微生物培养专题知识讲座

微生物培养专题知识讲座微生物培养专题知识讲座第1页㈠.微生物类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒◆微生物共同特点：一.微生物基础知识微生物培养专题知识讲座第2页1.细菌形态球菌弧菌杆菌微生物培养专题知识讲座第3页几个菌落及其形态微生物培养专题知识讲座第4页几个菌落及其形态微生物培养专题知识讲座第5页（二）培养基

培养基（培养液）是由人工方法配制而成，专供微生物生长繁殖使用混合营养液。1.培养基类型及用途微生物培养专题知识讲座第6页（三）培养基

（1）按物理状态分：（2）按功效分：（3）按成份分：1.培养基类型固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基判别培养基天然培养基合成培养基微生物培养专题知识讲座第7页种类是否含凝固剂用途固体培养基半固体培养基液体培养基按物理性质分是（1.5%-2.5%）是（0.2%-0.7%否分离、计数、判定等观察微生物运动、判定菌种等工业生产微生物培养专题知识讲座第8页固体培养基：菌落微生物培养专题知识讲座第9页半固体培养基：无动力有动力(弥散)微生物培养专题知识讲座第10页液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长微生物培养专题知识讲座第11页按化学成份分种类化学成份是否明确用途天然培养基（如马铃薯、玉米粉等）合成培养基（化学药品）否是主要用于工业生产分类、判定微生物培养专题知识讲座第12页按培养基功效（用途）分种类制备方法原理用途举例选择培养基判别培养基加入某种化学物质加入某种试剂或化学药品依据一些微生物对一些物质抗性依据微生物代谢产物与特定试剂或化学药品反应，产生显著特征改变从众多微生物中分离所需微生物判别不一样种类微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌伊红和美蓝培养基可判别大肠杆（深紫色，带有金属光泽微生物培养专题知识讲座第13页选择培养基加入青霉素培养基加入高浓度食盐培养基不加氮源无氮培养基不加含碳有机物无碳培养基分离酵母菌、霉菌等真菌（抑制细菌生长）分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离自养型微生物微生物培养专题知识讲座第14页

伊红—美蓝培养基是判别培养基，能够用来检测自来水中大肠杆菌是否超标，因为代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈黑色并带有金属光泽，使大肠杆菌菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌生长和抑制其它微生物生长。比如：判别大肠杆菌培养基大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽微生物培养专题知识讲座第15页微生物需要五大类营养要素物质是：（三）培养基成份1.碳源2.氮源3.生长因子4.无机盐5.水：凡是能为微生物提供所需碳元素营养物质。①无机碳源：CO2；NaHCO3等②有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等①组成细胞物质和一些代谢产物②异养微生物能源⑴.概念⑵.起源：⑶.作用：1.微生物碳源微生物培养专题知识讲座第16页①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含N代谢产物。2.微生物氮源⑴.概念：⑵.起源：⑶.作用：3.生长因子⑶.常见生长因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生长不可缺乏微量有机物。酶和核酸组成成份。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。微生物培养专题知识讲座第17页2.不一样微生物往往需要采取不一样培养基配方不论哪种培养基，普通都含有水、无机盐、碳源和氮源等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气要求．培养基成份微生物培养专题知识讲座第18页练习1.不能作为异养微生物碳源是（

）A．牛肉膏B．含碳有机物C．石油D．含碳无机物D微生物培养专题知识讲座第19页2.自养型微生物与异养型微生物培养基主要差异是（

）A．碳源B．氮源C．无机盐D．生长因子A微生物培养专题知识讲座第20页3.以下关于生长因子说法中，不正确一项是（

）A．是微生物生长不可缺乏微量有机物B．是微生物生长不可缺乏微量矿质元素C．主要包含维生素、氨基酸和碱基等D．普通是酶和核酸组成成份B微生物培养专题知识讲座第21页编号成份含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml5．右表是某微生物培养基成份，请据此回答：（1）右表培养基可培养微生物类型是

