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大学《微生物检验技术》考点精要、各章核心知识

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目录

《微生物检验技术》考试考点精要1

《微生物检验技术》各章核心知识点(详细完整版)42

《微生物检验技术》名词解释、填空、问答选择题150

《微生物检验技术》考试考点精要

1.生物学按界门纲目科属种分类,种是最小单位。病毒分类:目、科、亚科、属、

种。属名一VRirus结尾的单词,亚科名一VRirinae结尾的单词,科名一VRiridao结尾的单词。

目名一VRirales。2004年ICTV公布病毒分为:73个科、11个亚种、289个属。

2.结核菌可利用甘油为碳源,梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源,流感嗜血杆菌要V,

X因子才能生长。

3.药物敏感试验:纸碟法、小杯法、凹孔法、试管法。常用单片纸碟法、试管稀释

法(以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长或杀菌管为终点,该管含药浓度为最低

抑菌浓度MIC或最低杀菌浓度MBC),两值越低则表示越敏感。MIC与抑菌圈呈负相关,

即抑菌环直径越大,MIC越小。

各药敏纸片间距不少于24mm,距平板内缘不小于15mm。

药物敏感实验判定标准:抑菌圈直径(毫米):20以上极敏、15~20高敏、10~14中

敏、10以下低敏。不同的菌株、不同的抗生素纸片需参照NCCLs的标准或者CLSI标准。

多黏菌素抑菌圈;在9毫米以上为高敏,6—9毫米为低敏,无抑菌圈为不敏。

4.常用的免疫技术:酶免疫技术(EIA)、协同凝集试验、免疫荧光技术(IF)、对流

免疫电泳(CIE)、免疫印迹技术。

5.病原菌核酸的检测:核酸杂交、PCR技术、基因芯片技术。

PCR技术一是选择DNA或RNA体外扩增技术,用标本提取DNA为扩增模板,选用一对

特异寡核甘酸为引物,PCR一般要经历三十多次循环,经不同温度变性93-94C(作用Imin

氢键断裂形成单链DNA)、退火40-60℃(迅速冷却30-60S引物与DNA模板结合,形成局部

双链)、延伸70-75℃(在TaqDNA聚合酶作用下,以A、T、G、C四种脱氧核甘酸为原料,

从引物5'-3'端延伸,合成与模板互补的DNA链。),扩增产物用溪乙咤染色的凝胶电泳。

其具有特异、快速、灵敏、特异性强、操作简便、能够定量。引物是PCR特异性的决定因素,

PCR反应中TaqDNA聚合酶、引物加量过多,可引起非靶序列扩增。

变性DNA常发生一些理化及生物学性质的改变:1)溶液粘度降低。2)溶液旋光性发生

改变。3)增色效应。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为"退火",Tm低

25℃左右的温度是复性的最佳条件。核酸实验中经常以迅速冷却至4℃以下方式保持DNA的

变性(单链)状态。

基因芯片技术(DNA芯片、DNA微阵列)一主要过程:DNA微阵列的制备、样品的制备、

靶分子和探针之间的杂交、杂交信号的检测与分析。具有快速、敏感、高通量检测平台。

核酸杂交(基因探针杂交技术)一是指单链RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA,根

据碱基配对原则,借氢键相连而形成杂交分子的过程。杂交百分率>70%069%)为高度同

源性,同源性在60%以上是一个种,同源性在60%—70%是同一种内不同亚种,同源性在20%-

-60%同一属内不同菌种,同源性20%W不同属的菌种。

AFLP的含义是一一扩增片段长度多态性。有很大功能的DNA指纹技术。一种是罕见切

割酶,一种是常用切割酶。具有RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性。

6.细菌诊断流程有:双岐索引法,表解法,数字编码鉴定法。致病性岛:由基因编码决

定的一团与致病性相关的基因组。

7.病原细菌确定原则:(郭霍Koch原则)1、从一种疾病病人中能有规律地发现一种

细菌2、能够分离这种细菌获得纯培养3、把这种细菌的培养物引入易感动物体内,可以引

起与病人类似的疾病4、在实验感染引起的疾病中仍然能够分离同一种细菌。

8.杆菌肽用于A(敏感)与非A群链球菌的鉴定。0/129抑菌试验对弧菌有用而对气单

胞菌无用。

9.奥普托欣试验:肺炎链球菌敏感。

10.杂交分:斑点,菌落原位,Southern(DNA)印迹,Northern(RNA,DNA)印迹。

11.L型细菌:细胞壁缺陷(形态多样,染色不定,可过滤,渗透压敏感,生化减弱等)

