVR单片机的低压无功补偿控制器的设计基于单片机船舶电力推进电机监测系统基于单片机网络的振动信号的采集系统基于单片机的大容量数据存储技术的应用研究基于单片机的叠图机研究与教学方法实践基于单片机嵌入式Web服务器技术的研究及实现基于AT89S52单片机的通用数据采集系统基于单片机的多道脉冲幅度分析仪研究机器人旋转电弧传感角焊缝跟踪单片机控制系统基于单片机的控制系统在PLC虚拟教学实验中的应用研究基于单片机系统的网络通信研究与应用基于PIC16F877单片机的莫尔斯码自动译码系统设计与研究基于单片机的模糊控制器在工业电阻炉上的应用研究基于双单片机冲床数控系统的研究与开发基于Cygnal单片机的μC/OS-Ⅱ的研究基于单片机的一体化智能差示扫描量热仪系统研究\