肾功能不全试验的实验报告专家讲座

试验目标复制急性中毒性肾衰动物模型，经过对肾功效指标检测及肾脏形态学改变观察，了解中毒家兔肾功效改变。判断、分析致病原因及造成急性肾衰可能发病机制。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第1页试验原理

肾脏是一个多功效器官，其主要功效之一是泌尿功效。肾脏经过调整肾血流、肾小球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄体内代谢物质以维持机体内环境稳定。当肾血流量降低，肾小球滤过率下降或肾小管排泌重吸收功效障碍时，肾泌尿功效受到影响，从而造成肾功效不全。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第2页ARF发病机制中心步骤是GFR降低。肾血流量降低，肾小管阻塞、肾小管原尿回漏或肾细胞损伤等均可造成GFR降低。本试验经过皮下注射1％HgCl2造成家兔急性肾小管性坏死。经过本试验学习复制急性中毒性肾衰动物模型；观察肾衰家兔普通状态、酚红排泄率、肌酐去除率等改变；观察急性肾衰时肾脏大致形态；依据试验指标，判断、分析急性肾衰发病机制及病理生理改变；对急性肾衰病因、发病机制和功效代谢改变加深了解。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第3页试验对象

家兔2—3kg。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第4页试验药品与器材

1％HgCl2、生理盐水、25％氨基甲酸乙酯、0．6％酚红、20％葡萄糖、10％NaOH、手术器械一套，注射器、试管、加样器、721分光光度计、水浴锅、离心机。

肾功能不全试验的实验报告专家讲座第5页试验步骤

复制肾功效衰竭模型：于试验前一天，取两只家兔，称重，一只皮下或肌肉注射1％HgCl2(o．8～1．0ml／kg)造成急性肾功效衰竭，为试验组兔；另一只皮下或肌肉注射等量生理盐水(1．0ml／kg)作为对照组兔。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第6页试验步骤观察：24h后，比较两组动物普通状态、活动情况与尿量。家兔称重，耳缘静脉注射25％氨基甲酸乙酯4．0ml／kg，待动物麻醉后，固定于兔台。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第7页角膜反射夹肢反射肾功能不全试验的实验报告专家讲座第8页试验步骤家兔心脏采血3~5ml置于一干燥管中（不抗凝），放置10min后，3000r/min离心15min，小心吸收血清置于另一干燥管中，备测血肌酐肾功能不全试验的实验报告专家讲座第9页试验步骤假如心脏采血失败，则颈总动脉采血颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈总动脉，在动脉下穿两根丝线，用一根丝线结扎动脉远心端，近心端用动脉夹夹闭，在结扎线下方动脉壁上剪一小斜口，然后向心脏方向插入动脉导管放血3ml备测血肌酐肾功能不全试验的实验报告专家讲座第10页试验步骤分离右侧颈外静脉，插管用于输液。输液速度一定要慢下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1．5cm处做切口，长约4cm，暴露膀胱，用注射器搜集2ml尿液于试管中，做尿肌酐检验。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第11页试验步骤在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离之。在近膀胱端结扎输尿管，稍等片刻，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口，向肾脏方向插入一细塑料管(塑料管事先用肝素冲洗或充满肝素)，结扎并固定，用于搜集尿液。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第12页试验步骤酚红排泄率测定：1)两组家兔分别耳缘静脉注射o．6％酚红溶液(1ml／kg)，接着从颈外静脉插管处注射20％葡萄糖溶液(30ml／kg)。搜集从开始注射酚红起15min或30min尿液。换算成单位时间尿量(ml／min)。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第13页试验步骤

将搜集尿液倒入500ml量筒内，加10％NaOHlOml，用自来水补充至500ml处，混匀后，取出适当量放入与比色管口径相同试管中与标准比色管比较，得出15min或30min内肾脏酚红排泄率。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第14页试验步骤肾脏酚红排泄率：是反应肾血流量与肾小管排泌功效指标。正常情况下从静脉注入酚红后15min或30min，肾脏酚红排泄率分别＞30%与＞45%。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第15页试验步骤血清和尿液肌酐含量测定——苦味酸沉定蛋白法原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐，使溶液呈色后进行比色测定；然后加醋酸，在酸性环境中，黄红色苦味酸肌酐被去除，非肌酐物质（假肌酐）呈色，二者比色之差为血及尿中肌酐。按表1、表2操作步骤测定血清及尿液肌酐。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第16页表1血清肌酐测定

单位（ml）标准管测定管空白管肌酐标准应用液（0.05mg/ml）0.20__血清_0.20_蒸馏水__0.20碱性苦味酸2.02.02.0肾功能不全试验的实验报告专家讲座第17页试验步骤混匀，37OC水浴30min，以510nm波长比色，空白管调零，读OD值，然后，各管加50%醋酸液两滴，放置6min后，在测OD’值。计算：[Cr]p(mg%)=OD测－OD’测/OD标－OD’标×0.01/0.2×100正常值:0.7～0.8mg%(1mg%=88.4mol/L)。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第18页表2尿肌酐测定

单位（ml）测定管标准管空白管尿液（原尿或1：50稀释）0.1__尿肌酐标准应用液（0.5mg/ml）_0.1_蒸馏水__0.1碱性苦味酸22212．5%NaoH0.50.50.5肾功能不全试验的实验报告专家讲座第19页试验步骤混匀，放10min后加蒸馏水6。0ml，摇匀，以530nm波长比色，空白管调零，读OD值。计算：[Cr]u(mg%)=OD测/OD标×0.05mg×100ml/0.1ml

肾功能不全试验的实验报告专家讲座第20页试验步骤尿肌酐/血肌酐意义：器质性肾衰时比值＜20；功效性肾衰时比值＞40。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第21页内生肌酐去除率(Ccr)：能较准确反应肾小球滤过率(GFR)

Ccr=[Cr]尿×尿量（ml/min）/[Cr]血为此，试验步骤搜集尿液必须采集有“统计单位时间尿量”尿液样品做尿肌酐[Cr]尿测定，才能与血肌酐[Cr]血比，计算出GFR。肌酐能自由从肾小球滤过，在肾小管中极少被重吸收，但有少许是由近曲小管分泌。内生肌酐在血浆中浓度相当低，近曲小管分泌肌酐量可忽略不计，所以Ccr与菊粉去除率相近，能够代表肾小球滤过率。肾功能不全试验的实验报告专家讲座第22页试验步骤肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏，称肾重量，计算肾体比，比较两组家兔肾脏外形，纵向剖开肾脏，观察皮髓