免疫实验室基础常识课件

免疫实验室基础常识

免疫学检测方法的简介基本原理免疫学检测方法的应用抗原、抗体的定义免疫室检测的项目感染性疾病检查项目细胞、体液免疫检查项目肿瘤标志物电化学发光检测项目自身免疫性疾病检查项目4/26/20231免疫学检测方法的简介

方法原理免疫间接凝集方法RBC、乳胶颗粒+Ag免疫

沉淀反应方法琼脂板+Ab酶免疫分析技术（EIA）HRP+Ag或Ab放射免疫方法（RIA）I*125+Ag或Ab免疫光散射比浊分析Ag+Ab=CIC、微粒+Ag免疫胶体金检测方法胶体金+抗人IgG免疫荧光显微镜方法FITC+抗人IgG化学发光免疫分析技术ABEL+抗CEA电化学发光免疫分析技术[Ru（bpy）3]**+抗AFP4/26/20232免疫学检测常用的基本技术凝集方法MP-IgM、TPPA、Widal、Weil-FASO、RF、CRP、冷凝集实验等

沉淀方法IgG、A、M、C3、C4、CRP、等酶联方法病毒抗体IgG、IgM及蛋白抗原放射方法肿瘤标志物等光散射比浊方法Ig、ASO、RF、微量蛋白胶体金方法TB-Ab、HBsAg、HCG、LP-IgM荧光显微方法自身抗体、呼吸道V-IgM等化学发光技术肿瘤标志、甲状腺功能、电化学发光技术肝炎标志、性腺分析等4/26/20233抗原与抗体

一.

抗原、抗体的定义[1]1.

抗原的定义(1)凡是能够刺激机体免疫系统产生抗体的免疫物质、并能在体内外与抗体发生特异性结合反应的物质称为抗原。(2)抗原指能与T细胞的TCR何B细胞的BCR结合，促使其增殖、分化、产生抗体或致敏淋巴细胞，并能与之结合，发挥免疫效应的物质。（3）抗原两个特性：免疫原性、抗原性。2.

医学上重要的抗原[2]a.

病原微生物：细菌、病毒、立克次氏体。(表面抗原、核心抗原、鞭毛抗原等)4/26/20235抗原与抗体a.

自身抗原：一般自身组织对机体自身没有抗原性，但在外伤、感染、电离辐射、药物等影响下可以发生变性成为自身抗原，刺激机体产生免疫反应引起自身免疫性疾病，ANA.dsDNA等。a.肿瘤抗原：如AFP、CEA、PSA等。b.同种异体抗原：红细胞血型抗原、白细胞抗原（人类白细胞抗原又称HLA）等等。2抗体的定义：（1）抗体是机体在抗原物质刺激下所形成的一类具有与抗原发生特异性结合反应的球蛋白。4/26/20236（2）抗体是介导体液免疫的重要分子，是指B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的一种蛋白质，主要存在于血清等体液中。能与抗原特异性结合，具有免疫功能。（3）4/26/20237抗体的基本内容用电泳的方法可将血清或血浆蛋白分离成白蛋白和球蛋白两个组分。大多数抗体位于r球蛋白区域内。抗体的另一个常用名为免疫球蛋白（Ig），意为r球蛋白中与免疫相关的组分。抗体在血液中检出，但它在其他部位存在；细胞质内质网和高尔基体的膜和B淋巴细胞膜上、NK细胞和肥大细胞的细胞膜上、组织液和血浆中、还在乳汁和分泌液中。抗体分类；IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。IgG亚类IgG1-4、IgA亚类1-24/26/20239抗体的基本内容抗体的功能对有害因子，如毒素、药物、病毒、细菌、和其它寄生虫可通过与特出细胞受体结合而造成机体的损害，而分泌抗体可通过与其结合了阻止与响应受体结合，起到了中和作用。IgG的调理作用促进吞噬细胞对抗原的吞噬。IgG、IgE和IgM介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。（NC、MC、NK细胞）IgE所介导的超敏反应IgA介导的粘膜免疫母体的IgG介导的新生儿免疫4/26/202310应用抗原抗体结合原理检测的项目

感染性疾病检测项目肝炎病毒筛查：A、B、C、D、E、G、TTV、CMV呼吸道病原体筛查：EB、AD、CB、RSV、MP、CP感染性疾病检查项目：Uu、CT、NG、USR.TPPA、HIV自身免疫性疾病项目

