第课时微生物的利用

第48课时微生物的利用考点一微生物的实验室培养1.培养基的种类（1）按物理性质分类高频考点突破培养基种类特点用途液体培养基不加凝固剂工业生产固体培养基加凝固剂（如琼脂）微生物分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏（2）按功能分类种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质的抗性而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种试剂或化学药品依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计鉴别不同种类的微生物伊红—美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌2.培养基的配制原则和营养构成（2）培养基的营养构成①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。目的要明确：根据微生物的种类、培养目的选择不同的原料配制培养基营养要协调：配制培养基时要注意各营养物质的浓度和比例、pH要适宜（1）培养基的配制原则3.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项（1）步骤：计算称量溶化灭菌倒平板（2）注意事项①倒平板的温度一般50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4.纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项（1）原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。（2）方法：平板划线法、稀释涂布平板法。（3）平板划线操作的注意事项①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。拓展提升1.自养微生物和异养微生物的营养比较营养类型碳源氮源生长因子自养型微生物CO2、NaHCO3等含碳无机物NH3、铵盐、硝酸盐等一般不需要异养型微生物糖类、脂肪酸等铵盐、硝酸盐、蛋白质等有些微生物需要2.划分依据：自养微生物与异养微生物类型划分的主要依据是能否以无机碳作为生长的主要或唯一碳源，而与氮源无关。自养微生物以CO2或碳酸盐为唯一碳源进行代谢生长；异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。3.自养微生物的能源①利用光能，如蓝藻等。②依靠物质氧化过程中释放的能量，如硝化细菌，能利用NH3氧化过程中释放的化学能，NH3既作为氮源，又作为能源。4.异养微生物的能源主要来源于有机物的氧化分解，碳源不仅为异养微生物提供构成细胞的物质，而且提供完成整个生命活动所需的能量。5.微生物的类型营养类型主要（或唯一）碳源能源代表菌光能自养型CO2光能蓝藻光能异养型有机物光能红螺菌化能自养型CO2无机物硝化细菌化能异养型有机物有机物大肠杆菌对位训练1.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是（）①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A.⑤③②①④⑥ B.①②③④⑤⑥C.⑥②③④①⑤ D.③④②①⑥⑤A2.有关稀释涂布平板法的叙述中,错误的是（）A.首先将菌液进行一系列的梯度稀释B.然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C.适宜条件下培养D.结果都可在培养基表面形成单个的菌落D考点二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.筛选菌株的原理微生物的选择培养：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。2.统计菌落数目的方法（1）显微镜直接计数法①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。②方法：用计数板计数。③缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法（活菌计数法）①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作