培养应高渗透压(3-5%氯化钠、20%蔗糖),琼脂浓度0.5以下半固体培养基。染色多为G

染阴性,形态不一(巨球形是特征),固定要用10g/L糅酸不能用火焰。

增殖:以二分裂、出芽、巨形体释放颗粒方式。一般菌落有:油煎蛋样(L),颗粒型

(G),丝状菌落(F),鉴定要点:染色易变多形性,生长在增菌液中微浑,颗粒样沉淀或

沿试管壁生长,返祖现象。致病特点:慢性和反复发作性感染,致病物质是毒素。L型细菌

在体内体外都可形成。原生质体与原生质球都是细胞壁缺陷的细菌。

12.细菌的突变:基因突变(又称点突变;有碱基对的置换、插入、或缺失、错码)、

染色体畸变(易位、倒位、重复、缺失)。突变:自发突变、诱发突变。质粒在细菌的自

发突变中起重要作用。细菌质粒在重组DNA技术中常用的载体。质粒的分离提纯使用酚处

理,用乙醇沉淀。

13.噬菌体一是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒,具有病毒的基本特

性,专性胞内寄生,有严格的宿主特异性。由核酸和蛋白质组成。大多数DNA噬菌体的DNA

为线状双链(有尾噬菌体的核酸);RNA噬菌体的RNA为线状单链(无尾噬菌体的核酸为环

状单链DNA或线状单链RNA)o对紫外线敏感10T5分钟失去活性。噬菌体分毒性噬菌体、

温和噬菌体(溶原性噬菌体);毒性噬菌体以复制方式增殖,过程吸附、穿入、生物合成、

成熟与释放,少脱壳。在液体培养基中使混浊菌液变澄清,在固体培养基上形成噬斑。温和

噬菌体--是噬菌体基因组整合于宿主菌染色体中,有溶原性周期、溶菌性周期。噬菌体可以

根据不同细菌的表面受体来裂解目标菌--是判定某些种类病原体的重要依据。

14.肽聚糖的结构由聚糖骨架,四肽侧链和五肽交联桥(G一无交联桥)。磷壁酸为G

+特有,分壁和膜两种。外膜层由脂多糖,脂质双层,脂蛋白组成。细胞质内有核蛋白体(蛋

白合成地),核质(主要遗传物质)质粒,胞质颗粒,是细菌蛋白质和酶类合成的重要场所。

鞭毛是由细胞质伸出的蛋白性丝状物。性菌毛仅有1〜10根,毒力和耐药质粒都能通过它转

移,有致病性。

15.免疫器官:骨髓、胸腺、脾、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾和黏膜免疫

系统。免疫细胞:淋巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜酸嗜碱性粒细胞、肥大细胞、

血小板。免疫分子:补体、免疫球蛋白、细胞因子

中枢免疫器官:骨髓、胸腺、鸟类法氏囊。外周免疫器官:淋巴结、脾和粘膜相关淋巴组织

特异性免疫:体液免疫、细胞免疫。

体液免疫:(B淋巴细胞介导,CD4*Th辅助,Th2细胞能分泌细胞因子IL-4、IL-5,

IL-6,IL-10);效应是抗体(Ab);1、病毒中和抗体(不能直接灭活病毒,IgG、IgM、IgA)

2、血凝抑制抗体(HLAb)3、补体结合抗体。

IgG在体液中含量最多,分子量小是唯一能通过胎盘的抗体。IgM分子量大,是最早产

生的抗体,中作早期诊断。IgA存在黏膜分泌液中,在局部可阻止病毒侵入,能抵抗蛋白酶

的水解作用,具局部抗体。IgE可与肥大细胞膜上的Fc受体结合。

补体C:存在血清中,不耐热,可辅助特异性抗体介导的溶菌作用,是抗体发挥溶细胞

作用的必要补充条件。由9种成份,11种蛋白组成。补体激活两个途径:传统途径(一)-

一被Ag-Ab免疫复合物IC活化,顺序Cl、C4、2C、3C、5C、6C、7C、8C、C9.旁路途径(二)

-一被细胞的脂多糖激活。补体激活--酶促级连反应。

细胞免疫(T淋巴细胞介导,效应细胞:细胞毒性T细胞(CTL)、CD4Thi细胞、CD8'

毒性T细胞CTL)。Thl细胞诱导产生迟发型超敏反应(DTH)

16.测特异性抗原最常用实验:凝集试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光试验、胶体金免

疫吸附试验

17.细菌营养转运的方式有:离子,透性酶,磷酸酶。营养物质进入机体的方式:易化

扩散、主动运转(由透性酶完成)、基团移位(糖类由磷酸酶磷酸化进入胞内,不能再透出

菌体)。

18.细菌生长繁殖的条件:充足的营养、适宜的温度、合适的酸碱度、必须的气体环境。

细菌生长的温度极限-7—90℃:嗜冷菌最适温为10〜20℃,嗜温菌为20〜40℃,嗜热菌为

50〜60℃。适宜的酸碱度PH7.2—7.6。细菌生长繁殖分为四期:迟缓期、对数期、稳定期、

衰亡期

19.(肠道杆菌)细菌的四种生化反应:口弓I口朵(I)、甲基红(M)、VP(V)、枸檬酸盐

利用(C),合称为IMViC。大肠杆菌呈++一,产气杆菌呈一++。还需做糖发酵试验,KIA产

酸产气,MIU+一一,有菌体(0)荚膜(K)鞭毛(H)三抗原。肠杆菌科分型多采用苯丙氨

酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验。可疑菌分别接种克氏双糖铁(KIA)尿素靛基质动力(MIU)来

定属。

细菌代谢所需能量主要以生物氧化作用而来。细菌新陈代谢的产物:热原质、毒素与酶、

色素、抗生素、细菌素。热原质除去的最好方法--蒸镭。内毒素(G-脂质A)、外毒素(G+

产生的毒性蛋白质产物,具有抗原性强、毒性强、作用特异性强、不耐热、人工化学可脱毒

性,0.4%甲醛脱毒后形成类毒素进行人工免疫)。据亲和性及作用靶点分为:神经毒素、细

胞毒素、肠毒素。细菌的内毒素一般由:脂质A(主要成份),非特异性核心多糖,菌体特

异性多糖。一般7〜10天后机体产生特异性免疫。IgG和IgM能在血中直接中和病毒。

热原质:脂多糖,多由G-产生,耐高温,可引起发热反应,高压蒸气灭菌(121℃20分钟)

使其破坏。

20.细胞壁的作用:承受胞内高渗压、支持细胞膜、维持细菌形态;是鞭毛运动的支点。

细胞壁的主要成份:肽聚糖(又称黏肽、胞壁质),是原核生物特有的成份,能破坏肽聚分

子结构或抑制其合成的物质,都有抑菌和杀菌作用。

G-菌细胞壁的主要成份:肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖(LPS)(类脂A、核心多糖、

特异性多糖),菌体脂多糖(LPS)能引起发热故称热原质,又称为细菌的内毒素。

细胞膜的主要功能:物质纳泄、生物合成、呼吸作用、形成中介体。

细胞质中的异染颗粒主要成份:RNA、多偏磷酸盐

21.有芽胞破伤风菌需沸水煮3h才杀死。水中加入2%碳酸钠能将沸点提到1050c又能防

止金属生锈。

22.紫外线波长265〜266nm时杀菌力最强。日光灯波长约0.5即1。

23.滤菌器用于除菌的孔径是0.22即1,另外以石棉板为滤板的金属滤器称Seitz滤器

(蔡氏滤器)按滤孔大小分K:最大,澄清用,EK-S最小,可阻止大病毒通过EK:居中,除

去一般细菌。玻璃滤菌器分G1〜G6,G5,G6两型能阻止细菌通过。

24.高压灭菌指示物:嗜热脂肪芽胞杆菌(ATCC7053),紫外线杀菌指示物:枯草芽

胞杆菌黑色变种(ATCC9372).