免疫全项：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA、Ig.C3、C4、CRP、ASO、RF、CIC

肝病自身抗体：ANA、ds-DNA、SMA、AMA、LKM、SLA可溶性肝抗原、LC1抗肝溶质Ⅱ型抗原自身抗体：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA肾病自身抗体：ANA,ds-DNA,GBM,ANCN.ENA糖尿病自身抗体：IAA、ICA、GAD4/26/202311应用抗原抗体结合原理检测的项目

性激素6项参考值黄体生成素

（LH）青春期、成年期卵泡激素

（FSH）、、、、泌乳素

（PRL）3.4--24.1ng/ml雌二醇

（E2）卵泡期、黄体期、绝经期孕酮

（PRO）、、、、、、睾酮

（T）0.06-0.82ng/ml糖尿病项目胰岛素

C肽4/26/202313

免疫指标与临床疾病

.HBsAg：急、慢性乙肝无症状携带者2.HBsAb：疫苗接种后、既往感染后，有免疫力。3.HbeAg：病毒复制，传染性强。re-S1：病毒复制，传染性强。4.HBeAb：病毒复制降低或消失，传染性很弱。5.HbcAb：乙肝感染后产生，持续性强，可终生不消失。6.HbcIgM：乙肝感染早期，为早期诊断标志。7.HAVAbIgM：急性甲肝，2个月后阳性消失。8.HCV-Ab：感染过丙肝，阳性可持续1年以上。9.HDV-Ab：感染过丁肝，一般在乙肝感染后出现。10.HEV-IgM：戊肝感染的早期。11.HGV-Ab：感染过庚肝。12.CMV-IgM：感染CMV，偶发可引起肝细胞炎症。13.TTV-Ab：感染TTV而引起的肝细胞炎症。4/26/202314

免疫指标与临床疾病

乙型肝炎标志物模式分析及临床意义

临床诊断、免役接种、临床分期、传染判断、母婴检查等常见乙肝的8种模式：sAgsAbeAgeAbcAb临床意义＋＋＋HBV感染，急、慢性乙肝，传染性强＋＋＋急、慢性乙肝，传染性弱，或携带者＋＋急慢性乙肝，或携带者。查HBV-DNA＋＋既往感染过乙肝病毒，有免疫力＋＋＋既往感染，乙肝恢复期，有免疫力＋接种乙肝疫苗后，HBV感染后的恢复＋＋既往感染，乙肝恢复期基本无传染＋既往感染，排除检查HBV-DNA4/26/202315免疫指标与临床疾病

呼吸道病菌抗体IgM检测的临床意义呼吸道病毒并非分类上的名称，而是习惯上指由呼吸道传播并能引起呼吸道感染的病毒总称。1．

MP-IgM(肺炎支原体抗体IgM)MP通过呼吸道传播引起原发性非典型肺炎（肺炎病历10-20%），可并发鼻窦炎、皮炎、心包炎、心肌炎等，检出MP-IgM阳性可判断进期有的感染。2．

CP-IgM(肺炎衣支体抗体IgM)CP是一类介于细菌和病毒之间的微生物，传播途径主要是呼吸道，可引起肺炎有时还侵犯心脏、心包、脑膜、肝脏等部位，检出CP-IgM阳性可判断进期有CP的感染。4/26/202317免疫指标与临床疾病3．

EBV-IgM(EB病毒抗体IgM)EBV是传染性单核细胞增多症的病原体，主要通过唾液传播，EBV对儿童及青少年易感，阳性见于儿童期扁桃体炎和炎颊炎偶发的病历，EBV偶发波及中枢神经系统和肝炎，EBV与非洲儿童恶性淋巴瘤和鼻烟癌密切相关。4．

CBV-IgM(柯萨奇病毒抗体IgM)CBV可经口或呼吸道侵入人体，在局部繁殖，通过病毒血症扩散，除局部症状外可产生一系列综合症，如感冒、急性心肌炎、心包炎、无菌性脑膜炎、疱疹性咽炎、皮炎、肝炎等疾病。4/26/202318免疫指标与临床疾病5．

