药物制剂微生物检验

药物制剂微生物检验药物制剂微生物检验目录1、微生物检验分类2、药品微生物限度检测的基本条件3、非灭菌制剂的微生物限度检查4、灭菌制剂的无菌检查法药物制剂微生物检验一、微生物检验分类内容无菌检查微生物限度检查微生物总数检查控制菌检查①细菌数检查②霉菌和酵母菌检查①大肠埃希菌②大肠菌群③沙门菌④铜绿假单胞菌⑤金黄色葡萄球菌⑥梭菌⑦白色念珠菌非全检，检查种类与剂型、给药途径、原料来源等有关。药物制剂微生物检验无菌检查凡直接进入人体血液循环系统、肌肉、皮下组织或接触创伤、溃疡部位而发生作用的制品或要求无菌的材料、灭菌器具都要进行无菌检查。注射用制剂：注射剂、输液、注射粉针等；眼用制剂：滴眼剂、眼用膜剂、凝胶剂、软膏剂等；植入型制剂：植入片等；创面用制剂：溃疡、烧伤及外伤用溶剂、软膏剂及气雾剂等手术用制剂、止血海绵、骨蜡等药物制剂微生物检验二、药品微生物限度检测的基本条件药物制剂微生物检验二、药品微生物限度检测的基本条件检查环境和人员要求环境要求:无菌室内进行。背景洁净度C级下的局部A级(洁净操作台），单向流空气。

操作人员：卫生、着装符合要求。

操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。

药物制剂微生物检验二、药品微生物限度检测的基本条件方法㈡由于某些供试品具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。药物制剂微生物检验二、药品微生物限度检测的基本条件取样量㈢1.检测用量①所有剂型＞2个最小包装②大蜜丸≥4丸③膜剂≥4片2.检测量①半/固体制剂：10g②液体制剂：10ml③膜剂：100cm药物制剂微生物检验二、药品微生物限度检测的基本条件检查菌培养基培养温度培养时间细菌数营养琼脂30℃～35℃3days真菌数玫瑰红钠琼脂23℃～28℃5days酵母菌数酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂23℃～28℃5days控制菌细菌：30℃～35℃真菌：23℃～28℃培养条件㈣药物制剂微生物检验二、药品微生物限度检测的基本条件供试品检出控制菌或其它致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。

供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。

供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。结果判断㈤药物制剂微生物检验第三节

药品微生物限度检测方法药物制剂微生物检验微生物检验基本流程1、领取并配制培养基2、擦拭工作台及墙壁3、开启紫外灯灭菌1h4、进行微生物实验5、实验完成后再次擦拭工作台药物制剂微生物检验二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查1、平皿法数据处理混合平板的制备细菌、真菌的培养检查结果、观察与计数供试液的制备书写检验记录单药物制剂微生物检验二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查1.平皿法10-210-210-210-210-310-310-310-3倒置培养3d营养琼脂培养基30~35℃玫瑰红钠琼脂培养基倒置培养5d23~28℃

对照对照对照对照1.0ml9.0ml

稀释液10g/ml供试品

9.0ml10-210-11.0ml

9.0ml10-31.0ml10-110-110-110-110倍递增稀释法药物制剂微生物检验二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查10g或10ml

供试品

10－1供试液取相当于1g或1ml供试液用滤膜过滤、冲洗取下滤膜，菌面朝上放培养基上培养结果观察与计数数据处理书写检验记录单2.薄膜过滤法药物制剂微生物检验药物制剂微生物检验药物制剂微生物检验药物制剂微生物检验药物制剂微生物检验药物制剂微生物检验封闭式薄膜过滤器传统开放式薄膜过滤器药物制剂微生物检验二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.操作注意事项1.尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。

2.为防止细菌增殖及产生菌苔，制成供试液后，应尽快稀释，注皿。一般稀释后应在1小时内操作完毕。药物制剂微生物检验二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.操作注意事项3.使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附的溶液混入其中。

4.注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落少。而高释释度时菌落数反而增大。遇此情况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操作技术误差。药物制剂微生物检验二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.操作注意事项5.为检查和控制灭菌效果，应做空白对照，以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过程是否无菌操作。

