实验诊断学病原微生物检查

临床病原体检查目的明确感染是否发生以及病原体的类型。提供体外微生物药物敏感实验的结果。密切监视烈性传染病与新的传染病的发生，及时向行政主管部门报告。配合相关机构进行流行病学调查。目前一页\总数四十五页\编于十八点

本章主要内容一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测五、院内感染目前二页\总数四十五页\编于十八点一、细菌检验标本采集与送检的基本原则

1.注明被检人姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来源及检验目的、抗生素使用情况。2.尽量在抗生素使用前采集标本。3.在采集血液、脑脊液、穿刺液等标本时，应严格执行无菌操作，避免杂菌污染。4.立即送到实验室，某些细菌还应注意保温、保湿。5.盛标本容器须经灭菌处理，勿用消毒剂。

参考P463目前三页\总数四十五页\编于十八点二、常见标本的采集：血液与骨髓

1.采血部位多为肘静脉，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采集血标本，无菌操作。2.每瓶采血量为5～10ml左右，培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。3.选择寒战发热之初采血。对已用抗菌药物而又不能停药者，应在下次用药前采血。4.每例建议不同时间不同部位采血3次，注意区别感染菌和皮肤污染菌。目前四页\总数四十五页\编于十八点尿液标本的采集

1.中段尿采集：最常用的方法。采样前须消毒尿道口将中段或近后段的尿液留于无菌容器中。2.导尿管采集尿液：可减少污染，但易引起逆行感染。不可从集尿袋下端管口留取标本。3.膀胱穿刺采集尿液：病人耻骨上皮肤消毒后，以无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厌氧菌培养或婴幼儿。目前五页\总数四十五页\编于十八点粪便标本的采集1.挑取有脓血粘液部分的新鲜粪便约2～3克盛于灭菌容器中送检，也可用拭子挑取粪便插入Cary-Blair运送培养基中送检。2.对不易获取粪便者，如婴幼儿可用直肠拭子采集送检。目前六页\总数四十五页\编于十八点呼吸道标本的采集

1.自然咳痰：清水反复漱口后用力咳嗽，从呼吸道深部咳出,以清晨第一口痰为好。2.气管镜下采集法、气管穿刺法：下呼吸道病原学的理想标本，可减少污染，但病人有一定的痛苦，不易接受和推广。3.应及时送检和处理(<1小时)，放置时间长可导致肺炎链球菌，流感嗜血杆菌等的检出率明显下降。

目前七页\总数四十五页\编于十八点脑脊液等无菌体液标本的采集

1.严格无菌条件下采集标本。2.尽量采集多的标本送检。3.尽快送检或床旁接种可提高阳性率，特殊标本需保温送检。如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。目前八页\总数四十五页\编于十八点其它标本的采集

(伤口、烧伤创面、脓肿等)1.无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无菌拭子取病灶深部的脓液和分泌物，立即送检。2.对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液送检，也可以切开排脓时用无菌拭子采样。3.生殖道标本包括尿道口分泌物、外阴糜烂物、宫颈口分泌物、前列腺液等，应注意保温。目前九页\总数四十五页\编于十八点三、检查方法1.直接涂片、镜检：初步诊断但阳性率低。如抗酸染色找结核杆菌。阴道毛滴虫革兰氏染色目前十页\总数四十五页\编于十八点2.分离、培养、鉴定：金标准较费时（3天）,同时可进行药物敏感试验。3.血清学检查：如肥达氏试验、军团菌抗体检查等。抗体检测应进行双份血清检测，两次抗体效价相差4倍以上有现症诊断价值，但无早期诊断意义。（但IgM有早期诊断意义）目前十一页\总数四十五页\编于十八点

主要内容一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测五、院内感染目前十二页\总数四十五页\编于十八点耐药性及发生机制

1.当前临床分离的常见细菌

(1)革兰阴性菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等，占70%。

(2)革兰阳性菌葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、卡他布兰汉菌等，占30%。滥用抗生素的后果→耐药目前十三页\总数四十五页\编于十八点2.耐药机制(1)耐药基因的整合子系统(2)产生灭活抗生素的水解酶或钝化酶(3)改变抗生素作用的靶位(4)细菌膜的外排泵出系统(5)生物膜的形成，提高耐药性目前十四页\总数四十五页\编于十八点3、药物敏感试验

(1)K-B纸片琼脂扩散法：最常用，操作相对方便(2)稀释法

包括琼脂稀释法和肉汤稀释法

可获得最小抑菌浓度（MIC），但较麻烦(3)E试验：结合稀释法和扩散法，价格昂贵目前十五页\总数四十五页\编于十八点4.重点耐药菌株监测试验☆

(1)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的筛选(2)氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌(HLAR)筛选(3)耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)筛选(4)染色体Ι型β-内酰胺酶AmpC酶的检测☆(5)超广谱ß内酰胺酶(ESBL)检测目前十六页\总数四十五页\编于十八点5.病原菌耐药基因的检测(1)适全生长缓慢的细菌如结核分枝杆菌(2)对病原菌的耐药具有确证意义(3)考核其它耐药性检查方法的金标准,可能成为未来耐药性检查的主导方法。目前十七页\总数四十五页\编于十八点

本章主要内容一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测五、院内感染目前十八页\总数四十五页\编于十八点

一、流行病学和临床类型流行病学特征新的病原体不断被发现，如SARS病毒、禽流感染病毒等。老传染病死灰复燃如结核、梅毒、霍乱等

多重耐药菌株不断出现器官移植、放/化疗、侵入性医疗检查或治疗导致医院感染发生率不断增加目前十九页\总数四十五页\编于十八点二、检查项目和临床应用1.细菌感染：细菌培养是最重要的确诊方法2.病毒感染：常用血清学检查，如HIV3.真菌和寄生虫感染：形态学检查目前二十页\总数四十五页\编于十八点