a.设置重复组，增强实验的说服力与准确性。

b.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数=(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落

数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），

M代表稀释倍数。3.细菌分离与计数的实验流程土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物的培养→观察并记录结果→细菌计数4.课题延伸——菌种的进一步鉴定（1）原因：由于分离分解尿素的细菌的选择培养基上可能生长着以分解尿素的细菌的代射产物为氮源的其它微生物。（2）原理：CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3；由于NH3的产生，培养基碱性增强，pH升高，因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。（3）方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种细菌能分解尿素。脲酶5.该实验中的注意事项（1）设立重复组：统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布3个平板作重复组，增强实验结果的说服力与准确性。（2）对照原则①判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。②判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。 ①牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基应各有一个空白对照，即不涂布菌液，目的是验证培养基中是否含杂菌。②样品稀释度将直接影响平板上生长的菌落数。误区警示对位训练3.分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（）①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐A.①③⑤⑦ B.②④⑥⑧C.①③⑤⑧ D.①④⑥⑦C4.在做顾分离挥分解逗尿素霸的细脖菌实仙验时草，A同学粘从对令应10弦6培养独基上笔筛选着出大登约15伟0个菌糠落，异而其见他同监学只选攻择出兰大约50个菌瓜落。叠产生A同学角结果鸣的原沾因可能有祖（拿）①由脾于土舅样不突同笋②充由于晨培养忙基污爷染骡③欣由于凉操作失醒误减④面没有恭设置谦对照A.滴①②丛③完B码.②效③④C.积①③方④地D厌.①轮②④A考点东三贼分埋解纤具维素昆的微呆生物绝的分普离1.纤维倘素酶纤维刃素酶跃是一差种复秧合酶彻，它铺包括C1酶、CX酶和愤葡萄糖御苷酶趋，具忘有催监化分充解纤男维素晒的作拍用，裁其作抹用过程浊如下桑：纤维员素俩纤维骆二糖妻葡弃萄糖C1酶CX酶葡萄奔糖苷夫酶2.纤维剧素分剪解菌秆的筛革选原略理刚果盒红纤维蹦素红色航消失炼，出拿现透唉明圈炭即：杰可根若据是豪否产涝生透计明圈来等筛选处纤维糖素分新解菌脊。3.土壤鬼中纤馅维素询分解甘菌的船筛选汗流程土壤章取样涨→选允择培岗养→盯梯度废稀释弯→将老样品喊涂布散到鉴别纤弯维素只分解倡菌的圾培养攀基上琴→挑轧选产忠生透筋明圈咳的菌落。→红盐色复胸合物提醒①纤灾维素苗分解密菌的薪选择疤培养要基为钻液体筒培养基，颂因培茫养基泼中无作凝固闹剂，眨利用迈液体挪培养葡基以单增加纤亿维素羞分解怀菌的促浓度店。②选巾择培部养基掌以纤允维素雀做碳糊源和仍能源恩，其映它绝裂大多数异微生奥物不凳能正副常生架长；票鉴别营培养抄基因格含琼样脂，故为爱固体跌培养图基，额刚果忽红染疗色法慰就是敢应用胁的此糟培养基沈。③为帮确定外得到球的菌滥是否亭是纤辣维素罚分解搏菌，朽还需嚼进行发每酵产欣纤维削素酶切的实捡验。耽纤维设素酶授的发奴酵方渴法有液责体发滋酵和辫固体适发酵疲两种输。纤候维素失酶的论测定辰方法，味一般艰是对面纤维挥素酶讨分解喇滤纸嚷等纤最维素尽后所能产生的辆葡萄寺糖进笔行定店量测情定。④流姐程中巴的“宿选择沫培养貌”是财否需谊要，扰应根北据样吗品中目辰的菌众株数竞量的咬多少看来确赠定。对位绕训练5.某研怜究性育学习候小组吩同学语，为窜了从齿土壤吧中筛筒选纤类维素分油解菌均，利腾用下化列材术料和伙用具栗进行德了实稳验，阿请完善恩下列冈实验催步骤曲。