固相萃取高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量

usHIzHENMEDIcINEANDMATERIAMEDIcAREsEARcH2007voL.18No.1时珍国医国药2007年第18卷第l期固相萃取一高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量杨克迪,李宏,龙云飞,郑智慧,万顺刚(广西大学化学化工学院,广西南宁530004摘要:目的采用固相萃取.高效液相色谱方法分析黄芪中黄芪甲苷的含量。方法采用c。。固相萃取小柱纯化黄芪提取物中的黄芪甲苷，反相高效液相色谱一紫外检测方法测定黄芪中黄芪甲苷含量。色谱柱为zorbaxsB-C。。柱(彬.6mmxl50mm,5汕m,以乙腈.水(32:68为流动相，流速1.0mL/min,柱温30°C,检测波长200nm。结果黄芪甲苷进样量在1.408一7.04灿g范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999。平均回收率为101.5%。结论该方法操作简便，重现性好，可作为黄芪药材或其它含黄芪制剂中黄芪甲苷含量的分析方法。关键词:固相萃取;高效液相色谱;黄芪甲苷中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008旬805(200701抑041mlDetemi勰tionofAstragalosideWinRadixAs加酗髓bySPEHPLCYANGKe—di,LIHong,LONGYun.fbi,ZHENGZhi—hui,WANShun—gang(JscAooZ矿吼em趣哪。凡d醌em渤Z西柳聘Peri噌,G“口，移i踟泐邙妙,Np肌i昭530004，劬i凡口Abstract:Ob.iectiveToestablishSPE.HPLCmethodforthedete彻inationofas£嘴alosideIVinRadixAs£m鼬执MethodsTheastragalosideIVinsamplewaspurifiedwithClRsolidphasecolumnanditscontentwasdeterminedwi出HPLC.UVmetho(1.TheastragalosideIVwassep啪ted0nazorba【SB-C18column(‘p4.6mmx150mm,5斗mwithacetonitrile一water(32:6&v/vasmobilephase,andthedetectivewavelen#尊hwasYetat200nm.ltesultsThelinearrangewas1.408一-7.04"g(r=O.9999.llheavemgerecoveryofastmgalosideIVwas101,5%.Conclusi彻Themethodissimple。accurateandcanbeusedforthequaJ.itycontr01ofRadixAs£nZgn屁anditspI°Cparation.1【eywOrds:SoIid.phaseextraction:HPLC:AstragalosideIV黄芪为常用中草药,具有较高的药用价值,其主要成分黄芪甲苷具有镇痛、镇静和降血压等药理活性“oJ。2005年版《中国药典》规定采用HPLc—ELSE方法测定黄芪甲苷含量p‘,鉴于紫外检测器的普及性,目前相当部分实验室仍采用HPLc—UV法分析黄芪及相关制剂中黄芪甲苷含量M“1。由于黄芪甲苷的特征吸收波长在200nm左右，样品中杂质对黄芪甲苷定量分析干扰较大。目前一般采用D101大孔吸附树脂处理样品,样品中仍含有较多的杂质,黄芪甲苷与其它杂质难以达到基线分离,影响分析准确度,另一方面也不利于色谱柱的保护。本文采用固相萃取方法纯化样品中黄苠甲苷,可明显去除样品中杂质,并以此测定了黄芪药材中黄芪甲苷含量。1仪器与材料1.1仪器A西1enll100高效液相色谱仪，二极管阵列检测器（美国Agilent公司;c。8固相萃取柱（美国Bestown公司;Labomta4000旋转蒸发器（德国Heidolph公司;BSl24S电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司;KQ.500DB超声波清洗机（昆山超声仪器厂。