ADV-IgM(腺病毒抗体IgM)ADV从脾体细胞分离而得名，能引起呼吸道和眼部的疾患，急性病为发热、咽炎、咳漱，常有角、结膜炎、鼻炎、气管炎、非典型肺炎等，并伴有全身症状，检出ADV-IgM阳性可判断进期有ADV的感染。6．

RSV-IgM(合胞病毒抗体IgM)RSV是引起婴幼儿下呼吸道感染的病原体，也是肺炎和支气管炎的病因，成年多表现发热性感冒，老年人可使气管炎和肺气肿加重，检出RSV-IgM阳性可判断进期有RSV的感染。4/26/202319应用抗原抗体结合原理检测的项目外裴氏（Weil-Felix）反应变形杆菌OX19与斑疹伤寒病原体有共同抗原变形杆菌OXk与恙虫病病原体有共同抗原变形杆菌OX2与落矶山斑疹热病原体有共同抗原诊断与鉴别诊断立克次氏体病（高热等一系列症状）感染性疾病检查项目：Uu、CT、NG、USR、TPHA、HIV4/26/202321抗链球溶血素O(ASO)A群溶血性链球菌的代谢产物刺激机体产生的抗体。ASO升高见于A群溶血性链球菌感染及感染后免疫反应所致的疾病，如：感染性心内膜炎、扁桃体炎、风湿热、链球菌感染后急性肾小球肾炎。ASO在溶血性链球菌感染后一周开始升高，4～6周达高峰，并持续数月，故ASO增高提示曾有溶血性链球菌感染，但不一定是近期感染。链球菌感染后ASO动态升高，结合CRP升高及血沉阳性，有利于风湿热的诊断。高胆固醇血症、巨球蛋白血症、多发行骨髓瘤患者，ASO也可升高。4/26/202322类风湿因子(RF)RF是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，RF可分为IgM、IgG、IgA、IgE四型。类风湿性关节炎（RA）患者的阳性率为70％～80％，其中尤其以病变广泛、病情严重、病程长、活动期及有关节外病变者的阳性率高、滴度高并长久存在。除类风湿外，ＲＦ还见于正常人和其他疾病，例如正常人，尤其老年人，阳性率占５％－１０％；各种感染性疾病如乙肝、结核病、亚急性细菌性心内膜炎和慢性支气管炎等；结缔组织病如红斑狼疮、干燥综合征、皮肌炎、血管炎、硬皮病、预防接种后以及某些恶性疾病。在这些疾病中，ＲＦ的阳性率可达１０％－７０％。因此，在RA的诊断上，一般认为RF只有参考价值而无特异性诊断价值。4/26/202323免疫球蛋白及亚类其浓度在不同年龄段有所差异，在某些疾病情况下，这些指标的浓度将出现升高或降低，从而具有疾病诊断价值。IgG：正常情况下，脐血7.6～17g／L，新生儿7.0～14.8g／L，0.5～6月3～10.0g／L，6月～2岁5～12g／L，2～6岁5～13g／L，6～12岁7～16.5g／L，12～16岁7～15.5g／L，成人6～16g／L。在慢性肝病，亚急性或慢性感染，结缔组织疾病，ＩｇＧ骨髓瘤，无症状性单克隆ＩｇＧ病等，出现增高；在遗传性或获得性抗体缺乏症，混合性免疫缺陷综合症，选择性ＩｇＧ缺乏症，蛋白丢失性肠病，肾病综合症，强直性肌营养不良，免疫抑制剂治疗等降低。

4/26/202325免疫球蛋白及亚类IgA：正常情况下，脐血0～50mg／L，新生儿0～22mg／L，0.5～6月3～820mg／L，7月～2岁140～1080mg／L，2～6岁230～1900mg／L，6～12岁290～2700mg／L，12～16岁810～2320mg／L，成人760～3900mg／L。在慢性肝病，亚急性或慢性感染性疾病（如结核、真菌感染等），自身免疫性疾病（如ＳＬＥ、类风湿性关节炎），囊性纤维化，家族性嗜中性粒细胞减少症，乳腺癌，ＩｇＡ肾病，ＩｇＡ骨髓瘤等情况下增高；在遗传性或获得性抗体缺乏症，免疫缺陷病，选择性ＩｇＡ缺乏症，无γ－球蛋白血症，蛋白丢失性肠病，烧伤等。抗ＩｇＡ抗体现象，免疫抑制剂治疗，妊娠后期等情况下降低。

