大孔树脂法分离纯化紫藤花色素及其光谱性质研究

2011 20074192007与环境科专年级2007 级植科与技术指导教师职称副教授指导老师职称高级实验师PAGEPAGE16Abstract Keywords 、仪器与试剂 4仪器 试剂 实验部分 4紫藤花红色素提色素初步纯色素的纯化流树脂的选树脂型号及性质 大孔树脂预处理（活化） 树脂选择条件 6紫藤花红色素吸收波长的检测 6树脂吸附率的测6树脂洗脱率的测7上样液浓度的选择 8洗脱剂的选择条888pHHPLCRf1。论1!。参考文献 致 谢 ,并外光谱法、高效相色谱法1效果好确定和洗脱的最佳工艺参数为样质量浓度流速；以流速2.0mL/minnCC:丙V:V。:；；；高效相；薄层层析andwisteriaredpigmentwiththemethodmacroporousresinandstndyofitsopticalpropertiesZhangShi-jieJishouUniversityofBiologicalResourcesandEnvironmentalSciencesSupervisor:DongAi-wen Butnet%lnsdonadAftercomparingtheeffectofeightkindofmacroporousresinsintheandstaticadsorptionanddesorptionwearefoundthebestonetopurifyredpigment.Atthesametime,aseriesofmethodssuchasIR,HPLCandTLCwereusedtostudyitsopticalproperties.TheresultsshowthatLSA-21macroporousadsorptionresinisthebestcomparedwithothersevenresins.Thebesttechnicalparameterofadsorptionandelution:samplemassconcentration0.3915adsorptionrelocity2.5ml/min,desorptionsdntion90%ofmethanol,elmentvelocity2.0ml/min.Therententiontimeofwisteriaredpigmentis1.351minwiththeHPLCByTCLwefindthatthebestshouldbe:petroleumether:acetone:methanoicacid=20:21:2(V:V).Keywords:Wisteria;Redpigment;Macroporousadsorptionresin;HPLC;TLC1、前言应安全无毒的天然食代替合成食是势所趋,开发天然是世界食业和医药等行业的发展趋势之一。我国目前还处在合成与天然并存及同时发展的状由于合成的安全性问题不少合成在各国允许使的程度被限制尤其是在食品、医药和化妆品行业所以天然的和应是现在和未来发展的主要方向到目前为止已有许多从动植物出天然方面的报道[1]。但天然合成价格高,充分利价廉( WisteriasinensisSweet.)(Laguminosae), 、、萝蝶形花属属落叶攀援灌木三月现蕾四月盛花每轴有蝶形花20至80朵各地均有野生栽培根、种子入药性甘微温有小毒树皮含贰类花含挥发油叶子含金雀花碱等集药、、观赏、绿化、工业、材兼备,经济价值高且栽培容易,分布于我国南北各地。除白花外,花般呈现蓝,花期长且花序量多,花冠极丰富,目前对其花中丰富红尚无研究试验花原料,经乙醇提、树脂吸附纯化以及光谱性质研究。2、材料、仪器与试剂材料XDA-8SLA-21LSA-7西安蓝晓技有限公司）D101、AB-8、330D380（安微三星树脂技有限公司）硅胶G、KBr粉末。仪器UV-160A型SPD-10A液相IR-408DF42型干燥箱、EB-330电子分析平、AE100电子分析平、R-215旋转蒸发器试剂浓盐酸、无水乙醇、甲醇、丙醇、乙酸乙酯、甲酸、丙酮、乙腈、硝酸氨（以上溶剂均国产分析纯）蒸馏水。3、实验部分紫藤花红色素提取干燥花粉碎混匀后,40目筛100.00g60%2000ml作提,12,1000ml606过滤合并滤液，得提液。色素初步纯化将提液置于分液漏斗中后加入1500ml石油醚使其分层分离得萃[2]→→→→50℃减压浓缩→烘→粉末。树脂选择树脂型号及性质型性质颜色用途号分AB-8弱极性乳白半透明球状颗粒洁霉磷酸具有较好的效果330弱碱性黄不透明球状颗粒主要用于处理中除SO2-有主要于银杏黄酮、人参皂甙、三大D101非极性和精制。LSA-7极 性XDA-8极 性LX-17非极性浅粉红球状颗粒类D380弱碱性白球状颗粒乳白不透明球状颗粒SLA-21酮、沙棘黄酮等245%HCl2%NaOH。[2-4]紫藤花红色素吸收波长的检测取少量初步纯化色素,在紫外分光光度计800～200nm范围内扫描测其吸光度1。表1：得紫藤花色素的447nm。吸附率的测定8种已活化的湿20.00g250ml锥形瓶150ml初步纯化紫藤花色素室温静态12在UV-160A型紫外分光光度计上于447nm波长处测量上的光度比较各种对紫藤花红色素率的小，0＝32。A0－Ａ率(%)＝——————A0－ＡA0 式：A0为前光度；A为光度。表2：A0 A