本章主要内容一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测五、院内感染目前二十一页\总数四十五页\编于十八点病毒性肝炎检测P452甲型肝炎(粪口途径)：

IgM抗体：特异性早期诊断指标,提示HAV现症感染

IgG抗体：出现于恢复期且长期存在,提示既往感染甲、乙、丙、丁、戊、庚、输血传播病毒肝炎目前二十二页\总数四十五页\编于十八点乙型肝炎

1.最常用的定性检测乙肝两对半常用测定方法：ELISA法

2.乙肝DNA定量PCR检测：病毒复制的指标正常:HBVDNA<103Copies/ml拉米夫定(贺普丁）、干扰素治疗效果的主要指标。目前二十三页\总数四十五页\编于十八点丙肝病毒标志物

RNA病毒血液传播

1.抗HCV-IgM近期感染指标

2.抗HCV-IgG已有感染，不作为感染早期指标

3.HCV-RNA：阳性提示HCV复制活跃,直接指标其它丁肝为缺陷病毒，依赖HBV

目前二十四页\总数四十五页\编于十八点

本章主要内容一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测五、院内感染目前二十五页\总数四十五页\编于十八点医院感染常见病原体检测院内感染的概念：入院时无症状，在入院48小时后发生的感染，或出院后48小时发生的感染。患者或陪护人员医护人员环境或医疗器械三大环节：传染源，传播途径，易感人群目前二十六页\总数四十五页\编于十八点医院感染的特点①感染源和病原体：感染源主要是患者、医务人员、医院环境、医疗器械等。最常见病原体是细菌，以革兰阴性杆菌为主②易感人群：常见于免疫力低下的住院患者。多发生于具有基础性疾病或接受侵入性治疗的患者。③常见临床类型：下呼吸道感染（机械通气）为最常见医院感染类型，其它如尿路感染（插管）、手术切口感染、胃肠道感染、血液感染（静脉留置和透析常见）、皮肤和软组织感染等。④病原体：条件致病菌和机会致病菌⑤传播方式：接触传播多见目前二十七页\总数四十五页\编于十八点医院感染的常见细菌1.鲍曼不动杆菌呼吸道感染常见2.大肠埃希菌泌尿道感染常见3.铜绿假单胞菌呼吸道和烧伤常见4.金黄色葡萄球菌皮肤和软组织化脓5.肺炎克雷伯菌呼吸道感染目前二十八页\总数四十五页\编于十八点掌握临床常见病原体检测标本的采集运送原则、要求及方法；熟悉病原体耐药性发生机制、药敏试验及耐药菌监测试验；掌握乙肝两对半的意义及常见模式；掌握院内感染。本章重点目前二十九页\总数四十五页\编于十八点考试时间：12年12月28日晚18:30考试题型：判断题10分（10道题），单选题70分（70道题），不定项选择题9分（6道题）。名解6分（2道题），简答5分（1道题）。考试内容：平时上课老师PPT的内容，课本中没讲到的内容不作为考试要求。期末考试注意事项目前三十页\总数四十五页\编于十八点K-B法目前三十一页\总数四十五页\编于十八点back目前三十二页\总数四十五页\编于十八点E-试验目前三十三页\总数四十五页\编于十八点1.测定方法

OX纸片法：苯唑西林FOX纸片法：头孢西丁2.MRS对所有β内酰胺类耐药OXOXFOXFOXOXMRS筛选试验FOX目前三十四页\总数四十五页\编于十八点HLAR的筛选CN120AMP1.测定方法纸片法2.CN120：高浓度庆大霉素AMP：氨苄西林目前三十五页\总数四十五页\编于十八点ESBLs双纸片确证试验1.CTX/CA比CTX抑菌圈或CAZ/CA比CAZ>5mm即为阳性2.若ESBLs阳性,对青霉素类、所有头孢菌素类及单环类抗菌素耐药

CTXCTX/CACAZCAZ/CA注:CTX为头孢噻肟;CTX/CA为头孢噻肟/棒酸CAZ为头孢他啶;CAZ/CA为头孢他啶/棒酸目前三十六页\总数四十五页\编于十八点AmpC酶检测FOXFOX：头孢西丁2.若AmpC酶阳性，对青霉素类、第一、二、三代头孢菌素、单环类及头霉类抗菌素耐药目前三十七页\总数四十五页\编于十八点乙肝的传播途径我国HBSAg阳性率约为8％。经血传播胎源性传播医源性传播性接触传播生活密切接触传播(共用剃须刀、牙刷等)目前三十八页\总数四十五页\编于十八点乙肝两对半

HBsAg：感染HBV后1～2月出现，若急性发病后3个月不转阴，易转为慢性。是乙肝病毒感染的标志。

HBsAb：为保护性抗体，表明患者已产生了一定的免疫力。

HBeAg：表明乙肝处于活动期，肝细胞受损状态，有较强传染性。

HBeAb：抗-HBe的出现意味着大部分乙肝病毒被消除，传染性显著降低，病情出现好转。

HBcAb：阳性者代表正在感染或以往感染过乙肝病毒。

目前三十九页\总数四十五页\编于十八点HBcAg(核心抗原)存在于肝细胞内，血中不易检测。当肝细胞破坏，HBcAg释放出来，被酶水解成HBeAg，所以HBeAg提示肝细胞损伤。目前四十页\总数四十五页\编于十八点目前四十一页\总数四十五页\编于十八点目前四十二页\总数四十五页\编于十八点常见模式

HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb

大三阳

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