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文档简介

序言基因工程技术又称为重组DNA技术，指将一些特定基因或DNA片断，经过载体或其它伎俩送入受体细胞，使它们在受体细胞中增殖并表示一个遗传学操作。所以目标DNA片段取得是进行DNA重组前提。目的基因的获得第1页方法一：直接从细胞中提取、酶切目的基因的获得第2页特点：（1）、假如从基因组DNA获取目标基因

相对于目标基因长度，基因组DNA长度太大。（2）、从染色体以外遗传物质中取得目标基因是惯用做法目的基因的获得第3页方法二、化学合成法人工合成寡聚核苷酸技术：<60bp1.2元/bp在60bp与120bp之间6.8元/bp提供DNA合成服务企业：上海生工生物工程有限企业上海英俊生物科技有限企业上海华诺生物科技有限企业北京奥科生物技术有限责任企业等目的基因的获得第4页

特点：1、合成产物是单链DNA2、5’、3’末端均为羟基3、应用场所：真核生物基因在原核中表示；难以得到模板情况；目的基因的获得第5页取得双链方法：（1）、3’末端部分反向互补，混合后在DNA聚合酶作用下互为模板形成双链目的基因的获得第6页

（2）分段合成法OH，先用激酶处理，使磷酸化连接酶OH，先用激酶处理，使磷酸化目的基因的获得第7页

（3）、分段合成，结合PCR技术PCR目的基因的获得第8页目的基因的获得第9页

方法三、PCR技术（1）、直接从原核微生物细胞或质粒中扩增目标片段（2）、引入突变a、引物5’端引入b、定点突变，SOE技术c、易错PCR目的基因的获得第10页方法四、RT-PCR技术

针对真核生物基因不连续特点，利用mRNA为核苷酸信息资源，用逆转录---PCR法取得目标基因AAA…AAA3’5’T

T

T…T

T

TComplimentaryDNART：ReverseTranscriptase目的基因的获得第11页

Summary:1、细胞中提取；2、化学合成；3、PCR技术；4、RT-PCR目的基因的获得第12页

目的基因的获得第13页序言基因工程技术又称为重组DNA技术，指将一些特定基因或DNA片断，经过载体或其它伎俩送入受体细胞，使它们在受体细胞中增殖并表示一个遗传学操作。所以目标DNA片段取得是进行DNA重组前提。目的基因的获得第14页（一）DNA片段取得1、从基因所在生物体直接取得限制性内切酶（restrictionenzymes）2、人工合成DNA片段（DNA合成仪）3、PCR反应合成DNA4、mRNA反转录成cDNA5、用机械方法超声波、目的基因的获得第15页目的基因的获得第16页粘性末端、平整末端200各种限制性内切酶，切点各不相同目的基因的获得第17页（二）DNA片段和载体连接

——重组体DNA载体：细菌中质粒、温和噬菌体重组体DNA：载体DNA+引入DNA粘性末端平整末端连接酶目的基因的获得第18页目的基因的获得第19页目的基因的获得第20页目标基因表示目标基因在插入载体后，在其编

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