25.细菌遗传物质主要在于染色体、质粒和转位因子中。质粒:不依赖染色体而复制,

不相容性,转移性,指令性,大多数质粒在自然状态下是一种闭合环状双链DNA.主要有耐

药质粒,Col质粒(编码肠毒素)Vi质粒(编码细菌与致病性有关的蛋白)。转位因子为存

在于细菌染色体或质粒上的一特异的核甘酸序列可在DNA中移动,主要有三类:插入顺序

(最小的转位因子),转座子,转座噬菌体。

质粒载体具有特点:复制起点、抗菌素抗性基因、多种限制前的单一切点、较高的拷贝数

26.病毒的特性:1、只含一种核酸2、基因组复制3、缺乏完整的酶系统4、RNA病毒的

RNA经反转录合成互补DNA(CDNA)。甘油(10%)或10%二甲基亚飒的血清作悬浮细胞的

液体在液氮中保存细胞,在干冰温度(-70℃)和液态氮温度(T96℃)下长期保存其感染

性;将冻存在小管或安甑里的细胞以较慢的冷冻速率(1℃/分钟)冷冻,直至一150℃,再

将这些小管贮存在一15(k—196℃的液氮中,解冻做法是:将封口的小管迅速放入37℃的

水中,直至所有的冰融化,然后打开管口,将内容物移入培养基。PH5-9稳定;射线和紫外

线、X线、r线能灭活病毒。病毒学上常用的细胞类型:原代细胞、二倍体细胞、传代细胞。

27.超净工作台应采用层流技术净化空气、选择垂直气流通风方式。洁净度可达百

级,只保护样品。

28.菌体蛋白电离后带负电荷;而碱性染料电离时染料离子带正电。

29.染色程序及方法:制片一固定一媒染一染色一脱色一复染一水洗一干燥一镜检。

革兰染色法:初染(草酸镀结晶紫)、媒染(碘液)、脱色(95%酒精)、复染(番红)。

抗酸染色法:5%石炭酸复红、5%盐酸酒精脱色、美兰复染。

芽胞染色:菌悬液一孔雀绿一水浴15-20分钟一涂片一干燥一固定一水洗脱色一番红

或稀释石炭酸复红复染一水洗一晾干

荚膜染色:(负染色法、墨水法)。负染色法:制片(蒸储水+菌)一干燥(晾干)一

染色(复红)~水洗一干燥(晾干)一涂墨素。背景灰色、菌体红色、荚膜无色透明

鞭毛染色-一镀银法;媒染A液一10%单宁酸10ml+5ml饱和硫酸钾铝水溶液+lml苯胺饱

和水溶液+5%氯化铁水溶液成墨色。银染B液一5%硝酸银+浓氨水(比重0.88)成薄雾状。

制片(蒸储水+菌)f干燥(晾干)一染色(A液3—5分钟)一水洗f干燥(晾干)f

染色(B液稍加热分30—60秒)f水洗f干燥(晾干)。菌体深褐色、鞭毛褐色。

30.病毒吸附蛋白(VAP);血凝素(HAs)。病毒的复制周期:吸附、穿入、脱壳、生

物合成及组装、成熟和释放

31.病毒突变株分:条件致死性突变株,空斑和宿主依赖性。遗传型变异机制有突变,

基因转移,重组。突变:突变率由复制的准确度,DNA发生损伤的机会,及对损伤DNA修复

程度来决定。

32.非特异性免疫:干扰素(IFN)、NK细胞。干扰素(IFN)一具有广谱抗病毒作用,

只能抑制病毒,即通过诱导细胞合成抗病毒蛋白(AVP)发挥效应。

33.小淋巴细胞分为:T细胞、B细胞、K细胞。T细胞来自骨髓,在胸腺成熟。在人体

血液中T细胞占淋巴细胞总数的60—70%,;在胸导管则占95%以上。B细胞第一个合成产

物是u链。

34.碱基的置换:喋吟换喋吟,嗒噬换嚏噬为转换,喋吟换喀咤为颠换。影响基因表达

的因素有:调控部位,调节蛋白,效应分子。

35.转化:受体菌直接摄取供体菌提供的游离DNA片段,整合重组(与染色体重组)使

受体菌的性状发生变异。一般有链,嗜血,芽胞菌有此功能。

36.G+菌等电点pl=2〜3,G—菌等电点pl=4〜5。RNA主要存在于细胞质中占细菌干

重的10%,DNA存在于染色体和质粒中。G+菌的感受态是由感受态因子(CF)的胞外信号诱

导的。

37.转导:以噬菌体为媒介,将供体菌的基因转移到爱体菌内而致受体菌基因改变,分普

遍和局限。

38.接合:受体菌和供体菌直接接触,供体菌通过性菌毛所带的F质粒或类似遗传物质转

移到受体菌。

39.溶源性转换:是噬菌体的DNA与细菌染色体重组,使宿主遗传结构发生变异。

40.原生质融合:两种经过处理失去细胞壁的原生体混合和可发生融合后的双倍体可

发生染色体间的重组。

41.基因重组可使基因再激活表现为:交叉复活和多重复活。

42.粘附素是细菌表面的蛋白质有菌毛和非菌毛。进入宿主:黏附,定植,侵入,转归。

毒力有侵袭力和毒素。

43.侵袭力:菌体表面结构,菌毛,侵袭性酶(凝固前,透明质酸酶,链激酶,胶原酶

等)。是指病原突破宿主机体的防御功能,并能在体内定居、繁殖和扩散的能力。

45.细菌种的科学命名采用拉丁文种属双命名法,前一字为属名,名词,后一为种名,

形容词。目前国际上普遍采用伯杰分类系统,也有用CDC(USA)。目前以细菌细胞壁的结构

特点作最高一级分类依据将原核界分为薄,坚,软,疵壁四门。科,属,种分类主耍依靠生

化特性和抗原结构。

46.显微镜的分辩率为波长一半。荧光显微镜的光源为超高压汞灯(50—200W)。

47.油浸物镜的工作距离一般是0.2mm。普通光学显微镜不能观察细胞和细菌的亚结构。

相差显微镜特殊装置一一环状光阑、相板,利用光干涉现象。适用于对活体细胞生活状态下

