乙型肝炎病毒的异质性及临床意义

乙型肝炎病毒的异质性及临床意义乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第1页

HBV感染过程乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第2页乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第3页第一个别

乙型肝炎病毒血清型乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第4页1决定原因

乙型肝炎病毒血清型，由膜主蛋白序列来决定。

2亲水结构区

HBsAg有两个亲水区：32-76aa和110-156aa。HBsAg亲水赖氨酸改变，抗原活性消失。

3共同决定簇

139-147aa是共同簇抗原a必需最小序列。

乙型肝炎病毒血清学分型

乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第5页1排斥决定簇

主蛋白还携带两对相互排斥亚型决定簇d/y（122-134aa指令d/y决定簇）和w/r（159-160aa指令w/r决定簇）。

2四个主要亚型

组成4个主要亚型：adw、adr、ayw和ayr。四个主要亚型乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第6页

除了4个主要亚型外，还有adyr、adwr、adyw/aywr和adywr等复合亚型。不一样亚型在外膜蛋白前-S区序列和全基因组序列亦有对应差异。复合亚型乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第7页第二个别

乙型肝炎病毒基因型乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第8页HBV基因型定义分型方法是依据HBsAg主蛋白基因或全基因组核苷酸序列差异性进行基因型分型，差异大于8%即被确定为另一基因型，按照这种分型方法，将HBV分为6种基因型，分别命名为A-F型，另有学者新定义了G、H型，尚待确定。乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第9页我国流行病学资料我国主要基因型为B、C两型，台湾省研究资料提醒除E型外，其它基因型均可在华人HBV感染者中检出，B和C型占患者人群85%。乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第10页HBV异质性基因型

基因型*

地理分布

A 北欧、西欧、美国、非洲 B 中国、印度尼西亚、越南 C 中国、越南、朝鲜、日本 D 地中海区、中东、印度 E 西非 F 美国（印地安拿人）、波利尼西亚 G 欧洲、美国

*依据HBV全序列中核苷酸差异≥8%

ChuCJetal.Hepatology;35(5):1274乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第11页第三个别

乙型肝炎病毒基因准种特点乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第12页

问题

不一样慢性乙型肝炎患者之间血清中乙型肝炎病毒基因序列是不一样，所以能够依据序列差异分成不一样血清型（adr、ayw、adw

等），也能够分成不一样基因型（A、B、C、D、E、F、G、H）。

问：同一个患者血液中不一样乙型肝炎病毒之间其基因序列是否相同？

答：相同！或不一样！乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第13页型与准种基因型（不一样个体之间）

血清型（不一样个体之间）

准种（单一个体）

乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第14页

乙型肝炎病毒准种定义

乙型肝炎病毒在长久复制过程中，因为逆转录过程其多聚酶缺乏严格校正机制，从而产生自发点突变，造成子代病毒基因序列之间微小差异，因而血清中乙型肝炎病毒基因序列是不一样。这种差异普通小于全长基因组5%。

有微小基因序列差异、但序列十分相近乙型肝炎病毒组成病毒群，这一病毒群时刻处于动态改变之中，乙型肝炎病毒这种存在状态称为“准种”。

英文：quasispecies乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第15页为何以前没有注意？

方法比较既往方案：搜集血清↓提取血清中HBVDNA↓设计重合PCR引物↓PCR扩增↓产物直接测序（单一克隆序列）本研究方案搜集血清↓提取血清中HBVDNA↓设计PCR引物↓PCR扩增↓

TA克隆入质粒载体中↓随机选择单克隆测序（多个克隆序列）乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第16页

S基因准种特点

（前-S1、前-S2、S）乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第17页ProtocolofHumanSomaticGeneTherapy

S基因全长PCR,1400bp1234M5671400bp乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第18页HBV全S基因RFLP结果乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第19页乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第20页遗传树分析E853-A3E845-A12E845-B4E845-A16E845-A8RenbaoGanN19E5N19A3N19A8N19E19EJ1B13

EJ1A4E67B5E67A1E67A8E67B1E67B8N19E5EJ1B6EJ1A12EJ1B16乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第21页HBV准种特点分析

—————————————————————HBVDNASRegionHBVDNAXRegionHBVDNAPRegionHBVDNACRegionHBVDNAPre-C区

HBVDNA全长HBVDNA——————————————————————乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第22页