6.为便于区别药品中的颗粒与菌落，可在每100mL营养琼脂中加入1mL0.5％的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而药品的颗粒颜色无变化。药物制剂微生物检验二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查4.菌落计数及报告方法

宜选取细菌、酵母菌平均菌落数在30-300之间、霉菌平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。（1）当仅有1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数;当有2个或2个以上稀释级的菌落数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告之。（2）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

药物制剂微生物检验二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查例次各稀释级（供试液1ml/皿）平均菌落数（cfu）报告方式(CFU/g,ml，10cm2）原液10-110-210-31－64826402－42064864003－不可计42064640004－00.50＜1005－－00＜1006－000＜107000－＜14.菌落计数及报告方法细菌总数＝平均菌落数×稀释倍数药物制剂微生物检验二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查当有两个相邻稀释级的菌落数在30-300之间——比值＜＝2时，则以2个稀释级的平均值报告。比值＞2时，则以低稀释级的平板菌落数乘以稀释倍数报告。

编号各稀释度菌落数比值

菌落数报告数1∶101∶1021∶10322760295461.6377503800022890271602.22710027000高稀释级的平板菌落数*稀释倍数比值=低稀释级的平板菌落数*稀释倍数药物制剂微生物检验细菌总数检查表培养温度：30℃-35℃培养基名称：营养琼脂培养基（批号：14040901）菌落数（cfu)稀释度10-110-2培养时间（h)244872244872平皿号123平均菌落数药物制剂微生物检验特殊药品微生物限度检验品种检测项聚维酮碘溶液氧氟沙星滴耳液盐酸利多卡因胶浆脑得生袋泡茶细菌数≤20cfu/ml≤20cfu/ml≤200cfu/g≤200cfu/g霉菌与酵母菌数≤20cfu/ml≤2cfu/ml≤20cfu/g≤20cfu/g其它金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠球菌不得检出/ml金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得检出/ml大肠埃希菌不得检出/ml大肠埃希菌不得检出/ml大肠菌群<20cfu/g药物制剂微生物检验三、控制菌检查－检查项目（1）阴性对照试验：取稀释液10ml按相应供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。（2）阳性对照试验：供试品+10~100CFU阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。（3）供试品控制菌检查：依相应的检查方法进行。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－检查流程供试品增菌培养分离培养纯培养染色镜检生化反应试验报告结果药物制剂微生物检验三、控制菌检查－检查流程1.增菌培养目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－检查流程2.分离培养目的经增殖培养后,被检菌大量繁殖，同时其他一些杂菌也出现增殖。因此分离培养能使目的菌从混合菌中分离出来。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－检查流程3.纯培养目的只是大量增殖被检菌，用于后面的进一步检验。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－检查流程4.染色镜检目的初步鉴定，观察细菌的形态大小。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－检查流程5.生化试验目的最终的鉴定依据，结合染色镜检得出实验结果，填写检验报告。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－大肠埃希菌检查★大肠埃希菌俗称大肠杆菌，属肠杆菌科埃希菌属，革兰阴性杆菌，兼性厌氧菌，能发酵多种糖产酸产气。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－大肠埃希菌检查★大肠埃希菌检查意义

大肠埃希菌为条件致病菌，当人体免疫力低下或是侵入肠外组织、器官，可引起肠外感染，乃至败血症。也可随人和动物的粪便排出体外，污染环境，一旦食品、药品、水等物品中检出该菌，说明已受粪便污染，可能存在其他肠道致病菌和寄生虫卵，人们饮用或服用它们则可能引起消化道传染病。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－大肠埃希菌检查书写检验记录单双阳或双阴性增菌培养供试液的制备检查结果判断配培养基和稀释液靛基质试验荧光检查一阴一阳分离纯化最终结果判断★大肠埃希菌检查流程图胆盐乳糖M蓝白萤光玫瑰红色液面EMB琼脂/麦康凯琼脂平板菌落特征→革兰染色、镜检→生化试验:乳糖发酵试验、IMViC试验药物制剂微生物检验乳糖胆盐培养基伊红美蓝琼脂培养基靛基质试验气泡，培养基呈黄色紫黑色金属光泽玫瑰红色液面麦康凯琼脂培养基：大肠杆菌呈桃红色。药物制剂微生物检验大肠埃希菌产气杆菌IMViC试验