提示帜：刚饿果红哈能与鞭纤维钩素形驴成红伸色复污合物线，纤柔维素分勺解菌醋在含喇有刚级果红躬和纤绸维素臣的培营养基嗓上形对成有透鹅明圈够的菌汽落。材料神用具她：采润集的锁土样弹，研触钵，林配制骂纤维景素分汽解菌培月养基束的各粒种原辣料，贩琼脂愧，纤鼻维素犬粉，氧刚果妥红溶液丘，培狠养箱拘，无门菌水戚。实验凝步骤捎：（1）利桨用培进养纤擦维素妖分解部菌培令养基若的各桂种原姥料、授琼脂及配制恶固体巩培养旋基,灭菌芝。（2）将农采集慈的土债壤样条品在限研钵选中研徒碎后,制成纠土壤雷匀浆躬。（3）利奏用无志菌操遥作方甘法把苗土壤抖匀浆到培养基低上，投放在筝培养负箱内焦培养批一段溜时间昼。（4）用遇显微卡镜观摆察纤负维素窝分解耍菌时竞，要蜡从挑取嗽材料获制成外临时茧装片寸。纤维躺素粉完和刚执果红冠溶液加入法无菌仪水点接坐或接蛮种周围搭有透明圈钳的菌锹落考点咸四颤谷文氨酸烦发酵1.菌种蛋：谷焰氨酸盆棒状惯杆菌躁、黄楚色短盼杆菌良。2.培养挂基：叔液体饿培养妇基，医含有投豆饼尖水解冬液、邻玉米浆、挎尿素校、磷菌酸氢汁二钾受、氧者化钾觉、硫民酸镁蝇、生物素颠等。3.谷氨邮酸发万酵的割过程槐（1）选佩育菌旬种：散对数密期的谅谷氨茂酸棒叨状杆计菌、雕黄色短鲁杆菌初。（2）配静制培干养基狭：豆烂饼水嚼解液食、玉颈米浆允、尿动素、K2HP棉O4、K2O、Mg冷SO4、生染物素姓等。费（3）灭拿菌：航在发秆酵罐福中通吓入98kP挂a的水暑蒸气爸进行灭菌爸。（4）无膝菌接纽奉种：馅冷却梅后加芽入菌拦种。步（5）发变酵：宜通气仗（无嚷菌空菊气）绪、搅项拌、肠温度选和Ph的调撑节；进谷氨些酸大参量生雪成。当（6）味办精（凶谷氨购酸钠斤）的序生成景和提捉取：仿加入Na2CO3,过滤锻、离贿心分筐离。对位棋训练6.下列煎有关臭谷氨众酸发贞酵的屿叙述畏中，筒正确塌的是（裹）随A.发酵朵中要阳不断弟通入抚空气宴B.培养疼条件些不当厅将不异能得观到产朴品C.搅拌益的惟哀一目狭的是喝使空废气成剪为小扎泡D.冷却泽水可眉使酶拣活性收下降B思维元误区舌警示易错畜分析1.将消冷毒和炉灭菌咳混为战一谈条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药剂消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌解题配思路判探究提醒酒精工消毒扶时，仅体积罩分数晚为70饥%的酒柳精杀乡丰菌效果最唤好。飞原因孤是：耽浓度椅过高且，使伐菌体薪表面焰蛋白苏质凝固成座一层喉保护模膜，陆乙醇包分子碧不能由渗入退其中觉；浓穗度过低，谎杀菌角力减蹦弱。2.对题鲁目中攀给出租的信苍息、喜材料羡不会群推断巴分析（1）例碎如选桐择培妇养基——特定碗条件烟或特爸定C、N源只有该活种或那该类经微生颤物能截存活国或利使用。如纤眯维素顽粉做碳源绍时选竹择分去离出趟分解洗纤维趟素的迟微生怎物；辈无任惊何氮喇源的培痕养基鼓选择洞固氮慨微生丙物；池高盐版、强消酸、号无氧院等特岸定条件湖选择纲耐盐辽、耐刊酸、厌厌氧搏的微待生物显；加代抗生困素的将培养基基选择邪真菌凝；根首据是啊否含匙有机乖碳选冠择自徒养、早异常创微生物材。（2）根弊据划恒线法得到讨的培奖养基齐上菌束落的漆生成谈及分布情朽况，鼠推断勺分析米微生它物是败否产伙生抗武生素单及相喊互抑忧制现象渣。1.关于冒灭菌挥和消佛毒的训理解,不正枯确的比是顷（掠）A.灭菌辈是指灰杀死没环境蚀中的恭一切寒微生伐物的办细胞家、芽孢和厕孢子B.消毒纷和灭旅菌实敢质上混是相欢同的C.接种凯环用袍烧灼跑法灭税菌D.常用擦的灭天菌方樱法有项加热温法、厅紫外略线法马、化痕学药品法解析灭菌班和消印毒的林实质金相同仪，都是库破坏壶菌体咸蛋白票的活性叠而使昆其失逗去生专命力怪。但惧二者览的程办度不党同，巴灭菌是杀碗死环藏境中红的一意切微搅生物妹的细压胞、梳芽孢械和孢槐子，消毒钥不能目杀死隔芽孢深和孢韵子。猎常用石的灭幅菌法妖有干饭热灭菌法盛、高战压蒸间气灭轻菌法树、灼形烧灭棵菌法雕等，呆而消添毒有加热匠法、证紫外射线法异、化虾学药唉品法销，所灾以D项不岸正确钩。D纠正剂训练2.现有馆两种棉固体蜓培养瘦基，盾已知存其配钱制时嫩所加程的成娱分如下表和：甲培养基乙培养基成分含量含量KHSO40.02%0.02%MgSO4·7H2O0.02%0.02%NaCl0.02%0.02%CaSO4·2H2O0.01%0.01%CaCO30.5%0.5%葡萄糖0.5%-纯淀粉2%-用这庭两种果培养冠基分狠别分此离土镜壤中争的两小种微事生物富，你认竞为它危们适匹于分泻离(枝)A.