1.2药材与试剂黄芪购于南宁市一心药业公司,经鉴定均为药典正品;黄芪甲苷对照品购于中国药品与生物制品检定所（批号0781.200311;乙腈为色谱纯,其它试剂为分析纯,双蒸水自制。2方法2.1对照品溶液的配制精密称取17.6mg黄芪甲苷对照品置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。2.2黄芪甲苷供试品溶液的制备取黄芪药材，粉碎。精密称取4g粉末，用20ml甲醇于索氏提取器中浸泡过夜，加甲醇至60ml,于水浴中80°C下回流提取4h。提取液挥干甲醇，残渣用正丁醇饱和的水10ml超声溶解,溶液用水饱和的正丁醇萃取4收稿日期：2006蜘-25;修订日期:2006—11-20基金项目:广西教育厅资助项目[项目批准号:桂教科研（200420].作者简介:杨克迪（1966一，男（汉族，广西兴安人，现任广西大学化学化工学院副教授，博士学位，主要从事天然产物有效成分分离与应用研究.次,40mL/次。合并正丁醇液，用1%Na0H溶液洗涤3次,40mL/次，然后用正丁醇饱和水洗至中性，回收正丁醇，残渣用5ml水溶解,备用。c。。固相萃取柱依次用5rnl甲醇和5ml水预处理，取黄芪甲苷水溶液过固相萃取柱，先用3ml双蒸水洗涤,然后用20%甲醇溶液5ml洗涤，弃去洗涤液。用60%甲醇20ml洗脱，收集洗脱液。洗脱液挥干溶剂,用甲醇定容至5ml作为供试品溶液。2.3色谱条件zorbaxsB一c18色谱柱（4.6mmx150mm,5斗m,流动相为乙腈一水（32:68,〃口，流速1.0mL/min,柱温为30C,检测波长200nm。样品谱图见图l,对照品谱图见图2。2.4样品含量测定2.4.1线性范圉考察用微量进样器分别取2,4,6,8,10一黄芪甲苷对照品溶液进样。以黄芪甲苛对照品峰面积为纵坐标y,黄芪甲苷对照品进样量为横坐标戈，进行线性回归,得回归方程:y=72.2885戈〜4.9025（n=5,r=0.9999，线性范围为1.408—7.04pg。2.4.2黄芪甲苷含量测定分别测定了批号为20050316,2005l125两批黄苠药材中黄芪甲苷的含量。结果见表l。〃min图l黄芪甲苷供试晶液褶色谱图・4l・万方数据蠹轴磊琵菲霭喜萎囊囊年第j辣诺麟j谚IL癸【｝1茎旺A"瞳矗丛:量:悼一心博坫型蓥膏莨茎i袖肾订誊;—席斥萎警e社铂鐾V"茎，了i--t坚博％°?i蕊剐番蚕掣谨潮——谮————国————墨————陛————鋈翼朝堑香錾————熏————箨————翼—熬i霎羹擘?111；一藿誊〜篓窭耄妻jls§?ii;｝重羹;.I｝ij的囊；i：11i?f§1；蠢f§?<ll?5fK?|<j;i§i-ii;;j;li;;〜囊翌;-§1喜,!§要。ij;,i1囊;》l=.;;<-i§!;三一到〜嚣蠢一薑霎i2曼妻i§攀煮萎i§甑耋冀<il一%墨i!;〜葶艘一1一鐾i1j一融歉玉篓11i一萋蠢萋纂篓萋址li垡萋!I1—i囊毒薑塞i妻蠢1!；一冀霎一§r篓gil~型鏊羹；l萋嚣妻：§孽窆耄冀g§2，赶蠢一;j9一凳萋薑羹|§}.奏雾霪誊§；；一鼙霎囊〜;一囊委羹髫捌ii型萋ill一耄蠹餮篓耋萋笺;ll一差霉一i一墓ii;一蓄塞誉；；；：iji一囊菱嚣,!一蠢萼菱斋基ll蠢嘉>iloi一等藿鎏囊藿ilP—l璧曲蓉嚣瘟l臻嚏?i!-堇{一i—j囊震蓉冀鋈耄>；i!一妻翥一妻霉萋ii耋•爹至ii〜垂囊一l一薑委薑〜iip〜漭雩闻曼一一i一臺薹?蓥专•；篁；蚕,至摹妻。髦薹i?孝耋薹.雩妻至?耋矗蠹.薹孝妻i茎薹耋三茎耄薹;茎薹薹i妻童薑?蠢1毫三垂垂雾?；〉孝=霉羹嚣辽耋主.萋萋圣.蓦墓蠹鐾。手耋茎三薑季墓。耋爱j?专主“;囊;囊、毒叁争:;a彗,薹墓薹;摹童要i王1妻。耋茎｝二爹囊差.人耄委.章季董。茎孝主。耋蚕i?主蚕耋=三i喜.i耄童，蠹囊零!i型喜j塞墓jj妻蓦薹j薹妻霎!薯童万方数据固相萃取-高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量作者:杨克迪,李宏,龙云飞,郑智慧,万顺刚,YANGKe-di,LIHong,LONGYun-fei,ZHENGZhi-hui,WANShun-gang作者单位:广西大学化学化工学院,广西,南宁,530004刊名:时珍国医国药英文刊名:LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH年,卷(期:2007,18(1引用次数:2次参考文献(8条1.张银娣.王幼林.沈建平黄芪皂苷甲镇痛、镇静作用1984(042.张银娣.王幼林.