大肠埃希菌+(或-）+--

产气杆菌--++吲哚（靛基质）甲基红二乙酰枸橼酸盐利用药物制剂微生物检验三、控制菌检查－大肠埃希菌检查★大肠埃希菌检查结果报告检出大肠埃希菌MUG阳性，靛基质阳性MUG阳性，靛基质阴性，IMViC为－＋－－，G-MUG阴性，靛基质阳性，IMViC为＋＋－－，G-MUG阳性:紫外光下管内培养物呈现蓝白色荧光药物制剂微生物检验三、控制菌检查－大肠菌群检查★大肠菌群检查意义

大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随粪便排出体外后可直接污染药品，若产品中检出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，以此作为粪便指示菌比大肠埃希菌更具广泛卫生学意义。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－大肠菌群检查产酸：黄色产气：气泡产酸产气书写检验记录单不产酸不产气增菌培养供试液的制备配培养基和稀释液检查结果判断30-35℃18-24h分离培养乳糖发酵验证试验最终结果判断30-35℃24-48h特征菌落36±1℃18~24h胆盐乳糖M产酸：黄色产气：气泡紫黑色/桃红色★大肠菌群检查流程图EMB琼脂/麦康凯琼脂平板药物制剂微生物检验三、控制菌检查－大肠菌群检查★大肠菌群检查结果报告－大肠菌群MPN表

根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。各供试品量的检出结果最可能的大肠菌群数N（个/g或ml）1.0g或1.0ml0.1g或0.1ml0.01g或0.01ml+++＞102++-10＜N＜102+--1＜N＜10---＜1药物制剂微生物检验三、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查★铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃±1℃条件下能生长。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查★铜绿假单胞菌检查意义铜绿假单胞菌在特殊情况下可引起皮肤化脓感染、泌尿道感染、中耳炎等。外伤及烧伤患者感染后最易引起化脓，并引起败血症。为保证消费者安全，化妆品中不得检出铜绿假单胞菌。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查最终结果判断增菌培养供试液的制备书写检验记录单分离纯化无菌落或无特征菌落配培养基和稀释液革兰染色、镜检→氧化酶试验绿脓菌素试验生化试验硝酸盐还原试验

42℃生长试验明胶液化试验★铜绿假单胞菌检查流程图胆盐乳糖培养基十六烷三甲基溴化铵琼脂30-35℃18~24h30-35℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周围有水溶性蓝绿色素药物制剂微生物检验十六烷三甲基溴化铵平板胆盐乳糖培养基黄绿色菌膜灰白色湿润氧化酶试验粉红/紫红色药物制剂微生物检验绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色硝酸盐还原产气试验N2明胶液化试验明胶培养基（高层）明胶液化药物制剂微生物检验三、控制菌检查－金黄色葡萄球菌检查★金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－金黄色葡萄球菌检查革兰染色、镜检→生化试验:血浆凝固酶试验最终结果判断增菌培养供试品的处理书写检验记录单分离纯化无菌落或无特征菌落配培养基和稀释液30-35℃30-35℃营养肉汤培养基或亚碲酸钠肉汤18-24h卵黄氯化钠或甘露醇氯化钠琼脂24-72h特征菌落金黄色、边缘有浑浊带★金黄色葡萄球菌检查流程图药物制剂微生物检验卵黄氯化钠琼脂金黄色，有乳浊圈甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验血浆凝块液态血浆药物制剂微生物检验三、控制菌检查－白色念珠菌检查★白色念珠球菌检查意义白色念珠菌可侵犯人体许多部位，可引起：1.皮肤念珠菌病，2.粘膜念珠菌病，以鹅口疮、口角炎最多见，3.内脏及中枢神经念珠菌病，偶尔也可发生败血症。。药物制剂微生物检验三、控制菌检查－白色念珠菌检查有特征菌落念珠菌显色培养基最终结果判断革兰染色、镜检芽管试验增菌培养供试液的制备书写检验记录单分离纯化配培养基和稀释液无菌落或无特征菌落有特征菌落1%聚山梨酯80-玉米