甲培仅养基粥适于想分离胳自养秋型自救生固谅氮菌亲；乙她培养基机适于拘分离业异养谱型自低生固假氮菌B.甲培宾养基虹适于创分离暗酵母吉菌；自乙培贯养基乳适于宫分离真概菌C.甲培主养基角适于战分离荐异养味型自层生固脸氮菌梨；乙凯培养基章适于忠分离户自养大型自除生固略氮菌D.甲培痒养基给适于闪分离轰异养爽型共京生细摔菌；快乙培臂养基适朝于分饭离异垫养型赛共生逃固氮嘉菌解析根据漫所提胁供的庸甲、根乙两页种培己养基祝的成怜分分析，勇两者牵之间资的主搁要差轿别是发：甲丹培养躬基以咱葡萄州糖和淀友粉作妨为有旬机碳邮源和圈能源恐，也昼有少谨量的离无机戒碳源（Ca逢CO3）；乙净培养受基无戏有机驾碳源攻和能瓜源。项两者之框间的泽共同铲点是扒：都荡不含刻氮源棋。说血明这省两种中培养基际只能剃培养逝具有个固氮奥能力倒的细卫菌。答案C3.抗生原素可肝由微寄生物灶产生类，具厅有抑钢菌作荣用，废能在巡寿琼脂培椅养基缘瑞中扩费散。采在筛葬选产语生抗录生素尼的菌较种时兽，先在莫琼脂管培养抚基平答板上插划线秩接种具一种术从土丝式壤中闻获得的免甲菌弄，在27辣℃下培呀养3天，夜形成锈菌落喇。然危后接种乙缎、丙过、丁联三种命致病奏菌（绳图A），障继续巴在同屯样条件下集培养3天，炎结果所如图B。分湿析结乘果，候得出少的结论是荣（僚）①甲缎菌产撑生了化抗生汗素准②丁踏菌的予生长之被丙龄菌产止生的访抗生素智抑制顿③乙拨菌的在生长畜被甲杀菌产勉生的哥抗生爸素抑抹制④丙俘菌产末生的浴抗生白素抑抽制了受乙菌稍的生私长A.润①③颤B洋.①报④漂C碑.②庸③辉D限.②锣④解析乙、全丙、傍丁三茶种致潮病菌蔑不会倾产生裁抗生电素，核否则靠酱近乙辅、丙求、丁誓的甲表菌落服不能卸生长阅。从棕图B来看奔，乙菌赛的生著长被另抑制环，最严可能绍的原毕因是壁甲菌时产生腿了抗生素斧，此吨种抗齐生素飞只能档抑制茶乙菌致的生吐长，撒而对界丙、丁两糕种菌肌没有纠影响启。答案A知识屑综合餐应用重点男提示1.通过瓜“选革择培包养基供筛选孩特定获功能蠢的微庄生物织相关谅知识”通的考路查，溉提升糖“综抛合运革用所误学知弊识解昆决自始然界劣和社会深生活软中有启关生祸物学雅问题长”的觉能力铅。典例须分析1.（20见09涉·上海扯卷，39）氯苯政化合思物是决重要劣的有扰机化工降原料穴，因船其不首易降肥解，会污阿染环幻玉境。愚某研究小组复依照符下列槽实验紫方案傍（图1）筛翠选出害能高谨效降解氯样苯的出微生号物SP1菌。剩培养忠基配伟方如才表1。图1表1培养配基的洞组成液体饼培养厉基度蛋白鉴胨谱牛肉吩膏今氯俯苯否氯化造钠械硝磨酸铵喷无机杂盐（糖无碳刑）喝蒸疾馏水Ⅰ号10g5g5mg5g释—牧—鸦1荷LⅡ号—誓—50mg5g3g适量1LⅢ号—四—20~80mg5g3g适量1L（1）配搜制Ⅱ号固竭体培分养基嚷时，捷除添亲加Ⅱ号液刑体培养基探成分贪外，纸还应锣添加1%的。（2）培内养基辛配制饺时，亭灭菌理与调pH的先速后顺仅序是。（3）从泼用途践上来罗说，Ⅰ号培乓养基是和Ⅱ号培症养基斑分别属淹于培养鸟基和培养吉基。锄在Ⅱ号培养依基中吵，为SP1菌提桐供氮数源的玻成分于是。（4）在滴营养吵缺乏串或环轮境恶坏劣时辛，SP1的菌伙体会刮变成一每个圆炕形的胃休眠姓体，思这种趟休眠冤体被瞒称为。（5）将SP1菌接诉种在到含不疲同浓毅度氯柳苯的Ⅲ号培高养液中拐培养胜，得战到生佩长曲垂线（刻如图2）。咳从图2可知会，SP1菌在培养杏条件江下最脖早停秒止生框长，违其原壳因是。解析配制竖固体碌培养茅基时家应在坡液体猜培养万基的绘成分打中再加计入琼确脂作妹为凝愧固剂丈。在配愉制培耕养基底时应弟先调钳节pH，后准进行双灭菌颠，防祸止灭挤菌后队在调截节pH的过袄程中污染祖培养基。皇据表伞可知烫，培蛾养基Ⅰ为牛断肉膏训蛋白惊胨培养铅基，酸包括院碳源罪、氮袜源、速水、孟无机呼盐和诵生长却因图2子，泳适用俩于多惠种微油生物散的培宽养。肤培养塞基Ⅱ不加夹牛肉膏和良蛋白蔬胨，至以硝尝酸铵仇为氮爽源，证可以金选择闪出以轻硝酸铵为听氮源和的微柴生物纲，是蜻选择弱培养缝基。罚在营少养缺骄乏、环境逃恶劣罪时，画微生壤物可端以形摄成休犯眠体——芽孢结，来度过球不良河环境各。据鞠图2可知仍，SP后1菌在20恭m透g/械L氯苯培养章条件责下菌顺体数羡最早累达到梳最大疗值，侵即最苍早停胸止生长，吧原因砌是在急培养蚊基Ⅲ中，扰氯苯善是唯松一碳纯源，余由于20缝m僚g/取L氯苯累培养任条件颤碳源茄最少寺，因妄此也荡最早察被耗尽，锤使SP咳1菌停四止生低长。答案（1）琼纽奉脂句（2）先堤调pH，后凡灭菌穿（3）通湿用选择尊硝牙酸铵帖（4）芽役孢警（5）20倚m监g/拉L氯苯再碳源最壁早耗矛尽重点世提示2.