修改题目酿酒酵母全蛋白的

内容 关键词… ……………………………11．绪论………………1酿酒酵母及其蛋白… 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术… 实验内容… 菌体培养… 酿酒酵母全蛋白的分离—SDS电 胶内酶解质谱鉴定 结果分 酵母全蛋白的鉴定方 从质谱数据鉴定多肽 结 参考文献 :酿酒酵母作为一种理想研究模型，其全蛋白提取方法多样,本文采用：Asanidealresearchmodel,theextractionmethodsofSaccharomycescerevisiaearevarious.Thisarticleusesthecrushingglassbeadtoextracttheprotein,andapplygelelectrophoresistoseparateitandthentomakeamassspectrumidentification.Thedimensionalelectrophcresisisapowerfulandwidelyusedmethodfortheysisofcomplexproteinmixtureextractedformcells,tissues,orotherbiologicalsamples.Thismethodisbasedonthetwocharacteristicsofproteinunrelated-isoelectricpointandmolecularweightofproteinseparation.Itshighresolution,goodstability,isoneofthekeyofproteomicsysis.Proteomicsisthelargescalestudyofproteins,usuallybybiologicalmethod.:Saccharomycescerevisiae；gelelectrophoresis；Proteomics；的。酿酒酵母更是世界上第一个被测出组DNA均一的电荷密度、相同的荷质比。据流体力学等方面的研究推测,SDS一蛋白质复合取决于三个方面,即带电荷的多少、分子量的大小和分子的形状。[4根据上面的分析,SDS总体来说，双向电泳操作按如下几个步骤：样品准备（蛋白提取除杂、溶解→蛋白含量测定及样品分装→SDS2[5]26-20比来对该多肽进行分析,以判断该多肽源自哪一个蛋白。[}待检样品与含有在特定波[]此激活产生的能量作用于多肽,使之由固态样品混合物变成气态。由于多肽分子倾向于吸收单一光酿酒酵母菌，YPD12%，2%。酵母细胞接种于5mlYPD液体培养基进行培养，220r/min，30℃培养20h。取1mL菌液转接100mLYPD，220r/min，3027h，OD600=1.260s将样品煮沸10min，在冰上冷却后，加入裂解液在冰中振荡1h，6000r/min离心10min595nm处的吸光值来检1ul.2ul.4ul6ul8ul10ui2ul的泳道胶的清晰度以及分离度最合2ul2ulsimplebullfer配成样品。。蛋白组分析的样本多为多种蛋白的混合物.而用于蛋白鉴定的质谱检测仪只能对多肽进行检测及鉴定.因此在进行质谱分析之前须将这些蛋白混合物分离为单一态电泳成为蛋白组分析的代名词，而且它一直是分离高度复杂的蛋白混。100(宽)x120(高)x1.5(厚)毫微量进样器:10～10030050(4)1SDS%：0.8%Acr:4*Tris-Cl/3.75mL1.25mL20%5μL分离凝胶的浓度应根据所测定的蛋白质分子量的大小选择,据文献查阅已知分离胶方法按照上面的配比配成溶液后即将胶液沿胶室的玻壁缓缓地注入已准33～5垂直静止聚合30分钟左右。按照上面的配比浓缩胶，然后立即将胶注入已聚合31厘米,聚合约需30分钟。胶聚合好后,地取出样品槽模板。样品槽中加入电极缓冲液，供点样用。2ul立即进行电泳。初电压控制在30～45伏特,当指示Simplebuffer进入分离120V,l～21～2[11]pH和染色同时进行的方法,染色液中含有固定剂染色过程中同时进行了固定。[12]胶取1入脱色液中脱色。勤换脱色液,1以提高质谱检测的准确率。一般而言，6-20ACNACN,DTT（1.6mg+NH4HCO3溶液）145LC-MSTrypsin(1/50）3720%TFAZiptip。存在很大,本实验通过质谱鉴定出来得到一些信号肽SGETEDTFIADLVVGLR,SSLADVLSILAMTYSENGK,HDIEIKPGARLPR于质谱分析蛋白质的方法主要有三种肽质量图谱（PMF串联质谱（CID）和梯形肽片段法肽质量图（PMF肽质量图（PMF即用特异性的酶解或化学水解的方法将蛋白质切成小的片段，然后用质谱检测各产物肽的相对分子。质谱分析蛋白的方法用于质谱分析蛋白质的方法主要有三种：肽质量图谱法（PMF）、串联质谱法（CID）和梯形肽片段法。肽质量图谱（PMF）肽质量图谱（PMF）即用特异性的酶解或化学水解的方法将蛋白质切成小的片段，然后用质谱检测各产物肽的相对分子质量，将所得的蛋白酶解肽段质量数在相应的数据库中检索寻找相似肽谱从而绘肽图由此可见分子质量的精确度PMFPMF[3]（CID（CID是利用待序法梯形肽片段法与Edman法有相似之处，是用化学探针或酶解使蛋白或肽从N端或C1ladderCID并不是这样。[15]CIDCID，Collision-induced-Dissociation，是通过CID。CIDbyCIDPSM。%0 和十二烷基磺酸钠一聚丙烯酞胺根据蛋白质在pH梯度场中的净电荷和分子量大小Berrin,J.,etal.,High-LevelProductionof binantFungalEndo-β-1,4-xylanaseintheMethylotrophicYeastPichiapastoris.ProteinExpressionandPurification,2000.19(1): Damaso,M.,etal.,OptimizedExpressionofaThermostableXylanasefromThermomyceslanuginosusinPichiapastoris.AppliedandEnvironmentalMicrobiology,2003.69(10): J.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量[J].[J].傅晓华,张学军.蛋白质凝胶电泳操作中应注意的几个问题[J].科技解建勋,蒲小平,李玉珍,李长龄.蛋白质组分析技术进展[J].生物物理学Lysobactersp.SNNU513[D].王靖宇.酿酒酵母Sfi蛋白的功能研究[D].杨静,李成云,王云月,朱有勇,李进斌,何霞红,刘林,业艳芬,周晓罡,唐萍.酿酒酵母分泌蛋白组的计算机分析[J].中国农业科学,2005,03:516~522.王骊.酿酒酵母甘露糖蛋白是一