4/26/202326补体C3和C4正常情况下，C3(β1C-球蛋白)800～1550mg／L，C4(β1E-球蛋白)130～370mg／L，血液补体含量与活度在许多病理情况下都会发生变化。所以，临床上应动态观察补体水平的变化。补体含量下降并不一定代表免疫功能障碍或免疫缺陷，因为在缺血、凝固性坏死和中毒性坏死时，组织能释放较多的蛋白分解酶，导致补体溶血活度和补体组分的下降。血补体浓度升高：见于各种炎症性疾病及阻塞性黄疸，急性心肌梗塞，溃疡性结肠炎，糖尿病，急性痛风，急性和急性甲状腺炎，急性风湿热，皮肌炎，多发性肌炎，混合性结缔组织病，结节性动脉周围炎等。4/26/202329一肿瘤标志物的简介（一）肿瘤标志物概念4/26/202330

所谓肿瘤标志物(tumormarker，TM)，是指由肿瘤组织产生的存在于肿瘤组织本身，或分泌至血液或其他体液，或因肿瘤组织刺激，由宿主细胞产生而含量明显高于正常参考值的一类物质。4/26/202331（二）肿瘤标志物的分类肿瘤胚胎性抗原标志物该类蛋白质即癌变时因返祖现象的出现，而产生的肿瘤标志物。例：甲胎蛋白(AFP）癌胚抗原(CEA)糖类抗原标志物该类物质是肿瘤细胞表面的抗原物质，或肿瘤细胞所分泌的物质。该类标志物又可分为两类1，糖类高分子粘蛋白抗原例：癌抗原CA125癌抗原CAl5-34/26/2023322，血型类抗原例：癌抗原CAl9-9、癌抗原CA50酶类标志物例：前列腺特异性抗原(prostatespecificantigen，PSA)神经原特异性烯醇化酶(neuron·specificenolase，NSE)激素类标志物例：人绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonagotropin，HCG)人胎盘催乳素(PL)

4/26/202333其它蛋白质类标志物例：ß2-微球蛋白(ß2-microglobulin，ß2-MG)血清铁蛋白(SerumFerritin，SF)

4/26/202334（三）肿瘤标志物的临床应用

1.甲胎蛋白（AFP）原发性肝癌的诊断急慢性肝炎和肝硬化的鉴别诊断先天性胎儿畸形诊断恶性畸胎瘤的诊断

4/26/2023352.癌胚抗原(CEA)胃肠道等空腔脏器肿瘤诊断。肺癌、乳腺癌、卵巢癌也升高，大多显示为肿瘤浸润，70%为转移性癌。肿瘤手术评价。动态监测提示肿瘤预后。连续随访监测肿瘤复发。4/26/2023363.糖类抗原19-9（CA19-9）

CA19-9是肿瘤细胞膜上的糖脂质，因由鼠与骨髓瘤杂交制备的116NS19-9单克隆抗体识别而命名，是一种异质性的高分子量粘糖蛋白。在消化道腺癌中明显升高，又称胃肠癌抗原。胰腺癌、胆管细胞癌、肝细胞癌、胃癌、结直肠癌的诊断。术前水平与预后有关。监测病情的进展、复发和转移。急性胰腺炎、胆汁淤积性胆管炎、急性肝炎、肝硬化短暂的升高。

4/26/2023374.糖类抗原50（CA50）CA50是由单抗C-50识别的一种糖类抗原，其抗原决定簇存在于糖脂和高分子糖蛋白中。胰腺癌、胆囊癌、肝癌、结直肠癌的诊断。卵巢癌、子宫癌的诊断。监测病情的进展、复发和转移。4/26/2023385.糖类抗原242（CA242）CA242是由单抗C-242识别的一种糖类抗原。胰腺癌、胆道癌、胃癌、结直肠癌可增高。4/26/2023396.糖类抗原125（CA125）CA125因从人卵巢浆液囊泡腺癌抗原可被单克隆抗体OC125识别而命名，是一种卵巢癌相关抗原。卵巢癌的早期筛查，比临床诊断至少提前一年。连续监测鉴别肿瘤良性还是恶性生长。判断病理类型及临床分期：浆液性卵巢上皮癌阳性率89%，粘液性癌16%，卵巢内胚窦瘤不升高。疗效评价，动态监测复发、转移。妊娠头3个月、月经期、子宫内膜炎可升高，注意鉴别。4/26/2023407.糖类抗原15-3（CA15-3）