通过瞎“探逗究土尸壤微宴生物蓄对尿问素是剃否有丛分解灭作用岔”的考糖查，丛提升故“对减一些挪生物妻学问仪题进掠行初历步探凡究”的能枕力。典例述分析2.同学气们为得了探吃究土勒壤中销的微窜生物零对尿第素是蜻否有超分解作嗽用，蚁设计题了以未下实摆验，仔并成透功筛裁选到请能高摊效降解贩尿素型的细今菌（耕目的亭菌）于。培宏养基凑成分约如下团表所示迹，实锈验步猜骤如避下图闸所示尿。请肃分析趋回答傻问题坡：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖1g尿素10g琼脂15g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL（1）简种述土荡壤中岁可分仔解尿惧素的位细菌知的鉴肯定方仇法及原理:。（2）培顷养基管中加丝式入尿守素的俗目的纷是筛带选，这种瓦培养册基属棋于培养乡丰基。（3）“限目的皇菌”米生长护所需歌的氮描源和己碳源塞分别斑来自培养茶基中泰的和，实息验中竹需要释振荡培养鞠，原扶因是。（4）转罪为固瓶体培刮养基县时，自常采予用接种刻，获得映单菌倍落后碰继续互筛选问。（5）实粗验结芬束后游，使摄用过凳的培炸养基渗应该端进行处理挂后，丸才能颤倒掉胀。解析尿素码是培撒养基滨中的珍唯一太氮源衫，因侨此原蚊则上胆只有能好够利猾用尿拥素的第微生师物才门能够隙在此塔培养贩基上专生长咱。由于掠细菌怠合成棍的脲色酶将期尿素汗分解跌为氨积，pH升高摧，故在以誉尿素嘴为唯膀一氮逆源的恶培养邀基中才加入贯的酚术红指殊示剂将变往成红蔬色；参这种爪培养霸基属谅于选休择培孔养基绿，可怠筛选目的泪菌；数其生痕长所绕需的赞氮源菜和碳部源分敢别来徒自培汽养基中的大尿素羞和葡报萄糖厌；振郑荡培昂养的家目的美是提晚供氧跑气；固体叠培养喝基培环养时犁的接陶种方倡法常资用稀别释涂陪布平厦板法或平街板划沉线法队；最铺后，键别忘喊记如籍果倒离掉培暗养基词，之前应歉灭菌渐处理桨。答案（1）在案以尿怒素为床唯一雕氮源熔的培孩养基页中加伪入酚红指处示剂阿，细旺菌合元成的渴脲酶坊将尿情素分佩解为博氨，pH升高，此使酚魄红指辰示剂心变为获红色（2）目昏的菌另选竖择蚁（3）尿仍素标葡萄通糖咐为坑目的丹菌提供脖氧气（4）稀挨释涂熔布平蔬板法圣（或吴平板母划线别法）馒（5）灭成菌考点题号微生物实验室培养2、3、5、6、7、8分解尿素的细菌的分离与计数1分解纤维素的微生物的分离41.下面劳是分搏离分姻解尿饰素的汤细菌篮所用草的培删养基猛，据况表回答具下列阳问题能：（1）该属培养踩基中览含有服的最淡主要乒碳源程是。（2）该竟培养纱基按于物理污性质松划分再，属忘于培养基，哄该培洁养基滋具有状选择阻作用搞的原捕因是。定时基检测（3）在俱该培盘养基亭中，培可以台通过垃检测pH的变抱化来堂判断尿厦素是或否被比分解押，所搜依据膊的原河理是，所万用方洒法是辈在培淹养基中加塑入，若劣尿素送被分特解，卧则培严养基变成色。（4）如访果将段此培威养基纺改为就用来鼻分离末分解胞纤维弹素的盒微生物体的培稍养基姑，则扇主要垃提供术碳元戴素的符物质橡应改继为。解析培养茄基中榨葡萄霉糖、辟尿素午和琼勺脂都伶含有餐碳元躬素,其中浓葡萄斩糖是合最主蹲要的饶碳源拨，尿存素主吴要提夹供氮皱元素，搁琼脂课是凝寨固剂尖。由于蔑琼脂琴的存凤在，询该培饲养基土属于固败体培膝养基掀；由慕于尿寸素是些该培味养基肺的唯糟一氮拉源，只有灭能分护解尿复素的微生苍物才鲁能在罪上面易生存咏，因础此该培养至基具作有选慕择作汇用。尿素注分解粘会产专生氨胸，氨挖能使酚红溉指示惯剂变失红色素，据此可肤以推游测培输养基伐中的型尿素是否渗被分早解。筑若该部培养基改孩为用染来分遗离分陕解纤长维素的微眉生物奇的培酷养基感，纤维赴素应搞作为钩唯一湾碳源刑，因逐为只有寨这样思才具狼有选调择作苏用。答案（1）葡俘萄糖爬（2）固帜体氧该野培养舒基中渣唯一叹的氮源旨是尿羊素，唇只有取能分必解尿晕素的箭微生社物才迅能在洗此培养基上讲生长姑繁殖矛（3）微生惨物产猜生的磁脲酶锣能将钳尿素分驰解成咬氨，浪氨会株使培轮养基旅的pH升高营酚红茄指示剂除红句（4）纤羞维素2.（20矿09孩·宁夏简卷，40）（1）在饭大肠留杆菌上培养浪过程中，绕除考坟虑营起养条论件外木，还挖要考川虑、和渗透睛压等革条件禽。由判于该跌细菌叛具有凯体积茶小、川结构剖简单竿、变异伞类型榴容易加选择辱、、等优量点，薪因此常少作为桐遗传援学研序究的仆实验叉材料秆。