FluorChemQ凝胶成像分析系统在科研实验及教学中的应用教育文档

FluorChemQ 凝胶成像分析系统在科研试验及教学中的应用ApplicationofFluorChemQgelsimageacquisitionandanalysissysteminscientificresearchandteachingPanHongchao,TangDanyangShantouuniversity,Shantou,515041,China:Gelimaginganalysissysteminbiologicalandmedicalresearchhasbecomemoreandmoreimportant.ThispaperprimarilyelaboratedtheapplicationoftheadvancedFluorChemQgelimagingsystems,whichhadbeenappliedtopracticeinteaching.ThisintroductionmadescientificresearchworkersfurtherunderstandingthrFluorChemQgelimagingsystems,andmadestudentspreliminarilyunderstandit”sapplication.Thestudents ”practiceskillswereimproved,andalsoachievetheorycombinedwithpracticeinteaching.凝胶成像分析系统及图像分析软件主要应用于生物、医学及医药争论领域，可用于拍摄核酸及蛋白电泳、菌落技术，还可用于荧光图像的采集，定量及半定量分析[1-3]，为科研人员供给了快捷便利的分析凝胶图像及相关生物学试验的工具。FluorChemQ是顶级的多色荧光、化学发光、可见光成像和定量分析系统，是目前同类产品中唯一兼顾多种应用的成像系统 〔如图1所示〕。在一次分析中可同时检测5种蛋白,并对其进展定量CCD技术提高了成像的速度和定量分析的力气。将凝胶成像分析系统运用到本科及争论生试验教学中，可使学生了解相关领域较先进的争论方法和技术，有助于提高学生的实践能力及科学思维，培育复合型人才[4]。为此，以AlphaInnotechFluorChemQ凝胶成像系统以及数据处理软件，初步阐述其在图像猎取、存储、密度扫描及定量等方面的应用。1试验图像的采集和存储翻开电脑进入Windows界面后，开启暗箱电源及相机电源。双击桌面上的Alpha软件图标，在工具栏选择Acquire，进入图像捕获界面。仪器所配CCD镜头自动制冷至-20C条件后才能较好地工作，所以需要提前半小时左右翻开仪器预冷。然后在CameralSetPreview〔相机设计预览〕Focus〔聚焦〕按钮。翻开暗箱门，将样本依据其所需要的光源位置摆好。以核酸电泳及蛋白电泳采像为例，对于一般核酸凝胶采像，要移走可抽挡板〔如图1所示〕，把凝胶置于投射紫外灯箱上〔1标有DNA/RNA。〕对于蛋白化学发光样品采像，插入可抽挡板 〔如图1所示〕，把已孵有发光液的膜置于可抽挡板上〔图1中标有Protein〕。在不同操作时，要留意对焦。对焦步骤如下：翻开镜头光圈，留意镜头光圈上数字越小光圈越大。在暗箱门翻开的情况下，利用外界自然光线及显示器上实时显示的图像来调整样品位置，将其置于ZOOM使样品尽可能占据整个图像。关闭暗箱门，选择一个适宜的滤光片，1号位：无滤光片；2号位：EB滤光片；3〜5号位：荧光通道。对于核酸电泳图像采集，我们选用2号位；对于蛋白电泳图像采集，我们选用1号位。凝胶采像2A2B所示，荧光图像采集依据要求用2C所示。

3〜5号位1FluorChemQ凝胶成像分析系统示意图及自带分析功能图2 图像采集结果〔A-核酸凝胶成像图；B-蛋白化学发光图；C—蛋白荧光发光图〕翻开相应的光源，选择绿色的ExposePreview〔曝光预览〕Acqurelmage〔猎取图像〕按钮，曝光进度条在完成自动曝光后会显示绿色；假设饱和度不正常或者自动曝光，则不能正常完成 〔曝光进度条显示为粉色〕，通常状况下为光圈过大造成，需调小光圈。也可以根据初步采像结果，自行调整曝光时间，得到较满足的结果。图像采集后，保存步骤如下：选择文件File〔菜单〕栏下的SAVE保存〕SAVEAS另存为〕0K保存文件。指定图像的格式可谓〔TlF，BMP，PCX，MAC，colorTGA〕。留意JPG格式，必需先将图片准化成8bit，否则不能保存。2结果分析通过1D-MultiAnalysisTools(一维多泳道分析功能)来分析测量条带的灰密度。首先点击翻开按钮，选中要分析的图像，点击确定(如图3所示)，点击分析工具(Analysistools)1D-MultifautoGridfDetectPeaks，再通过增加或删减条带，得到想要分析的条带的结果(如图3所示)。其中设置的绿线间的区域表示检测的区域，不能太窄，也不能太宽，最好是包括大局部条带在内。凝胶分析软件包括自动或者手动标注泳带及泳道，自动背景扣除，泳带的峰形及灰密度分析等功能(如图4所示)。分析得到的凝胶图像灰密度值，将目的泳带与内参泳带进行比照，通过统计学分析得出基因或蛋白在处理后是否发生改变。图3图像分析图4 数据分析报告日常维护留意事项仪器电脑专机专用，以免感染病毒无法使用，制止重装电脑系统，因重装后仪器软件需再次激活才能使用，必需向厂家再次申请注册号，耽误仪器使用，且要负担确定的效劳费用。正确的暗箱关门方法。将暗箱门掩至60度左右位置，放手，依靠重力，门自行关闭。留意：忌用力推动关闭暗箱门。留意保持紫外灯箱及投射白光板的清洁。⑷严格遵守试验室规定，使用GelredEB,避开EB污染。FluorChemQ凝胶成像分析系统在试验教学中的应用FluorChemQ凝胶成像分析系统是一款集多种功能于一身的仪器，既能采集核酸电泳图像，还进一步开发出了蛋白化学发光及蛋白荧光图像采集等功能，避开了蛋白图像采集过程在暗室中的显影、定影等操作过程及不行控程度。可以通过软件把握整个流程，通过曝光时间可控性得到清楚的目的条带，灵敏度、时间以