的生长、运动、增殖情况、及细微结构的观察。用绿色滤光片。

48.不能立刻接种的血应用SPS(氯化钠溶液)抗凝。怀疑细菌性心内膜炎时血培养不

少于三次。

49.肠杆菌科的强选择(SS琼脂)弱选择(EMB,麦康凯)。

50.直接镜检2h报告,最后鉴定和药敏一般不过3天,除血外,必须在24h内预报

53.a溶血是草绿色,B溶血是透明环,Y溶血红细胞不溶解,双环。

54.细菌数量达106~107CFU/ml时培养肉汤才见混浊。

55.血培养中有105菌落形成单位(CFU)/ML时才能通过革兰氏染色检出细菌。

56.AMS系统是目前微生物鉴定中最常用的自动化仪器。

57.突变种纯系动物:实验动物正常染色体中某个基因发生了变异的具有各种遗传缺

陷的突变品系动物。

58.纯***动物:无计划随意交配的动物。近交系动物:采用兄妹交配(或亲子交配)

繁殖20代以上的纯品系动物。无菌动物:体表肠道内无菌、体内无抗体。悉生动物:给出

无菌动物引入已知的5〜17种正常肠道菌的动物。

59.小白鼠对肺链,破伤外毒素敏感,豚鼠对结核白喉易感,猫对金葡萄菌肠毒敏感。

测定病原体的感染性最好选用无菌动物或悉生动物。

60.菌种保存:“冻干”保存一稳定剂(脱脂乳、蔗糖)。冻干菌种只能使用一次,冻

干菌种打开后需要以传代保存形式保留工作菌种。冻干菌种在使用时须“复苏”且须传代才

能恢复原生长特性。低温保存:-20℃或-80℃+甘油作稳定剂。菌种取出须置于干冰或预冷

的铅质容器内,用完立即放回不可菌种解冻。冷冻干燥保存法是最有效的方法,利用各种斜

面和半固体加石蜡油是最常用和最简便的方法,一般不含糖,不用液体。

61.在细菌生长到足够量时加入抑制蛋白质合成的抗生素,在细菌停止繁殖后质粒还

在复制,可以提高质粒的收获量。

62.粪便呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂,触酶阳性,凝固酶阳性玻片法筛

选,试管法确证。必须做苯嗖西林的敏感试验。

63.真菌,霍乱,铜绿及粪碱需在室温保存,而脑膜炎,淋球,初次分离的流感嗜血菌

保存于37℃。每转种三代要鉴定一次。

65.葡萄球菌:产生脂溶性色素,多数分解甘露醇产酸液化明胶和产生血浆凝固酶。蛋

白抗原(A蛋白)种属特异无型特异,多糖抗原(A,B,C)是半抗原,有型特异。是抵抗力

最强的无芽胞菌。

66.布鲁司菌:无鞭无芽G-呈散沙状,S型有荚膜,专性需氧,抵抗力强,37°C,

PH6.6~6.8,血液、血清、肝浸液可促进生长,48小时形成微小,无色透明光滑凸起菌落。

6个种19个生物型,对人致病是羊、牛、猪种。血清凝集试验(SAT)是常用诊断实验,虎

红平板凝集试验(RBPT),补体结合试验(CFT)、免疫荧光试验(IFT)等。静脉血3—5毫

升。用肝浸液琼脂培养基、蛋白陈、土豆浸液琼脂等。动物分离一豚鼠。生化特征:分解尿

素、产生硫化氢。

诊断标准:血清试管凝集试验(SAT)1:100++以上,补体结合试验(CFT):1;10++

67.莱姆病原:伯道疏螺旋体引起莱姆病,细胞结构:原生质柱、表层、外膜、鞭毛。

微嗜氧G-,能自身合成类脂化合物、主要脂肪酸,并将喋吟碱结合到核酸中,但不能合成长

链脂肪酸,发展酵代谢产物--乳酸。婢传播媒介,鼠主要宿主动物,标本在-20—4℃运送。

标本制成悬液,暗视野显微镜20X10或40X10下检查。

病原分离:接种BSK培养基33℃培养。用兔抗B31特异性多克隆抗体进行间接免疫荧

光抗体试验(IFA),或ELISA、WB---最终确诊方法。

68.钩端螺旋体:原核细胞型微生物,双股DNA。需氧或微需氧,是致病性螺旋体中唯

一能人工培养的。其中鼠类和猪为主要的传染源和储存宿主,通过人的皮肤黏膜侵入。常用

柯夫培养基或EMJH培养基,需加入10%兔血清或牛血清,培养液透明有轻度乳光,摇动时

有云雾状混浊。G-Fontana镀银染色成棕色。对酸碱敏感,最适是PH7.2〜7.5,低于6.8,

高于7.7生长不良,最适温28〜30℃,12h分裂一次。电镜下基要本结构:柱形原生质体、

内鞭毛、外膜

标本:血液、脑脊液在发病后10天内,出现发热但未用药前,不能即时送检,血液用

不含枸椽酸钠抗凝5-20C保存,1周内接种。2周取尿液则用1%牛血清白蛋白保存,用磷酸

盐缓冲液稀释取50微升接种到5毫升培养基中每个稀释度2管,每管中先加入30微克新

霉素滤纸片或每毫升培养基加5-氟尿喀咤200-400微克。暗视野显微镜检查每周1次连5

周,阴则每月2次连4月。

病原鉴定:血清群用显微凝集试验(MAT),血清型用交叉凝集吸收试验,分子生物学

技术。

69.致病性链球菌:沉淀生长(肺链为混浊),在含腹水的培养物上生长良好,溶血株

呈絮状或颗粒状生长,不溶血株呈均匀混浊生长。

(-)化脓性链球菌:标本1天内送,不超过2天。THB增菌肉汤、5%脱纤维羊血的胰

酶消化大豆琼脂培养基,血液和脑脊液应先增菌后接种平板,脓液、咽拭子直接种于血平板。

A群链对杆菌肽敏感青霉素G为首选,抑环>10cm敏感。(90%对人致病)