基因准种

个体化特点

乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第23页HBsAg氨基酸序列RT702A3MENTT-----LFGGA-----VPFAQWFAG-RT702A14MENTT-----LFGGA-----VPFAQWFAG-RT702B3MENTT-----LFGGA-----VPFAQWFAG-RT702A10MENTT-----LFGGA-----VPFAQWFAG-RT522B7MESTT-----LFGGA-----VPFVQWFVG-RT522A5MESTT-----LFGGA-----VPFVQWFVG-RT522B11MESTT-----LFGGA-----VPFVQWFVG-RTXJA2MENTT-----LFGEA-----VPFVQWFVG-RTXJA6MENTT-----LFGEA-----VPFVQ*FVG-RTXJB5MENTT-----LFGEA-----VPFVQWFVG-RTXJC4MENTT-----LFGEA-----VPFVQWFVG-乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第24页变异一些特点（逆转录酶区）RT702A3-SSNLSWLS-----SHPIVLGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT702A14-SSNLSWLS-----SHPIVLGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT702B3-SSNLSWLS-----SHPIVLGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT702A10-SSNLSWLS-----SHPIVLGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT522B7-SSNLTWLS-----SHPIILGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKLK-RT522A5-SSNLTWLS-----SHPIILGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKLK-RT522B11-SSNLTWLS-----SHPIILGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKLK-RTXJA2-SSNLSWLS-----SHPIILGF-----VIGCWGTLPQEHIVLKIK-RTXJA6-SSNLSWLS-----SHPIILGF-----VIGCWGTLPQEHIVLKIK-RTXJB5-SSNLSWLS-----SHPIILGF-----VIGCWGTLPQEHIVLKIK-RTXJC4-SSNLSWLS-----SHPIILGF-----VIGCWGTLPQEHIVLKIK-乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第25页

前-S2基因

缺失突变研究乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第26页

线索：

S基因研究中发觉前-S2区多个缺失突变株存在

乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第27页HBV在慢性患者人群中准种现象乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第28页乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第29页前-S2区缺失突变分析——————————————————————

总数无缺失缺失百分比——————————————————————HBeAg阳性362313（36%）抗-HBe阳性15114（93%）累计512427（52%）——————————————————————乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第30页前-S2区缺失突变位点分析——————————————————————

位点范围—————————————————————

702-4 nt43-66 24bp ZH-A6 nt52-66 15bp ZH-B4 nt37-66 30bp ZH-B12 nt37-66 30bp N314-5 nt25-66

42bp N314-7 nt25-66

42bp 811-B12 nt52-66 15bp———————————————————— 乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第31页不一样病毒株突变位点adrMQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN702-1-------------------------------A----------------I-----H702-4--------------\\\\\\\\---------A----------------I------702-9----------------G--------------A------------T---I------702-10----------------G--------------A------------T---I------314-1----------T-Q----------------------------L------I------314-5-------L\\\\\\\\\\\\\\---------------------------------314-7-------L\\\\\\\\\\\\\\---------------------------------314-9----------T-Q------------------------------------------ZH-A6--------Q--------\\\\\---------------------------------ZH-B4------------\\\\\\\\\\---------------------------------ZH-B6-------------------------------------------------------ZH-B11-------------------------------------------------------ZH-B12------------\\\\\\\\\\---------------------------------142-A3-------------------------------------------------------142-A7-------------------------------------------------------142-A8------------------------------------------------------H811-A7-------------------------------------------------------811-A8-------------------------------------------------------811-B12-----------------\\\\\---------------------------------乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第32页本研究一些主要发觉慢性乙肝患者体内存在有HBV准种群。HBV准种群中存有缺点型病毒，即个别ORF编码序列经突变终止了正常表示。前C/C区、X区、前-S2区内部存有缺失突变，尤其以后2个区域多见。HBV变异存在个体化现象。血液中发觉了截短型表面抗原中蛋白乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第33页

关于准种研究一些问题乙型肝炎病毒高变区与高保守区界定？乙型肝炎病毒准种与感染慢性化关系？乙型肝炎病毒准种群漂变规律与肝纤维化关系？乙型肝炎病毒准种群漂变规律与肝细胞癌关系？干扰素治疗与乙型肝炎病毒准种群漂变？拉米夫定治疗与乙型肝炎病毒准种群漂变？耐药株与准种漂变规律关系？需要多靶位“联合、序贯”治疗？乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第34页

乙型肝炎病毒研究

临床意义

乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第35页

第一

首先是改变了咱们既往对乙型肝炎病毒存在状态看法。

概念：1

差异，2相同，

3种群，4动态。乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第36页第二

提升了咱们科研设计水平，以及学术论文鉴赏水平。

治疗前后比较

病情改变前后比较

印度寓言：盲人摸象乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第37页

第三

提升了咱们对于乙型肝炎病毒标准株或参考株判断水平。

早期克隆病毒株为标准序列？

Consensus序列为标准序列？

乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第38页

第四

有利于深入、正确认识拉米夫定用药过程中YMDD变异等问题。

是药品选择结果，不是诱导结果。

乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第39页拉米夫定对野生型HBV抑制核苷类似物拉米夫定ss(-)DNA抑制HBV聚合酶(野生型)高亲和力MDYDY=酪氨酸M=蛋氨酸D=天门冬氨酸乙型肝炎病毒的异质性及临床意义第40页拉米夫定和YMDD变异株HBVY=酪氨酸V=缬氨酸D=天门冬氨酸

I=异亮氨酸核苷类似物拉米夫定ss（-）DNA弱抑制HBV聚合酶（变异株）亲和力下降VDYD在细胞培养体系中YMDD变异株复制水平显著低于野生株（Melegarietal，

Hepatology1998;Allenetal,

Hepatology1998）YMDD变