（2）在厦微生腔物培伶养操偿作过寒程中坦，为稿防止纷杂菌锦污染杜，需对碗培养姓基和服培养嘴器皿艳进行（消筑毒、友灭菌）氏；操葡作者弓的双幅手需同要进及行清售洗和；静止空翻气中迷的细巩菌可御用紫辈外线面杀灭酷，其诉原因兼是紫炎外线能酿使蛋敞白质鲜变性员，还田能。（3）若棵用稀做释涂估布平罚板法苦计数遭大肠投杆菌昂活菌污的个数，壶要想倍使所嘴得估锡计值剩更接杯近实映际值举，除忆应严唇格操作球、多享次重判复外去，还享应保凉证待盗测样扰品稀殃释的。（4）通组常，其对获副得的垒纯菌珍种还构可以鲁依据遗菌落狭的形状、残大小具等菌棚落特编征对纪细菌牵进行涨初步断的。（5）培疑养大筛肠杆赢菌时烤，在胡接种静前需躺要检怨测培逆养基是否踢被污介染。姜对于击固体剧培养招基应含采用倘的检用测方动法是。（6）若洁用大政肠杆圆菌进米行实强验，冰使用幼过的榆培养捕基及史其培养蜡物必杯须经择过处理网后才斧能丢栋弃，涌以防远止培养羞物的婆扩散烛。解析（1）影罩响微笼生物世培养章的因胳素除刃了营呆养条索件外，窑外界料条件喇主要由包括犁温度然、酸哗碱度灿和渗排透压犯等。由于顾大肠妖杆菌店具有猜体积往小、照结构供简单挖、变叙异类喘型容易选集择、矮易培堡养、帝生活董周期仗短等雅优点哭，所霜以常径作为遗传五学研云究的铅实验挎材料农。（2）对怀培养献基和摔培养获器皿曾要进黎行灭昌菌,对操量作者淡的双手膝需要害进行验清洗炒和用萄酒精塞消毒,静止叨空气菜中的应细菌在测用紫之外线猛照射玻后能重够使劣蛋白公质变诊性，偶并损斩伤DN蒙A结构气，使庙细菌绒死亡目。（3）样砌品的淡稀释逮度直张接影吩响平简板上恢生长洲的菌础落的艳数目，伙实际络操作条中，枕通常跟选用潮一定傲稀释告范围贫的样士品液进行丸培养田，以技保证询获得愚的菌驾落数寸在30战~3醉00之间牲。（4）菌肥落的讯特征缸是判回断微艘生物沉的种塑类的邻重要怒依据趁，对获掏得的录纯菌唐种可甚以依辩据菌头落的册特征吩对细矮菌进诞行初步检绢测。（5）要库判断悼固体叨培养摧基是耻否被毫污染从，可猎将未坛接种趴的培养仔基在唉适宜忌的温冒度下农培养闸一段翅时间新，若僚发现种有菌落说校明培略养基誓已被穴污染科。（6）进情行微茅生物旅培养领时，崇使用码过的椒培养块基及收培养双物必须音经灭守菌后宣才能速丢弃欢，防刊止培挽养的伙微生骑物扩夺散到环境旱中，蜓造成院危害诊。答案（1）温短度小酸终碱度垮易培铃养聚生推活周攀期短（2）灭赚菌安消勤毒劫损末伤DN接A的结映构（3）比炮例合通适坏（4）鉴决别（煎或分浮类）（5）将峡未接挽种的胃培养带基在井适宜缴的温炕度下愈放置玻适宜的时揭间，废观察互培养罩基上腔是否芹有菌盈落产贴生葬（6）灭被菌3.（20惰08诱·山东沾理综拿，34）科学栽家发率现蝇昏体内耕存在一种河抗菌至活性林蛋白内。这宽种蛋钳白质扩具有言极强雪的抗魔菌能力刘，受剖到研嗓究者取重视纸。（1）分窃离该闯抗菌炕蛋白使可用仿电泳差法，畅其原肿理是茶根据蛋白贼质分伍子的、大止小及冰形状病不同爪，在仿电场中邀的不同民而实搬现分涛离。（2）可闷用金撑黄色令葡萄闯球菌征来检耗验该溪蛋白投的体勒外抗援菌特性攀。抗枝菌实袋验所俊用培放养基题中的附牛肉剥膏和公蛋白璃胨主要为肥细菌纳生长质提供和。（3）分剑别在绢加入辅和未损加入追该抗咐菌蛋烫白的劝培养裤基中泳接种等裂量菌狭液。鱼培养班一定辟时间年后，筝比较形两种糠培养畅基中菌落谋的，确扑定该堡蛋白禽质的哈抗菌具效果胃。（4）细悦菌培泽养常茧用的纷接种嘉方法却有和。实验亮结束克后，凤对使驳用过奏的培用养基递应进庆行处理青。解析电泳违利用织了待员分离风样品中沿各种扣分子虽带电串性质柿的差异椒以及渠分子菊本身锤的大垂小、尚形状龙的不矛同，体使带讯电分子产晚生不忌同的狐迁移句速度姜，从爽而实急现样犁品中还各种加分子的分怨离。子牛肉爆膏主锯要为闭微生费物提链供碳挤源、缎磷酸昏盐和维生行素，粮蛋白枕胨主降要为妄微生悉物提册供氮满源和鬼维生乱素。细菌肆培养举中常伸用的东接种苏方法掀有平香板划帝线法咏和稀迹释涂布平崖板法原。实皆验结挥束后权，对烦使用犁过的尝培养炒基应恢进行灭菌悼处理寄，以约防造裹成细券菌扩烦散，锻带来奔危害倡。答案（1）电偷荷（喇带电嫂情况赞）禁迁拉移速煮度（2）碳笑源近氮星源探（3）数彻量（4）平皱板划汤线构法答稀释培涂布怜平板脱法（废稀释红混合影平板法花）贪灭诉菌4.生物闷乙醇填是以嫁生物杜为原律料生膨产的船可再市生能粥源。抵我国利用执农作餐物废暴弃物停（秸末秆）您生产例乙醇畏，其巧技术芹流程为：望纤维狡素酶风解→舌酵母举发酵鸽→蒸到馏→石成品落。（1）纤宿维素葱酶的便成本斥能否锦下降工，是朋能否性实现弹乙醇搏工业化税生产愿的关禁键因羞素。陵纤维宏素酶乒可以狸从能粗分解插纤维素的森细菌震培养常液中写提取送。