。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入

，用于培养

，

自养型微生物

含碳有机物

金黄色葡萄球菌

微生物培养专题知识讲座第22页（四）无菌技术1.无菌技术概念

无菌操作泛指在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法。成功地培养微生物关键。

微生物培养专题知识讲座第23页思索：1.取得纯净培养物关键？2.无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？（P15旁栏思索）3.消毒和灭菌有何不一样？4.常见消毒和灭菌方法有哪些？无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。㈣.无菌技术预防外来杂菌入侵微生物培养专题知识讲座第24页比较项理化原因作用强度毁灭微生物数量芽孢和孢子能否被毁灭消毒较为温和个别生活状态微生物不能灭菌强烈全部微生物能消毒与灭菌比较微生物培养专题知识讲座第25页①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。④紫外线消毒。⑴.消毒方法：3.常见消毒与灭菌方法微生物培养专题知识讲座第26页表面灭菌和空气灭菌等使用

紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。照射30min，可先喷洒石炭酸或煤酚皂溶液加强消毒效果。微生物培养专题知识讲座第27页（2）灭菌a

灼烧灭菌b

干热灭菌c

高压蒸汽灭菌灼烧灭菌微生物接种工具

(接种环、接种针)或其它金属用具直接在火焰充分燃烧层灼烧注意适用范围微生物培养专题知识讲座第28页干热灭菌

160－170℃；1－2h能耐高温需要保持干燥物品(玻璃器皿)高压蒸汽灭菌100kPa121℃15-30min通常见于培养基灭菌微生物培养专题知识讲座第29页请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。⑴培养细菌用培养基与培养皿⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管⑶试验操作者双手答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。P16旁栏思索微生物培养专题知识讲座第30页二.试验操作(以培养大肠杆菌为例)㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基1.计算2.称量3.溶化4.灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。5.倒平板:待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。微生物培养专题知识讲座第31页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基微生物培养专题知识讲座第32页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算称量溶化灭菌倒平板微生物培养专题知识讲座第33页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板①溶化时为何要将牛肉膏连同称量纸一起加热?计算微生物培养专题知识讲座第34页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板①溶化时为何要将牛肉膏连同称量纸一起加热?可确保粘附在称量纸上牛肉膏也能溶于水中，降低误差。计算微生物培养专题知识讲座第35页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板②加琼脂目标是什么?计算微生物培养专题知识讲座第36页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板②加琼脂目标是什么?作为凝固剂计算微生物培养专题知识讲座第37页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板③在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基锥形瓶目标是什么？计算微生物培养专题知识讲座第38页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板③在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基锥形瓶目标是什么？在灭菌时能防止水蒸汽凝结时浸湿棉塞，在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染作用。计算微生物培养专题知识讲座第39页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板④培养皿能否用高压蒸汽灭菌？计算微生物培养专题知识讲座第40页二试验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板④培养皿能否用高压蒸汽灭菌？不能，因为培养皿要保持干燥，应该用干热灭菌。计算微生物培养专题知识讲座第41页倒平板微生物培养专题知识讲座第42页1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？答：能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。讨论：微生物培养专题知识讲座第43页3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。答：空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。微生物培养专题知识讲座第44页练习2.以下操作与无菌技术无关是A接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手B接种前用火焰烧灼接种针C培养在50℃左右时搁置斜面D在酒精灯火焰旁完成微生物培养专题知识讲座第45页练习3.外科手术器械和罐头食品处理，要以能够杀死什么为标准A球菌B杆菌C螺旋菌D芽孢微生物培养专题知识讲座第46页练习3.外科手术器械和罐头食品处理，要以能够杀死什么为标准A球菌B杆菌C螺旋菌D芽孢微生物培养专题知识讲座第47页㈡.纯化大肠杆菌平板划线法和稀释涂布平板法。微生物接种常见接种方法有：1.平板划线操作方法平板划线操作微生物培养专题知识讲座第48页微生物培养专题知识讲座第49页一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标；二是存留在划破处单个细胞无法形成规则菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落。微生物培养专题知识讲座第50页微生物培养专题知识讲座第51页微生物培养专题知识讲座第52页1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不一样位置连续划线屡次.2.划线首尾不能相接3.划线后,培养皿倒置培养划线分离法注意事项:其它画线分离图：微生物培养专题知识讲座第53页答：操作第一步灼烧