用人乳脂球上分离的糖蛋白MAM-6和肝转移的乳腺癌细胞免疫小鼠，制成针对相应抗原的单克隆抗体：115-D8和DF-3，这两株抗体识别的抗原是上皮细胞上的一种粘蛋白MUC-1的唾液酸糖抗原，该抗原命名为CA15-3。乳腺癌诊断，Ⅰ期水平正常，Ⅱ、Ⅲ期升高。术前水平与预后相关。治疗后动态监测提示体内残余肿瘤或肿瘤转移、复发。慢性肝炎、结核、自身免疫病可轻度升高。4/26/2023418.人绒毛膜促性腺激素（HCG）

是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素。正常妊娠检测。检测异位妊娠。正确指导人工流产。检测亚临床自然流产。葡萄胎、绒癌的诊断及动态监测治疗和预后。4/26/2023429.神经原特异烯醇化酶（NSE）

在神经组织中发现的高酸蛋白，仅存在于神经组织中。肺小细胞性肺癌（SCLC）的诊断，SCLC患者阳性率70%，其他组织型肺癌仅10-20%。神经母细胞瘤、神经内分泌瘤血NSE升高。脑组织机械性损伤时，脑脊液NSE升高，升高幅度与速度与损伤程度及部位密切相关。部分脑梗塞、一过性脑缺血病人脑脊液NSE升高。4/26/20234310.细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）鳞癌型肺癌病人血中明显升高（50-701%）。结肠癌、胃癌仅轻度升高。非肿瘤性疾病一般不升高。

4/26/202344

11.前列腺特异抗原（PSA）

PSA是由人前列腺上皮细胞合成并分泌至精浆中的一种糖蛋白。前列腺癌时，PSA升高。早期诊断可提前4年。前列腺炎、前列腺按摩、前列腺活检、膀胱镜操作、直肠指检PSA也升高。fPSA/tPSA比值>25%前列腺癌可能性小（<10%），fPSA/tPSA比值<10%前列腺癌可能性增加（80%）。连续观察PSA上升速度，若>0.75ng/mL/年，前列腺癌可能性增加。4/26/20234512.血清铁蛋白（SF）

是一种储铁蛋白。SF升高见于肺癌、胰癌、白血病、肝脏疾病。SF减低见于缺铁性贫血、大量失血、长期腹泻。4/26/202346部分肿瘤标志物的阳性顺序项目名称主诊阳性顺序CA50广谱胰、肝、卵巢、肠、胃、肺CA125卵巢卵巢、胰、肺、乳、肠CA15-3乳房乳房CA19-9消化道胰、胆、胃、肠MGAg/CA724胃胃、肠、肺、乳SCC/CYFRA211鳞癌肺、食道、上颚、宫颈、皮肤

4/26/202347肿瘤标志物检测图谱十

肿瘤标志物检测图谱癌肿部位肿瘤标志物选择顺序肝AFPCEASF结直肠CEACA19-9CA242CA50胰腺CA19-9CA242CEACA50胃MGAgCA724CEACA19-9食道SCC肺NSECYFRA21-1SCCCEA乳房CA15-3CA125CEA卵巢CA125β-HCGCEAAFP子宫SCCSFβ-HCG前列腺fPSAPSA甲状腺HTGCEACA19-9血液病SFβ2-MG4/26/202348自身抗体的分类及命名

1、以抗体在细胞或组织中存在的位置进行命名：ANA、AMA、LKM等。2、以靶细胞或靶组织进行命名：抗骨骼肌抗体、抗胰岛细胞抗体等。3、以首先被检测到该抗体的患者名字的缩写进行命名：抗Sm、抗Ro、抗La等。4、以相关疾病的名字的缩写进行命名：抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B等。5、以抗原的化学性质进行分类命名：抗RNP、抗ss-DNA、抗dsDNA等。

4/26/202349自身免疫性疾病项目免疫全项：ANA、ds-DNA、AMA、ANCA、ENA、IgC3、C4、CR