B群链CAMP试验阳性(鉴定指标35℃卵育),马尿酸钠水解试验阳性

D群链七叶甘水解试验变黑色为阳性,6.5%氯化钠生长试验(黄色)

快速检测:酶标免疫测定法、PCR(A群链致热外毒素A,B,C基团speA,speB,speC各

溶血素0基团si。)。抗溶血素0抗体--溶血法、胶乳凝集法。

(二)肺炎链球菌:37.5℃pH7.4—7.6初次C02卵育,在含3%〜5%的兔血清中生长

良,血平板上草绿色a溶血环。如G+具有矛头状双球菌可初步诊断。培养时间过长会自溶

管底澄清,以奥普托欣试验、分解菊糖,胆汁溶菌阳性区别于甲型溶血性链球菌。主要抗原

有:蛋白质抗原、多糖抗原、核蛋白抗原。胆汁溶菌试验一0.5ml生理盐水细胞悬液制成相

当于0.5麦氏单位的密度标准。

取细胞悬液0.25ml+0.25ml2%的脱氧胆酸35—37℃培养2小时,管液清澈或浊度消失为阳

性。

氨基糖首类合用,B溶链致病性最强,a溶链为条件致病菌。几乎所有的肺链对Optochin

敏感。

(三)猪链球菌:人感染致病:脑膜炎、心内膜炎、败血症、中毒性休克。35个血清型。

2型致病其属于R群,属特异基团tuf、种特异基团16SrRNA

70.肠球菌属:能在高盐(6.5%NaCl)高碱(pH9.6)40%胆汁培养基上和10〜45℃

生长,是G+菌中仅次于葡萄球菌的重要院内感染病菌。临床上分离最高的是粪肠球菌,可

分庆霉素高耐药和低耐药,一般用内酰胺类和氨基糖昔类联合。

71.脑膜炎奈瑟菌:脑液中位于中性细胞内,大多能分解葡萄糖、麦芽糖,产酸不产气,

具有氧化酶和触酶。能产生自溶菌不宜冰箱应立即保温送检,冬末春初为流行高峰,青霉素

G为首选。依据荚膜分13个血清型,主要是ABC三个血清型及W135、Y。通常采3管脑脊液

(化学、微生物、细胞学)含添加剂的巧克力平板(CAP)和血琼脂平板(BAP),如不能立

即接种,,则接种至预热35℃的转运一分离(TI)培养基中保温通气,可保存7天,血液采

集后1分钟内注入肉汤中。

镜检:脑脊液2000r/min离心20分钟,沉淀物镜检脑膜炎双球菌常在多核白细胞内或

细胞外。病原鉴定:Kovac氧化酶实验10秒内呈紫色阳性反应。

快速检测:乳胶凝集试验测抗原。上清液可一20度冻存长时间。

72.淋球奈瑟菌:G-人类是唯一天然宿主和传染源。不耐干燥,35—36℃,2.5—5%C02

生长,最适PH7.5,对糖类生化最低只能发酵葡萄糖,主要有菌毛蛋白,脂多糖,外膜蛋白抗

原。细菌培养是目前世卫推荐的唯一方法,用培养法查女病人宫颈口表面分泌物。培养基中

应含万古霉素、多粘菌素B。标本接种在巧克力血琼脂平板或T-M培养基。急性期淋病菌常

在白细胞内,慢性期淋病菌常在白细胞外,在中性粒细胞内有G-性双球菌具有诊断价值。

73.梅毒病原:菌体形似弹簧,运动活泼,两端尖直,有细胞壁和膜,原生质圆柱体且

有3-4根周浆鞭毛,G-抵抗力极弱,对青霉素、四环素、红霉素、碎剂敏感。

标本:I期梅毒取下疳渗出液(20分钟内查);H梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴结抽

出液;先天性梅毒取脐血;神经梅毒取脑脊液。

镜检:新鲜标本加盖片暗视野显微镜下检查,浆液不能含有红细胞、微生物、组织碎片。

荧光标记、ELISA普光下查,镀银染色螺旋体染成棕褐色光镜下查。

病原分离:人工培养基上不易生长,接种兔睾丸或眼前房内繁殖,并能保持毒力•34-

35℃,分裂为30-33小时。

抗体检测:产生特异性抗体、反应素抗体(表面脂质引起),有非密螺和密螺抗原试验。

初筛试验和疗效观察--非密螺抗原试验,正常牛心肌心脂质为抗原测患者血清中反应素,

判断是否复发及再感染。最常用VDRE、RPR试验。VDRE以胆固醇为载体。玻片凝集可定性

和半定量,低倍观察。RPR用未处理活性炭颗粒吸附VDRE抗原。专用纸片圈内(18mm)可

定性和半定量。

密螺抗原试验(证实试验)--FTA-ABS作为诊断梅毒“金标准”试验。它是间接荧光抗

体检测方法,

75.肠产毒型(ETEC):作用小肠,霍乱样肠毒腹泻,是5岁以下婴幼儿和旅游者腹泻

的重要病原菌;肠毒素有耐热和不耐热,LT-I是引起人类主要的致病物质,对热不稳定,

65C30分钟被破坏,A亚单位是毒素的活动部位。耐热肠毒素(ST)是通过激活肠黏膜细胞

上的鸟甘环化酶,使胞内CGMP量增多而导致腹泻。

肠致病型(EPEC):作用小肠,水样腹泻,是婴儿腹泻主要病原菌。

肠侵袭性型(EIEC):作用大肠,志贺样腹泻,很像菌痢,发热腹痛脓血便及里急后重。

肠出血型(EHEC):其中0157:H7可引起出血性腹泻和溶血性尿毒症,是4岁以下儿童

急性肾功能衰的主要病原,6、7、8三月最高,北美多见。毒力因子:志贺样毒素、溶血素、LEE