沈键平黄芪皂苷甲的抗炎和降压作用1984(053.国家药典委员会中华人民共和国药典(一部20054.贺福元.刘平安.邓凯文反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中补阳还五汤中黄芪甲苷的含量及药动学研究［期刊论文］-中国药学杂志2005(215•伍毅.郑国燊HPLC测定复聪香液中黄芪甲苷的含量［期刊论文］-中国中药杂志2005(12张莲珠.汲立伟.吕雪峰HPLC测定克尼胶囊中黄芪甲苷的含量［期刊论文］-中成药2005(08戴军平.刘秀霞.吴沉HPLC法测定黄芪口服液中黄芪甲苷的含量［期刊论文］-西北药学杂志1998（04郭洪祝.刘晓峰.于侹高效液相色谱法测定胰复康胶囊中黄芪甲苷含量［期刊论文］-中国中药杂志2000（10相似文献（10条期刊论文任晋.黄翠玲.赵国栋.蒋可固相萃取-高效液相色谱-质谱联机在线分析水中痕量除草剂-分析化学2001,29（8建立了饮用水中痕量除草剂的SPE-LC-MS联机测试方法，该方法仅用45min就可完成水样中7种除草剂（阿特拉津,西草净,西码净,杀草净,敌稗,乙草胺,甲磺隆的分析，检测限低于欧共体所要求的饮用水标准（单种农药浓度小于0.1yg/L.比起液液萃取，离线SPE等其他前处理方法，在线SPE的结果的重现性和精密度方面大大优于前者,环境水样分析时间大大减少（所需时间为液液萃取的1/60，离线SPE的1/20，而且更安全性和可靠.我们已在华北某地的地表水和地下水中检测出阿特拉津（1.9yg/L和乙草胺（1.64yg/L.期刊论文许泓.林安清.古珑.唐丹舟.何佳.XUHong.LINAn-qing.GULong.TANGDan-zhou.HEJia自动固相萃取/高效液相色谱-质谱/质谱检测动物源性食品中残留二苯乙烯类激素的方法研究-分析测试学报2007，26（1应用自动固相萃取仪（ASPE/高效液相色谱-质谱/质谱仪（HPLC-MS/MS同时分析动物源性食品中残留二苯乙烯类激素-己烯雌酚（DES、己烷雌酚（HEX、双烯雌酚（DEN.样品净化采用装配硅胶固相萃取柱的ASPE，液相色谱分离用C8柱,大气压化学模式电离，多反应离子监测方式检测,DES-d8同位素标记物做内标定量.方法对DES、DEN的检出限为0.05ng・g-1，在0.5〜10ng・g-1范围内回收率为84%〜108%;对HEX的检出限为0.025ng・g-1，在0.25〜5ng・g-1范围内回收率为59%〜87%.学位论文王文娟固相萃取高效液相色谱紫外检测法测定血清中结合型胆汁酸的方法研究与临床应用2009目的:建立一种同时测定血清中9种结合型胆汁酸的固相萃取高效液相色谱紫外检测法（SPE-HPLC-UV。2.用SPE-HPLC-UV法测定正常孕妇、轻度和重度妊娠肝内胆汁淤积症（ICP患者母血和脐血中各结合胆汁酸的浓度，建立ICP的特征胆汁酸谱用于ICP的诊断和分度，初步探讨ICP患者母体-胎儿的胆汁酸平衡变化。方法:用ChromabondC18ec固相萃取柱萃取血清样品。色谱条件:色谱柱:WatersNovaC18色谱柱（3.9x150mm,5ym;柱温:25°C;流速:0.8ml/min;流动相A:60ymol/L磷酸盐缓冲液（pH3.3，流动相B为纯甲醇（A:B=34:66,v/v;检测波长197nm;进样量20yl,检测时间20min。用SPE_HPLC-UV法测定16例正常孕妇、11例轻度和14例重度ICP患者母血及脐血结合型胆汁酸。结果:1.9种结合型胆汁酸在20分钟内分离完全，各胆汁酸在浓度为5〜500卩mol/L范围内线性良好,r为0.9993〜0.9998,具有良好的相关性;最低检测限为1.25〜3.13ymol/L;该方法日内变异系数在1.47%〜5.95%之间，日间变异系数在1.61%〜7.92%之间，平均回收率在83.11%〜101.34%之间。2.母血:与正常孕妇组的相比:轻度ICP组TCA、TCDCA、TDCA增高有统计学差异;重度ICP组TCA、GCA、GLCA、TCDCA和TDCA增高且有统计学差异。与轻度ICP组相比:重度ICP组TCA、GCA、GLCA、TDCA增高有统计学差异。脐血:与正常孕妇组相比:重度ICP组TCA、GCA和TDCA增高且有统计学差异。与轻度ICP组相比:重度ICP组TCA、GCA、TDCA增高有统计学差异。轻度ICP组的胆汁酸谱与正常孕妇组相比无统计学差异。结论:1.