HPLC法测定甲磺酸中的基因毒性杂质

高效液相色谱法测定甲磺酸中的基因毒性杂质目录CONTENT科学价值01创新价值02实用价值03成果效益0432007年夏天甲磺酸奈非那韦（抗艾滋病药），

因被检出过量的甲磺酸乙酯，被迫从欧洲市场召回，经调查该杂质来自起始原料——甲磺酸。畅销药

联用质谱法灵敏度高，但仪器昂贵，对环境和人员要求高，方法来源样品目标物检验方法国内外文献药品甲磺酸酯类液相/气相色谱-

质谱法欧洲药典8.0甲磺酸甲磺酸甲酯

甲磺酸乙酯提取-气相色谱-

质谱法4不利于药厂质检的常规应用。科学价值5我们开发简单、灵敏、耐用的衍生化-高效液相色谱-紫外法专属性甲酯/乙酯衍生物达到良好分离灵敏度检测限0.2ppm定量限0.6ppm精密度日内<5.0%日间<7.0%溶液稳定性0~8h内稳定线性范围0.6~100ppm准确度回收率80~115%创新价值方法验证结果表明：本法能可靠检测甲磺酸中的甲酯、乙酯。6创新价值欧洲药典方法我们的方法称取样品↓

+水-乙腈稀释↓+氢氧化钠中和

↓+衍生化试剂、溶剂

↓衍生化反应↓液相色谱-紫外分析称取样品↓

+水稀释↓+内标溶液萃取↓分出有机层↓脱水、过滤

↓气相色谱-质谱分析二甲基乙酰胺二乙基二硫代

氨基甲酸钠、80℃1h甲磺酸异丙酯二氯甲烷无水硫酸钠7创新价值我们的方法耗材成本欧洲药典方法耗材成本二乙基二硫代氨基甲酸钠0.0004元二氯甲烷0.2040元二甲基乙酰胺0.5500元甲磺酸异丙酯0.3375元氢氧化钠0.0017元无水硫酸钠0.0046元乙腈(流动相)1.2190元高纯氦气(载气)0.6000元液相色谱仪10~20万元气质联用仪100~250万元两种方法成本简单比较（1份样品为例）

本法衍生化反应的试剂成本与欧洲药典方法持平，但仪器购置费不超过欧洲药典方法的1/5。8创新价值乙酯甲酯两种方法3批甲磺酸中杂质测定结果比较甲酯ppm批1批2批3我们的方法549.310.761.47欧洲药典方法513.340.581.68乙酯ppm批1批2批3我们的方法未检出106.8未检出欧洲药典方法未检出95.51未检出

3批检测结果与欧洲药典方法接近，说明本法能用于药厂QC检测甲磺酸中的甲酯、乙酯。9创新价值衍生化用衍生化反应引入特征基团无紫外检测特征基团由于亲硅醇效应导致衍生化产物峰形拖尾。前者易氧化，后者衍生化副产物多，影响色谱分离情况。常作金属离子衍生化试剂，未有报道用于甲磺酸酯测定。叔胺哌啶五氟硫酚硫氰酸盐二乙基二

硫代氨基

甲酸钠创新价值1011本法采用二乙基二硫代氨基甲酸钠作衍生化试剂，对它的浓度、溶剂种类及比例、溶液酸碱度、反应温度、色谱条件等因素进行了研究。创新价值12时间（min）乙腈（%）5mmol/L乙酸铵水溶液（%）06040166040218020268020276040346040色谱柱：Intertsustain®C18，4.6μm，4.6×250mm；柱温：30℃，检测波长：277nm；进样量：20μl，流速1.0ml/min；流动相：乙腈-5mmol/L乙酸铵水溶液，洗脱程序如下色谱条件创新价值我国甲磺酸原料药生产厂74家甲磺酸供需双方

产品检验实用价值方法验证——PASS结果比较——PASS我们方法的

可行性降低成本为企业节约仪器购置费、运行费、培训费。优化策略提供了药品基因毒性杂质控制的优化策略。14实用价值我们的方法

推荐给合作单位，

为其新药中甲磺酸酯杂质控制提供帮助。成果推广成果效益

开展系列衍生化试剂

研究