毒力岛、Vero毒素。

肠集聚型(EAggEC):婴儿和旅游者腹泻持续性水样腹泻。

76.志贺氏菌分:痢疾(A群),福氏(B群),鲍氏(C群)(半透明、光滑型菌落),

宋内(D群)(扁平粗糙型菌落)四群,我国以福氏和宋内常见,无荚无芽无鞭,KIA:K/A,

产气+/一,H2S-,MIU-+/一一,最后可用诊断血清作群型鉴定

群血清型葡萄糖乳糖甘露醇鸟氨酸脱竣酶

痢疾志贺菌A1-10+---

福氏B1-6+-+-

鲍氏C1-18+-+-

宋内D1+-++只有一个血清型,I相和II相

加热60C10分钟杀死,有强烈的内毒素,作用于肠黏膜,使其通透性增高。粪-口传播,

只局限于肠道,一般不进侵入血,发热、腹痛、水样腹泻,后转为脓血黏液便,伴有里急后

重、下腹部疼痛。急性中毒性痢疾多见小儿。粪便不能即时送检,需保存在30%甘油缓冲盐

水中。志贺菌表达黏附、穿透上皮细胞、胞内繁殖、及扩散等活性的基因存在于大质粒上。

测志贺菌的侵袭力用Sereny试验,接种于豚鼠眼结膜囊内。

快速诊断:1、免疫染色法2、免疫荧光菌法3、协同凝集试验4、胶乳凝集试验5、分子生

物学方法

77.伤寒与副伤寒菌:无芽无荚有鞭毛(除鸡沙门)多数有菌毛,112s可阳性,伤寒菌

产酸不产气,菌体抗原有58种,鞭毛抗原有两相即特异性和共同,表面抗原有Vi,M,5三

种,变异有:S-R,H-0,v-w,相位。

伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌。所致疾病4类型:

(1)、肠热症:第一次菌血症,发热、不适、全身痛,与菌的感染剂量有关,通常潜

伏期为2周,第二次菌血症,高热7-10天,缓脉、肝脾肿大,皮肤出现玫瑰疹,外周白细

胞明显下降,严重者有出血或肠穿孔等并发症。

(2)、胃肠炎(食物中毒):由摄入大量>108被鼠伤寒沙门菌(常引起食物中毒)、

猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌污染的食物引起。致病机制:细菌释放的内毒素。发热、恶寒、

呕吐、腹痛、水样腹泻。

(3)、败血症:4、无症状带菌者:

标本:第1-2周采血,接种于室温>20℃平衡血培养瓶,不能超过2小时送样,不能即

时送样放在室温,切勿放冰箱;第3-4周取粪便;第3周起还可取尿液;整病程均可取骨髓

液。

病原分离:血液和骨髓须按1:10加入血液需氧培养瓶或胆盐葡萄糖肉汤增菌后接种于

血琼脂平板或营养琼脂平板,SS一双糖或三糖铁(TSI)培养基。粪便接种麦康凯(MaC)/DHL、

SS平板上,或SF增菌。

病原鉴定:凡符合克氏双糖铁(KIA)斜面或三糖铁(TSI):不发酵乳糖、蔗糖,发酵

葡萄糖、麦芽糖甘露醇,产气+/一,H2S+,n引跺尿素V-P均一,硝酸盐还原阳性,多价血

清阳性的为沙门属。尿素酶试验与变形杆菌区别。胞内寄生菌,临床上主要为不明原因持续

发热。尿素半固体(MIU)。A-F群沙门菌(0)多价血清作玻片凝集,阳性则选用02、04、

07、09因子定群。

血清学诊断:肥达试验,一般伤寒沙门菌0凝集效价>1:80、H>1:160,副伤寒H>

1:160具有诊断意义。新一代疫苗:伤寒Vi荚膜多糖疫苗。

78.变形杆菌属:普通,奇异,产黏。普罗威登斯属有:产碱,斯氏,雷极,摩根菌只

有摩氏摩根菌。有明显多形性,呈球状或丝状,生长于10〜43℃,在固体培养基上普通和奇

异呈迁徙生长现象,三属氧化酶阴性,苯丙氨酸脱氨酶阳性G-杆菌,加入1%石炭酸或苯乙

醇使终浓度为lg/L和0.25%可抑制变形菌迁徙样生长。能迅速分解尿素以区别沙门菌,外

斐试验辅助诊断立克次体

79.耶尔森氏菌(鼠疫):有7种,鼠疫,假结核,小肠与致病有关。带有3种质粒,

主要的致病决定基因由质粒和染色体上的毒力岛编码。

鼠疫耶尔森:有荚无芽无鞭,两极浓染,28〜30℃,pH6.9〜7.1,液体中培养好,底部

可有钟乳石样,常用1%溶血的胰酶消化肉琼脂(赫氏琼脂)加入亚硫酸钠或脱纤维血有刺

激生长,用腐败材料分离,培养基中加入甲紫、胆酸钠抑制杂菌,龙胆紫亚硫酸钠为其选择

性培养基,3%氯化钠上生长呈多形性。

小肠耶尔森:无动无芽无荚G-,25℃有动力,有周鞭毛,最适温20〜28℃,VP试验

25℃阳性,37℃阴性,KIA只利用葡萄糖,MIU22℃动力阳性37℃阴性。假结核:25℃有周

鞭毛有动力37℃无动力,最适温30℃,pH6〜8。血清检测的抗体是F1

经典鼠疫“四步检验”:显微镜检查(美兰染色)、培养、鼠疫噬菌体裂解试验(早期

为暗黄的灰色表面粗糙的颗粒样突起,在血培养上有花边状薄而透明不整齐的边缘菌落。48

小时为灰白色中央突起菌落,)、动物实验(小鼠、豚鼠)。

快速检测;PCR(高度特异性基因:fra、pla、inu、hms)、免疫检测(Fl抗原)