某骡同学豪设计书了如算下分斧离土壤中缓纤维量素分哪解菌鸡的实摄验流踏程：傅土壤大取样处→选誉择培养→众梯度笋稀释亦→鉴祖别培便养。①最百好选舰择怎痛样的必环境象采集彩土样破？。②以滩下是附一种微培养男基配穷方：借纤维冈素粉5g、Na射NO31g、Na2HP纤O4·7H2O1.拴2g、KH2PO40.水9g、Mg载SO4·7H2O0.洁5g、KCl颤0.认5g、酵旦母膏0.睬5g、水解饭酪素0.趟5g（蒸饮馏水轿定容导到1谨00厨0mL）。汪该培养基叶能够洋增加蔑样品甚中纤灶维素枕分解蹈菌的爹浓度翠，其疲原理是。③为握了鉴组别纤锡维素兵分解腔菌和留进一搅步纯讯化菌峡种，赖可以在鉴漂别培拦养基炼上加愤入染液凡，将蜡筛选叙获得之的菌液祖稀释宣后用接种潮到鉴也别培们养基歪上，骆然后挑选屋产生的菌略落作敲为菌罩种进廊行扩喝大培骗养。④纤东维素举分解位菌培瞧养液品中的么纤维才素酶蒸产量器如何棚呢？请设介计实蠢验进邪行检摆测。。（2）进贩行工焰业化脆酶解与时，野为了竟使纤决维素绒酶能唤反复使用，可乡丰以采叔用技暖术。（3）乙屑醇是卖酵母育菌的遗发酵贤产物烧，发唐酵时虑酵母宣菌直接利纯用的曲物质阵是。（4）发茄酵时茫乙醇奋浓度福升高跑会对附酵母膊菌产答生毒些性，从而程影响挺进一领步的铜发酵女。科丸学家态利用奋基因游工程旅方法创旅造出径一种泡对乙肢醇浓琴度有动高耐侧受力徒的酵虾母菌健新菌种在，该疫过程墓需要猪采用PC谁R技术培扩增励目的疮基因勉。与体暑内DN包A复制录相比订，PC扰R反应圾体系拥需加碰入哪竭两种特盐别的姑物质边？。解析分离怕土壤播中的声纤维消素分驶解菌土应从离纤维你素丰租富的土搭壤环充境中此取土激样，寒这样姨的土卷壤中砍纤维宪素分或解菌较多金。在障所给框培养葛基中朱，纤鄙维素电是碳哄源，视只有车能利用纤朽维素页的微面生物同能生皮长，华其他驶微生配物不删能生芽长。鉴别灶纤维侧素分段解菌迎可在翻培养宏基中韵加入渗刚果分红染布料，将筛皮选获爆得的乡丰菌液毛稀释纷后用辫涂布魂平板繁法接议种到购鉴别培养倦基上煎，纤灯维素嫩分解言菌产豪生的帅纤维垦素酶惧能分往解纤维素胀，产葱生透更明圈例。检批测纤钟维素背酶产玻量可敲根据洪葡萄糖产睛量确亦定。广工业拉化酶矿解时购，为紧了使丧纤维占素酶宗能反复使融用，扑可以丢采用劈燕固定煤化酶予技术旺。酵餐母菌波利用好葡萄糖（阻或纤时维素绿酶解沾产物吩）发汇酵产叔生酒瓜精。PC苗R技术科扩增目钉的基激因时巩需加倚入两咸种引辩物、寺耐热龄的DN关A聚合芦酶。答案(1伸)①选择戴纤维临素丰富腐的土逗壤环部境快②呀培养社基中纤杂维素短是主边要碳梢源，翠有利尝于纤厌维素初分解蝴菌生育长，同时职抑制亚其他灯微生饥物生饶长维③董刚果烂红轿涂张布平腊板法透明别圈啄④宾向定肚量纤条维素宗分解狭菌培叨养液术中加逆入定养量纤维转素，煮定时争测定捆葡萄休糖产梢量的梢变化(2更)固定镇化酶(3顽)葡萄斑糖（柏或纤捎维素评酶解雷产物绞）（4）两谅种引斩物、耐热冈的DN筛A聚合慨酶（Ta滚qDN关A聚合召酶）5.从自服然菌哭样筛亮选较哑理想有生产悬菌种遇的一魂般步匆骤是智：采规集菌狸样→忍富集友培养公→纯斧种分撕离→付性能脚测定泳。（1）不柏同微惩生物藏的生念存环绑境不耀同，枪获得蔑理想差微生物的匹第一涨步是皆从合肃适的岸环境蓬中采腹集菌熔样，校然后茫再按一挣定的券方法终分离育、纯列化。驱培养作嗜盐心菌的攻菌样投应从环境徒采集睬。（2）富基集培倚养指味创设报仅适叹合待友分离帝微生较物旺览盛生长的键特定防环境索条件朵，使取群落丘中其膝数量抓大大盘增加阿，从而分泛离出叫所需债微生惰物的错培养症方法剂。对锣产耐傅高温较淀粉酶微企生物普的富兼集培耗养应浊选择的培姥养基，净并在条件笨下培飘养。（3）下伍面两秃图是铃采用躺纯化浩微生纳物培吐养的怠两种没接种方法张接种颈后培袍养的怎效果速图解兆，请赛分析术接种独的具梅体方法袜。获得朵图A效果花的接娇种方云法是，获络得图B效果的高接种诉方法弯是。（4）配锹制培烂养基纲时各步种成尽分在愧溶化易后分佩装前拌必须重进行，接咳种前摧要进套行，在丹整个葬微生物吼的分秆离和饿培养番中，涉一定令要注声意在条件下进啊行。解析（1）嗜梯盐菌沫就生齿活在首高盐秩环境摊中，患如：肃海滩等环钱境。抹（2）耐余高温氧淀粉明酶应思存在云于以份淀粉卫为唯桂一碳源竭且在膨高温笨环境坟中生爆存的侵微生歼物体要内。踏（3）从拥不同菌溜落之锄间的羡关系省可以诸看出牵，A纯化沉微生轨物的脆接种校方法是凑稀释看涂布幼平板雁法，B纯化萄微生富物的目接种傅方法司是平板划没线法胁。（4）培域养基长配制涂时应乔先溶化趴，再变调整pH值，肃然后煤灭菌酿。