精液品质检查案例

精液品质检查案例犬精液品质检查案例

某养犬基地饲养各种名犬50多只，周边养犬爱好者较多，该场老板希望开展犬的人工授精。既满足养犬爱好者的需求，又能增加收益。于是联系我院宠科系老师，能够帮助他把犬的人工授精开展起来。因此，我们按照犬人工授精的操作程序，进行第二步：犬的精液品质检查。精液品质检测仪一、精液的感官检查

采精量：将采取的精液倒入带有刻度的试管或集精杯中，测量其容量。一般情况下狼种犬的射精量为10.0～13.0ml，第二段精液量平均为3.8ml。色泽、气味：正常雄犬精液的颜色为乳白色或灰白色，略带有腥味。云雾状：犬的精液在静止状态下与牛羊等动物的精液不一样，不呈现翻腾滚动的云雾状态。精液外观二、精液密度

也称精液浓度，指精液的单位容积（通常是1ml）内所含有的精子数目。也是评定精液品质的重要指标。通常犬每毫升精液中精子数为1.25（0.4～5.4）亿个。1.估测法一般在显微镜下进行。这种方法方便易行，是生产中最常用的测定方法。2.计数法检测精子密度的方法，也可用血细胞计数器计数。精子密度的计算，可用下列公式：1ml精液中精子密度=5个方格内的精子总数×5×10×1000×稀释倍数3.光电比色计测定法是目前用于评定精子密度的一种较准确的方法。精液品质检查精子密度检查精液质量检查三、精子活率

是指精液中呈直线运动精子所占的百分率。精液采出后立即在35～37℃的温度下进行精子活力测定。精子的活动有三种类型，即直线前进运动、旋转运动和原地摆动运动。评价精子的活力是根据直线前进运动精子数的多少而确定的。目前大多采用十级评分，在显微镜视野中估测呈直线前进运动精子占全部精子的百分率，以公式表示：精子活力=直线前进运动精子数/总精子数×100%正常精液的精子活力应在0.7以上。精液活力检查四、精子畸形率

形态和结构不正常的精子称为畸形精子。精子的畸形率是指精液中畸形精子数占精子总数的百分率。畸形精子有各种各样，按其精子形态结构一般可分为三大类：头部畸形、颈部畸形、尾部畸形。畸形精子检查方法：取一滴被测精液（精子密度大的精液需用生理盐水稀释）于载玻片上，将样品滴以拉开的形式制成抹片。用0.5%龙胆紫酒精溶液或蓝墨水染色3min，自然干燥、水洗后即可镜检。查数不同视野的300个精子，计算出其中所含的畸形精子数，求出畸形精子百分率。一般情况下，狼种犬精子畸形率为17.2%左右。正常与畸形精子类型图1．正常精子2．游离原生质滴3．各种畸形精子4．头部脱落5．附有原生质滴6．附有远测原生质滴7．尾部扭曲8．机体脱落五、精子顶体异常率

顶体异常：一般表现为顶体膨胀、缺损、部分脱落、全部脱落等情况。精子顶体异常率为精液中顶体异常的精子数占精子总数的百分率。顶体完整型：精子头部外形正常，细胞膜和顶体完整，着色均匀。顶脊、赤道段清晰、核后帽分明。顶体膨胀型：顶体着色均匀，膨大呈冠状，出现明显条纹。头部边缘不齐，核前部细胞膜不明显或部分缺损。顶体缺损型：顶体着色不均匀，顶体脱离细胞核，形成缺口或凹陷。顶体全脱型：赤道段以前的细胞膜缺损，顶体已经全部脱离细胞核，核前部光秃，核后帽的色泽深于核前部。

精子顶体异常图1．正常顶体2．顶体膨胀3．顶体部分脱落4．顶体全部脱落

精子顶体异常率是评定新鲜或冷冻精液品质的重要指标之一。检查方法是：将被检精液制成精液抹片，自然干燥2～20min，以1～2ml的福尔马林磷酸盐缓冲液固定。对含有卵黄、甘油的精液样品需用含2%甲醛的柠檬酸液固定，静置15min，水洗后用姬姆萨染液染色90min或用苏木精染液染色15min，水洗、风干后再用0.5%伊红染液复染2～3min。经上述染色后，再水洗、风干后置于1000倍显微镜下用油镜观察，或用相差显微镜观察。采用姬姆萨染液染色时，精子的顶体呈紫色，而用苏木精-伊红染液染色时，精子的细胞膜呈黑色，顶体和核被染成紫红色。每张抹片必须观察300个精子，统计出精子顶体完整率。六、精子存活时间及存活指数

精子存活时间是指精子在一定条件下（稀释液、稀释倍数、保存温度和方法等）的总生存时间，而精子的存活指数是精子存活时间和精子活力两种指标的综合反映，它是反映精子活力下降速度的标志，指数大说明活力降低慢，反之则快。

检测精子存活时间时，将精液样品每隔48h抽样，在37～38℃中镜检精子活力，直到精子全部死亡或只有个别精子呈摆动活动为止。具体方法是由第一次检查时间至倒数第二次检查之间的间隔时间，加上最后一次与倒数第二次检查时间的一半，其总和时间即为精子存活时间。每相邻前后两次检查的精子平均活力与其间隔时间的乘积相加的总和（无计量单位）即为精子存活指数。七、精液的细菌学检查

目前国内外都十分重视精液的微生物检验，精液中含有的病原微生物及菌落数量已列入评定精液品质检查的重要指标，并作为海关进出口精液的检验项目。方法是：取溶解后的10ml普通琼脂冷却至45～50℃，加入无菌脱纤维血液5～10ml，混合均匀，倒入灭菌平皿内，置入37℃恒温培养箱内1～2d，确认无菌后方可使用。

将样品用灭菌生理盐水10倍稀释，取0.2ml倾倒于血琼脂平板，均匀分布，在普通培养箱中37℃恒温培养48h，观察平皿内菌落数并计算每剂量中的细菌菌落数，每个样品做两个，取其平均数。计算公式：每剂量中的细菌数=菌落数×取样品量的倍数例如：0.25ml细管中的细菌数=菌落数×12.5（取样品的倍数）精液中不应含有病原微生物，每毫升精液中的细菌菌落数