所有疑似鼠疫病人都需采取血标本,疑似腺鼠疫病人取肿大淋巴结穿剌液;肺鼠疫病人

取咳痰、咽拭子标本。

80.枸檬酸杆菌:有弗劳地,异型,无丙二酸盐。只有弗劳地靛基质一,H2S+,仅异

型的丙二酸盐+,B-半乳糖甘酶,赖氨酸脱竣酶,枸檬酸利用三试验:枸檬酸菌+一+,

沙门―/+++,爱德华一+一。

81.胶体金标记技术应用领域:免疫层析技术。其优点--标记物非常稳定。

82.细菌明胶液化试验原理--某些细菌产生胞外酶-明胶酶,能使明胶分解为氨基酸而

液化。

氧化酶试验一用于肠杆菌科与假单胞菌的鉴别。胆汁溶菌试验一用于肺炎链球菌与甲型

链球菌鉴别

0NPG试验一迟缓分解乳糖的细菌试验为阳性。

83.沙雷菌:最适温10〜36℃,4%氯化钠下可长,产生灵红霉素(非水溶)和毗段酸

(水溶),关键生化是DNA+和葡萄糖酸盐十。

85.霍乱菌:呈弧状或逗点状,米由样粪便作悬滴观察,细菌呈穿梭样或流星状运动;

粪便涂片镜检见排列如“鱼群”状G一菌,耐碱不耐酸,可繁殖pH6.0-9.2。最适宜生长pH7.2-

7.4。血清分型可分为AB的小川型,AC的稻叶型,ABC的彦岛型

病原分离:水样便直接接种在硫代硫酸盐一柠檬酸盐一胆盐一蔗糖平板(TCBS)上37℃

形成较大黄菌落,在含亚硫酸钾或庆大霉素平板选择性平板上呈灰褐色。食品及水样常用碱

性蛋白陈水增菌培养后再接种,钠离子可剌激生长,但在>8%NaACI中不生长。常用的保存

或运送及增菌用碱性蛋白陈水,文-腊二氏,卡-布。

病原鉴定:01群无芽胞,无荚膜,单一鞭毛;0139群菌体周围有一层比较薄的荚膜。

测定耐热的特异性0抗原,用玻片凝集或ELISA鉴定,血清效价1:40T:50。不耐热的

非特异性H抗原,有两个环状染色体,即染色体1、染色体2。

深入鉴定:流行株与非流行株依靠噬菌体--生物分型法。噬菌体(VP1-VP5)将埃尔托

型霍乱弧菌分成32个噬菌体型。根据溶原性、溶原噬菌体的敏感性、山梨醇发酵试验、溶

血试验,将埃尔托型霍乱弧菌分成a-1共12个生物型。常见的流行株为噬菌体1-3型,生

物型a-d型,常见的有:la、lb、Id。产毒基因鉴定:用PCR检测ct基因,流行株常带有

霍乱肠毒素。

免疫检测:霍乱为肠为非侵袭性细菌,主要剌激局部黏膜产生分泌性AgA抗体,同时大

量毒素及细菌脂多糖体的产生使机体产生抗毒和抗菌抗体。

恢复期带菌者是指临床症状消失后3个月内带菌者,恢复期带菌的时间一般不超过2

周,健康带菌者的排菌时间一般不超过7天。

86.副溶血弧菌:嗜盐性弧菌(与霍乱显著区别),是我国沿海地区最常见的食物中毒

病原菌,两极浓染,NaCl最适35g/L,无盐不长,pH7.0~9.5,最适pH7.7,不耐热,不耐

酸,在TCBS上不发酵蔗糖菌落绿色,>80g/L盐内不长,神奈川现象(B溶血),KP'是致

病株能使人或兔红细胞发生溶血对马红细胞不溶血为阳性。

87.气单胞菌最适生长温度30℃,但在0〜45℃皆可生长。

88.弯曲菌属是一类微需氧菌,不分解糖,氧化酶+,菌体弯曲逞豆点状,S状或螺旋

状有动力G—菌,5种5亚种,对人致病的主要是空肠弯曲菌(人类腹泻最常见之一,43C

生长,25℃不生长)

89.幽门螺杆菌(HP):常用布氏培养基或脑心浸液血琼脂加入5〜10%羊血和马血,

在(85%N、10就02、5%02)条件下,37℃3—7天,长成针尖状的半透明菌落,加入万古霉素、

TMP、两性霉素B等组成抑菌剂防止杂菌生长。与十二脂肠溃疡、胃癌、胃淋巴瘤发病有关。

传染源主要是人,粪-口途径。标本:胃黏膜活检组织;