/）D10120.064.460.9130.69024.45.47D38020.067.060.9130.75317.52.48LSA-2120.084.300.9130.71222.05.12AB-820.105.140.9130.71122.14.3033020.095.310.9130.73619.43.65LSA-720.114.230.9130.71921.25.01LX-1720.084.700.9130.70922.34.74XDA-820.065.290.9130.69224.24.578150ml603。3：号 A值 ) ）D1010.12154.34.4612.17D3800.03622.57.063.19LSA-210.13667.74.3015.74AB-80.14270.35.1413.683300.01910.75.312.02LSA-70.07940.74.239.62LX-170.05928.44.706.04XDA-80.03817.25.293.25231100.00gLSA-2160%、烘得粉末。上样液浓度选择分别10g6250ml烧杯中分别0.13、0.224、0.261、0.3132、0.3915、0.487mg/ml色素溶液100ml，室温静态吸附12h，UV-160A4。表4：浓度（mg/ml）A0A吸附率0.1340.0830.0759.640.2240.1390.10921.580.2610.1430.10228.670.31320.1560.11923.710.39150.1750.10341.140.4870.2240.15331.70由表4可知0.3915mg/ml为最佳浓度。件[5-6]试剂306090120分别取10.00g已吸附色素的LSA-2160%试剂306090120甲醇0.1430.1660.1730.185乙醇0.1120.1340.1560.177丙醇0.0910.1160.1310.143乙酸乙酯0.0430.0850.1240.128由表5可知甲醇为较佳洗脱剂。浓度LSA-21湿树脂7份置于烧杯，分别加入浓度为30%40%50%60%70%80%90%长6。表6：405060708090100）0.4370.4830.5320.5680.6710.6820.641690%值%24.27.11-41.7-38.7g50ml4568值%24.27.11-41.7-38.745678A00.3010.3240.3050.5750.690A0.2280.3010.3020.8150.9577410.00gLSA-21450ml0.3915mg/ml5500hm8。8：℃15254060A 0.35900.3590.3590.359A 0.3260.2910.3380.3568可25℃[7-8]上样流速lm05100mlLSA-21柱,0.51.01.52.02.5ml/min流,,A,(A0-A) A0×100%,9。9：ml/mi1.01.52.02.53.0A 0.35900.3590.3590.3590.359A 0.3160.3070.2950.2680.321%1214.517.825.310.692.5ml/min,3/4,,,2.5ml/min90%100ml50.51.01.52.02.5ml/min447nmml/mi1.01.52.0ml/mi1.01.52.02.53.0A0.1380.1950.2230.2010.146102.0ml/min50℃减压浓缩经干燥粉末。光谱性质收光谱称2.00mg提红690%配0.3915mg/ml盐酸和硝酸氨调节pH3.04.05.06.07.08.0、0h0m11。11：11pH365nm光谱性析。曲线析。具体操作如下：称取0.0021g色素粉末然与0.1504g干燥粉末充混合玛瑙研钵中研磨12min再转入合适的模具中使之布均匀抽空下压成透明薄片装入压片夹以空白压片作参比红1。1：光谱标准图紫藤花色素光谱图效液相色谱件78365nm: KromasilODS-1: 进样量： 速： 1ml/min。HPLC检测紫藤花素定性分析:准确称取7.5mg纯化的紫藤花红素置于25ml,加入30%,2min过膜，进行液2。图2：由图2可知紫藤花红1.351min。薄层层析[11]硅胶薄板的制备2.5份0.5%CMC（厚度为0.2~0.4晾干活化1~2h，置密封干燥剂中保存备用。Rf值的测定取红色素粉末10mg，用90%甲醇5ml溶解，点样于硅胶G-0.5%CMC薄层板上，沿原线距边各1cm共点样1ml，以石油醚：丙酮：甲酸 (20:21:2，V:V)为展开剂，在展层剂中展开，取出，晾干，观察，测定其Rf值，见图3。图3：其Rf=7.1cm/11.5cm=0.617。5.结论本文比较了八种不同树脂对紫藤花红色素的吸附能力，用LSA-21树脂吸附和分离紫藤花红色素的效果较好,吸附后的紫藤花红色素易于洗脱,在综合开发利用紫藤花及其色素时,对紫藤花色素的安全性、化学结构、生理活性以及食用安全性还有待进一步研究提高。LSA-21为25℃；流速2.5mL/min；液pH；90%流速为2.0mL/min。参考文献.,2009(1):82-83.,,,,. 科,2009,30(06):230.,,. 成,2007,29(3):353.,,丁,彭均辉,桂艳.爬ft虎及理质产物与开发,2006,(18):454.丁海.粉叶爬ft虎艺现代，2005,25(9):1062.孟宪军,颖畅,宣景宏,冯颖.AB-8对蓝莓动态与解特食,2007(12):95-96.王春,刘刚,费艳,赵卉,冬丽,王睿.芩总酮艺草，2010,41(1):59-60维念,史.注水西瓜人合高效液相谱测计量与测试术，2001,(05):41.管娅