本研究建立的血清胆汁酸的SPE-HPLC-UV分析法能实现母血与脐血中结合型胆汁酸的测定,该方法准确、灵敏、快速、特异,适用于实验室研究和临床常规检测。2•本研究建立了轻度和重度ICP患者母血与脐血中的特征胆汁酸谱，该胆汁酸谱有助于ICP的诊断和分度。本研究发现正常孕妇、轻度和重度ICP母血与脐血中胆汁酸水平成正相关，但正常孕妇脐血中总胆汁酸及TCA、GCA含量高于母血，而ICP患者母血中总胆汁酸及TCA含量却高于脐血。这些现象可能是由于胎盘对胆汁酸的转运机制发生改变使母体-胎儿的胆汁酸平衡发生了变化。期刊论文王传现.郭德华.李波.王敏.方晓明.仲帅固相萃取富集净化-高效液相色谱串联质谱法测定饮用水中全氟化合物-卫生研究2007，36（6目的建立固相萃取浓缩与高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS测定饮用水中全氟辛酸（PFOA、全氟辛烷磺酸（PFOS、全氟癸酸（PFDA等全氟化合物的方法.方法样品经C18固相萃取浓缩净化，应用负离子电喷雾电离，检测方式为多级反应离子监测（MRM模式，高效液相色谱串联质谱法（HPLCMS/MS进行测定.结果PFOA、PFOS、PFDA在50〜1000pg/ml线性范围内，线性相关系数均》0.99.在8、20.0pg/g添加水平的回收率为65%〜111%,相对标准偏差为3.6%〜14.6%（n=6，定量检出限为8pg/g.结论该法适用于饮用水中PFOA、PFOS、PFDA等全氟化合物的测定，具有快速、定量准确、检测灵敏等优点.期刊论文王水.唐琳.郭亦然.颜钫.陈放.WANGShui.TANGLin.GUOYi-ran.YANFang.CHENFang固相萃取和高效液相色谱相结合快速测定苦瓜甙A的含量-色谱2001，19（2建立了一个快速、简单、准确的固相萃取和高效液相色谱相结合的测定苦瓜甙A含量的方法。样品经石墨碳固相萃取管(3mL/250mg纯化后以高效液相色谱检测。色谱柱为C18,流动相为V(乙腈：V(甲醇：V(50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液=25:20:60,流速为0.8mL/min,检测波长为208nm。标准曲线自10mg/L至【」1*!000mg/L呈线形关系(r2=0.999*!2。该方法具有很好的重现性，日内或日间的相对标准偏差和相对平均误差均小于10%。样品回收率大于90%。期刊论文邰义萍.莫测辉.李彦文.包艳萍.张艳.姚圆.罗晓栋.TAIYi-Ping.MOCe-Hui.LIYan-Wen.BAOYan-Ping.ZHANGYan.YAOYuan.LUOXiao-Dong固相萃取-高效液相色谱-荧光检测土壤中喹诺酮类抗生素-分析化学2009,37(12建立了固相萃取-高效液相色谱-荧光(HPLC-FLD检测土壤中4种喹诺酮类抗生素的分析方法.样品采用50%Mg(NO_3_2-10%NH_3•H_2O(96:4,V/V超声提取，过HLB柱富集净化,再用乙腈-0.067mol/LH_3PO_4溶液洗脱.采用高效液相色谱-荧光检测器，以乙腈-0.067mol/LH_3PO_4(用三乙胺调节至pH2.5为流动相,于激发波长280nm、发射波长450nm处进行检测.土壤样品中4种喹诺酮类抗生素的加标回收率在60.4%〜99.3%之间，检出限为0.58~1.0“g/kg蔬菜基地土壤样品分析结果表明,本方法能够满足实际样品的分析要求,4种喹诺酮类抗生素均被检出,土壤中抗生素污染问题值得关注.期刊论文黄红林.刘实.张桃芝固相萃取-高效液相色谱测定番茄中的赤霉素GA3残留-分析科学学报2005,21(1建立了固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC法分析番茄中赤霉素GA3残留量的方法.研究了不同填料的固相萃取小柱对番茄中赤霉素的萃取回收率以及各自的纯化结果.该方法线性范围为0.21〜1.05x102mg/L,检出限为0.011mg/kg，在优化条件下，以C18小柱萃取样品的效果最好,加标回收率为88.45%〜95.90%,其RSD为1.15%〜6.56%.期刊论文林奇龄.欧仕益.欧云付活性炭固相萃取-高效液相色谱联用分析食品中的丙烯酰胺-食品工业科技2005,""（6实验建立了活性炭固相萃取-高效液相色谱联用分析食品中丙烯酰胺的方法,考察了方法的精密度、准确度和灵敏度,并用该方法获得了薯条的高效液相色谱图.结果表明，该方法的变异系数为3.439%,平均回收率为91.1%