答案（1）海划滩等祸高盐摊（2）以泉淀粉忌为唯阶一碳尚源高温叮（3）稀倍释涂欧布平喉板法丹平板起划线饺法（4）pH调整在高压悼蒸汽呀灭菌喜无菌6.为了躺研究蜡微生犹物的羞抗药氧性突炮变是倡自发香产生框的还是在环硬境因备素的惠作用拆下产俗生的非，19嫂52年Le责de调rb泄er财g夫妇利用嘴大肠垃杆菌哈设计冲了一甲个影逐印培阀养法蚁实验千。影印红培养龄法的绝实验嫁原理附是：把长桃有数眯百个标菌落刻的细菌母批种培脸养皿拐倒置钱于包挤有一疾层灭踪蝶菌丝绒布答的木哭质圆柱体绑（直猾径略申小于泼培养发皿平次板）毕上，功使其均匀底地沾满来袍自母悲种培总养皿隔平板级上的喷菌落锡，然盛后通测过这就一“印干章”刃把母挽板上誓的菌礼落“忠帅实地罪”一艇一接迈种到听不同的浊其他毯培养兽基上散。下图些就是筑利用酸影印违培养哥技术类证明浆大肠在杆菌服产生费抗链霉南素突青变基毫因的辛实验投。具理体方车法是辉：①首免先把食大量蛇对链咬霉素抹敏感会的大婶肠杆泥菌涂产布在遮不含链霉喷素的撤培养愚基的饲平板1的表疑面,待其迹长出紧密集愿的小菌落命后,用影削印法踪蝶接种山到不夺含链需霉素杏的培业养基取平板2上,随即重再影居印到旦含有葬链霉武素的缝培养算基平钢板3上。扭经培养系后，捧在平嘉板3上出逮现了顶个别雀抗链文霉素蓬的菌击落。②对宪培养没皿2和3进行犹比较领，在采平板2上找瓜到与律平板3上那棒几个戒抗性秘菌落败的“祸孪生寄兄弟矛”。③把亚平板2上与袋平板3上菌惹落相提应的岛一个宇部位柄上的扎菌落挑省至不绝含链萌霉素君的培醒养液4中，经培玩养后界，再甩涂布在平伪板5上。④重舰复以喇上各丽步骤其，最凡后在轧试管12中获蒸得了想较纯摘的抗性童菌落清。根据自以上弯材料肯回答奴下列躲问题新：（1）若螺要仅引获得可抗链隐霉素卖的大贡肠杆唱菌，兴则该部如何操作:。（2）大耀肠杆小菌抗阳链霉丝式素基样因存陆在于侄细胞渠的结构上们，在回基因推工程程中，自该结化构常宽作。（3）3号、7号、11号培凑养皿锅中加宪入链瓣霉素轮的作灿用是，3号培胆养皿馋中的飘菌落难比1号、2号中的反菌落胁少很剖多，要这说糟明了。（4）该统实验晨最关胜键的临设计轻思路购是。你捎认为该诉实验敢设计稍的巧州妙之描处是。（5）你贺认为悼该实诵验得累到的头结论狐是。解析（1）若汽要获孤得抗骄链霉怕素的吸大肠莲杆菌晓，用桶含链霉素臭的选肥择培趴养基激进行岂培养唉即可消。（2）细畏菌的见抗药性基说因一刷般存樱在于抢质粒栏上，志质粒垦在基精因工挺程中洲常用作载轧体。醉（3）链俘霉素渡起选零择作叔用,大部扰分的梁大肠物杆菌被映杀死,少数黎具有幻玉抗性辟的个插体保共留下即来。府（4）实验中凝最关住键的燃设计家思路恩是对都照，裕即在淘含有链善霉素价和不含卧链霉楼素的挤培养崖基中岗培养龄。答案（1）将吊原始武菌种摸涂布秤到含支有链杯霉素袜的培纷养基中进亚行选改择培肿养，智生长壮出的歼菌落懒即为键抗链刻霉素镜的大肠杆茫菌（2）质颠粒抄载太体（3）选西择作害用嗽通杏过链该霉素彼的选狸择作聪用，附具有虽抗药性的待大肠掩杆菌屯保留替下来讲，数万量较折少（4）对咏照实蛙验喇最慢终获作得的券抗药陪性细销菌一牧直没饮有接触链粗霉素（5）微传生物沿的抗滥药性详突变长是自狠发产惰生的滤，而底不是唉在链霉岔素的追作用娃下产网生的7.酵母睡菌是袄一种巴真菌杯，与巴人们滑的生棕活密牛切相育关。水请回答下泼列问脱题：（1）进必行果键酒酿额制实李验时斜，对宰清洗监干净赵的发践酵瓶还要猾用70苦%的酒叹精进声行擦挥拭，和其目帐的主尾要是。往发北酵瓶警内装残发酵最液时,一定叔要留筛有约1/幅3的空愁间,这是沸为了。为了慢提高术果酒嗓的品庆质，鹊更好赌地抑平制其眨他微惧生物朝的生长帜，最猪好直冰接在变果汁寇中加应入。发酵旬的过寸程实金际也弱是酵胁母菌凤的培狸养过后程，酿发酵使液中的能有机痒物主责要为燃其提耕供着源等券营养女物质灿。（2）将状土壤振浸出闭液接沃种到凭特定茧的培葡养基激上可担得到酵母跳菌菌诊落。走这一困步叫间做，所用过的培塑养基较又称快为。（3）在顷酵母本菌的里纯化愈培养损中，牧培养硬基上等会出窑现一些分硬别由筒一个救酵母前菌繁量殖而舒成的焦菌落先，在澡生态住学上，蝇一个输菌落竟的全雀部酵奋母菌露称为魔一个。为了滤能反裙复利引用酵忽母菌堡，需盒要将举纯化轻后并法经过淘繁殖培斥养得验到的基酵母秘菌与鄙海藻跃酸钠夹混合锈制成佛“凝愁胶珠”渐，这饥一技宏术叫。解析（1）因结为进居行果搜酒酿锦制实悲验时糟，要恢尽量锻避免其他锄杂菌游的污反染干帽扰，是而质凳量分直数为70友%的酒竭精具有杀执菌作论用，四故要骑用这暗种酒脂精擦冶拭发