微生物限度检查法

微生物限度检查法100隔离系统按相关的要求进展验证，其内部环境的干净度须符合无菌检查的要求。：细菌培育温度为30～35℃；35～37℃检验量：10g量包装的药品可酌减〔不得少于3g10g或10ml。一般随机抽样不少于检验用量〔23供试液的制备：1h验用培育基具抑菌活性的供试品有：稀释法——降低供试品的相对浓度薄膜法——利用体积差异别离中和法——利用化学〔生物〕专属性灭活离心法——利用沉降系数差异别离一、微生物限度检查法验证对药品进展微生物限度检查法时，首先应进展检测方法的验证。如细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认该计数方法是否科学、准确、客观。假设供试品的组分或原检验条霉菌和酵母菌计数所规定的方法及以下要求进展。对各试验菌的回收率应逐一进展验证。验证用菌株及菌液的制备菌株〔B44102、金黄色葡萄球菌〔B26003CMCC〔B〕63501CMCC(F)98001CMCC(F)98003。菌液制备0.9%1ml50~100cfu验证方法试验组1ml50~100cfu2个平板，按平板菌落计数方法测定其菌数。承受薄膜过滤法计数时，最终一次冲洗液中参与50-100cfu，过滤，培育，计数。菌液组 测定参与的试验菌液的菌数。供试品比照组取规定量的供试液，按平板法测定供试品稀释液本底的菌数。稀释剂比照组取稀释液，参与试验菌，使菌浓度为每1ml50~100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。验证试验应独立平行进展3次，分别计算各次试验菌的回收率。试验组的菌回收率=[〔试验组平均菌落数供试品比照组平均菌落数〕/菌液组平均菌落]×100%稀释剂比照组的菌回收率=[〔稀释剂比照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数〕]×100%在三次平行试验中，稀释剂比照组的菌回收率应大于70%。假设试验组的菌回收率均大于70%，符合验证试验，可按此方法测定细菌、霉菌和酵母菌数；假设任一次平行试验中试验组的菌回收率均小于70%，不符号验证试验，应承受培育基稀释法、离心集菌法、过滤法、中和法等方法或这些方法联合使用消退供试品抑菌活性，并重验证。验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进展。二、检查法1ml2个平板，均不得长菌。分别点计霉菌、酵母菌、细菌菌落数，以菌落数高的培育基中的菌数为计数结果报告。菌数报告规章：30~30030~100之间的稀释级，作为菌数报告。1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。2个稀释级的菌落数符合上述规定时，视两者比值〔比值为高稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值除以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值〕而定。假设比值不大于2，以两稀释级的菌落数乘以稀释倍数的均值报告菌数；假设比值大于2但5或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等特别状况时，应查明缘由再行检查，必要时，应进展方法的重验证。报告菌数。各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。三、把握菌检查把握菌检查法的验证试验菌株：按规定检查的把握菌选择相应验证的菌株。阴性比照菌株:选择原则，口服—局部用把握菌。菌种的要求：不得超过5代〔从菌种保藏中心获得的冷冻枯燥的菌种为第0加菌量:50～100cfu。把握菌检查法验证的方法验证试验按供试液的制备和把握菌检查法的规定及以下要求进展。验证试验可与供试品的把握菌检查同时进展。在最终一次冲洗液中，过滤后，注入培育基或取出滤膜接入增菌培育基中。阴性菌比照组：设立阴性菌比照组是为了验证该把握菌检查方法的特异性，方法同试验组检出。把握菌检查法的验证-结果推断阴性菌比照组不得检出阴性比照菌。检查。或联合使用这些方法消退供试品的抑菌活性，并重验证。四、检查法：阳性比照试验：阳性比照试验的加菌量为50～100cfu，方法同供试品的把握菌检查。阳性比照试验检出相应的把握菌。阴性比照试验：阴性比照试验应无菌生长，如大肠埃希菌检查.取供试液10ml 接种至处理后的适量胆盐乳糖培育基中 培育18～24℃ 取.培育物0.2ml接种至含5mlMUG培育基的试管内于24h紫外线下观看，同时用MUGMUGMUG性。本底比照顾为MUG阴性和靛基质阴性。留意事项：50%。所以，在操作过程中，应特别留意能造成误差的各个环节。供试液制备：●1小时。45℃。供试液的体积：100ml。细菌、霉菌及酵母菌计数计数方法：平皿法、薄膜过滤法供试液取样：混悬液、上清液。培育时间必要时，可适当延长培育时间至5～7天151倍或以上。菌数报告规章：如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。释液中，一般将菌苔与微量稀释液先在管壁上混匀。对于那些不易制成均匀菌悬液的菌苔时应防止取出菌膜，一般应取培育管中部的均匀菌悬液。10倍系列稀释时，要求稀释每个浓度的菌液均应换灭菌吸管。操作时，将灭菌吸管插入原液中，将菌液充分混匀，吸取菌液，贴于试管内壁