病原鉴定:生物特性是具有大量高活性的尿素酶,迅速分解尿素,氧化酶+、触酶+,

具有碱性磷酸酶、r-谷氨酰转肽酶活性,硝酸盐还原+,可生长于5%甘氨酸、0.04%氯化三

苯四氮嚏培养基中,三糖铁中不产生硫化氢,微需氧5〜8%,37℃生长,25℃和42℃均不生

长的G-菌,初次分离要3〜4天。

快速检测:尿素呼吸试验--简单快捷,可以特异地诊断HP现症感染,敏感性高。主要

采用13C、14C(放射性同位素)标记尿素,13C用于儿童和孕妇。

90.《伯杰系统细菌学分类》的标准:G染特性,形态,鞭毛,芽胞,荚膜,代谢产物。

91.有芽胞的厌氧菌:只有梭菌属包括83个种。厌氧菌每克粪中高达1012个,标本

绝不能被正常菌污染,应尽量避免接触空气。最理想的标本是组织,送到实验室后20〜30min

内处理完不超过2h。应接种固体和液体两种培养基,应使用预还原培养基,液体培养基应

煮沸lOmin以驱氧并立即冷却。每份标本至少接种三个血平板,置于有氧,无氧,5%~10%C02

环境中培养。厌氧手套箱培养法是迄今最佳厌氧培养仪器之一。

92.厌氧状态的指示剂有:美蓝和刃天青,无氧时白色,有氧时美蓝蓝色,刃天青粉红

色。紫外线下出现荧光也是厌氧菌参考之一,卡那霉素用于梭杆菌与类杆菌的区分,甲硝噪

用于厌氧菌和非厌氧菌的区别。气液相色谱已成为鉴定厌氧菌及其分类比较可靠的方法。

93.破伤风杆菌:鼓槌状,早期培养G+,48h后特别是芽胞形成后G-,的0和H抗

原,主要症状为骨骼肌痉挛,不发酵糖类,能液化明胶产H2S。产生两种外毒素:破伤风溶

血素、破伤风痉挛毒素

94.产气荚膜梭菌:G+,20〜50℃均能生长,最适为45℃,双层溶血,可分解糖类

产酸产气,出现汹涌发酵现象,分5型,主要是A型,外毒素以A毒素为主,本质是卵磷脂

酶(a毒素),在蛋黄琼脂平板上菌落周围出现乳白色浑浊圈。所致疾病为气性坏疽,有捻发

感,青霉素为首选,万古为次选。

95.肉毒梭菌:G+,芽胞胶囊于次极端呈汤匙状或网球拍状,严格厌氧,8型,以A,

B多见,毒素不耐热,Imin煮沸即死。

96.无芽胞厌氧菌是一大类正常菌群,引起感染是内源性感染。

97.白喉棒状杆菌:为放线菌,G+,无荚无芽无鞭无毛,奈瑟(Neisser)染色成黄褐

色,一端或两端染成蓝色或深蓝色颗粒即异染颗粒,阿培特(Albert)染色菌体呈蓝绿色,

异染颗粒成蓝黑色。

分离培养:棉拭子取咽喉部、鼻腔、皮肤病变部位,血平板,吕氏血清斜面(生长迅速,

乳白色,S型,形态典型),哥伦比亚血培养基及亚硅酸钾血琼脂(48小时以上,菌落黑色,

筛选鉴别)。白喉毒素是一种毒性强、抗原性强的蛋白质,B-棒状杆菌噬菌体毒素基因(tox+)

编码的蛋白质,PCR扩增tox+基因辅助诊断不能确诊。免疫沉淀试验(EleK平板试验)检

测产生白喉外毒素,是诊断白喉的关键试验。细菌一般不侵入血,但外毒素可入血引起毒血

症,不能立即送检时应浸于无菌生理盐水或15%甘油盐水中。出现各种心肌炎,软腭麻痹是

白喉晚期死亡的主要原因。(白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤风类毒素的混合疫苗DPT)

98.百日咳鲍特菌:专性需氧,常用包-姜培养基(含青霉素G)细小S银灰色不透明

珍珠状菌落,在加血培养基上,周围有放毛状狭窄溶血环,液体培养基中混浊生长。菌落常

S-R相变异,I相S型,H、m相过渡型,IV相R型。有百日咳毒素,丝状血细胞凝聚素和

腺喋吟环化毒素。细菌不进入血流。临床分为3个期:1、卡他期2、痉咳期3、恢复期。依

据菌落性状及凝集试验确诊。抗原有PT、FHA,主要用ELISA方法。可获持久免疫力

咳碟法:包-姜培养基(含青霉素G)置10cm使飞沫直射于培养基上,37℃2-3天

鼻咽拭子法:如不能及时接种可放入0.3毫升PH7.2-7.4的斑蛋白陈生理盐水中2小

时内检

99.TBE-Tris硼酸缓冲液,长时间电泳选用。MIO最小抑菌浓度

101.决定细菌的形态因素:培养基的成份、PH、培养时间、温度。直接观察细菌的超

微结构:超薄切片技术、电子显微镜。

102.芽胞:在80℃水中迅速死亡,在100℃水中能耐受2小时以上,在70%乙醇中能

存活20年。高压蒸气灭菌杀死细菌牙芽胞最有效。荚膜的重要功能:抗吞噬。是构成细菌

毒力的因素之一。

卫生毒理学

1.外源化学物在体内的生物转运:吸收、分布、代谢、排泄四阶段。

化学毒物在体内的代谢分为两相:I反应-一氧化、还原、水解;I[反应--与体内源性

物质结合

亚慢性毒性试验目的:最大无作用剂量、最大耐受剂量估测阈剂量。(选用两种种属及

啮齿类、非啮齿类,初断乳动物)

慢性毒性试验目的:最小有作用剂量、阈剂量、最大未观察到有害作用剂量(选用两种

种属及啮齿类、非啮齿类,初断乳动物)

危害性评价组成:认定、描述、接触评定、特征分析

毒理学试验项目:第一阶段:急性毒性试验。第二阶段:遗传毒性试验。第三阶段:亚

慢性毒性试验。第四阶段:慢性毒性试验和致癌试验

GB19489-2004《实验室生物安全通用要求》分级:危害等级I、II、III、IV。

生物安全防护水平(BSLT、2、3、4)»

生物安全柜一级:可保护工作人员和环境。生物安全柜二级:分Al、A2、Bl、B2可保

护工作人员、环境、样品。生物安全柜三级:

2.普通光学显微镜:最高分辨率0.2um,不能观察细菌的亚结构

3.暗视野显微镜:分辨率0.02-0.04um,载玻片厚度1.0mm、盖玻片0.17mm

4.荧光显微镜:

5.滴定管精度为0.2-0.1ml,微量滴定管精度为0.005ml。微量吸管5—lOOOuk培养

皿分:5^7.5、9、10cm

蛋白质、核酸提取及相关设备

一、蛋白质分离纯化一一实验室常用盐析法(硫酸镀).

核酸纯化一一酚、氯仿抽提

制备细胞外膜蛋白一一超声波细胞粉碎机。

大多数限制内切酶使用温度37℃,保存温度是-20℃。

二、层析

凝胶过滤法(分子筛层析法)--主要用于蛋白或核酸分离。介质:葡聚糖。过滤中先

洗脱的是大分子物质,后小分子物质。原理:纤维素或凝胶介质带电荷不同。

三、检测仪

1、分光光度计及检测物质

分光光度计波长nm比色皿

检测细菌浓度可见分光光度计600玻璃

测定颜色可见分光光度计450

检测蛋白紫外分光光度计280石英

检测核酸紫外分光光度计260石英

2、紫外透射仪:暗室紫外线下看DNA条带。

3、测序仪:蛋白测序仪-一测定氨基酸排列顺序

DNA测序仪——测核甘酸排列顺序。物质是;质粒、噬菌体、PCR产物

4、扩增仪:能做PCR称DNA扩增数

5

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