深圳市预防和控制人感染高致病性禽流感应急工作预案卫

深圳市防止和控制人感染高致病性禽流感应急工作预案(卫生部分)（2023年修订）目录1．总则1．1目的1．2编制依据1．3工作原则1．4合用范围2．组织管理与职责2．1各机构职责2．2医学专家委员会及各专家指导小组职责3．疫情分级和预警3．1一般疫情（=4\*ROMANIV级，蓝色预警）3．2较大疫情（=3\*ROMANIII级，黄色预警）3．3重大疫情（=2\*ROMANII级，橙色预警）3．4特别重大疫情（=1\*ROMANI级，红色预警）4．应急响应级别和启动4．1三级响应4．2二级响应4．3一级响应4．4扩大应急4．5应急结束5．后期处置5．1评估5．2善后解决5．3调查和总结5．4督导检查6．附则6．1制定与解释6．2实行时间

1．总则1．1目的为防止和控制人感染高致病性禽流感在深圳市的发生和流行，做好疫情监测、预警，减低人类受感染的风险，加强应对疫情的各项准备工作和应变措施，提高应急反映能力，及时有效地控制和消除疫情，保障市民身心健康和生命安全，维护社会稳定和经济发展，特制定本预案。1．2编制依据根据《中华人民共和国传染病防治法》、国务院《突发公共卫生事件应急条例》、《中华人民共和国传染病防治法实行办法》、《卫生部应对流感大流行准备计划与应急预案》、《深圳市人民政府突发公共事件总体应急预案》和《深圳市突发重特大传染病（含不明因素疾病）疫情应急预案》等法律法规及相关指导性文献制定本预案。1．3工作原则1．3．1防止为主、防治结合坚持防止为主的工作方针，积极组织贯彻应对疫情的各项准备工作。充足运用全市疫情监测报告网络的作用，加强疫情的平常监测和疫情报告工作，做到“早发现、早报告、早隔离、早治疗”，认真贯彻防止控制措施。1．3．2统一领导、属地管理各级人民政府统一领导本辖区的人感染高致病性禽流感工作；按照属地管理原则，实行市、区、街道办事处、社区工作站（社区居委会）四级负责制，共同做好人感染高致病性禽流感的防止控制工作。1．3．3常备不懈、快速反映加强防治专业队伍的培训和应急演练，储备充足的应急物资，保证信息渠道的畅通；发生人感染高致病性禽流感疫情后，可以迅速采用有效的防止控制和医疗救治措施，控制传染源，切断传播途径，保护易感人群，及时救治病人和疑似病人，控制和隔离密切接触者。1．3．4依法管理、依靠科学严格执行国家有关法律法规，对人感染高致病性禽流感的防止、疫情报告、控制和救治工作实行依法管理；对于违法行为，依法追究责任。贯彻依靠科学技术战胜人感染高致病性禽流感的方针，实行科学防治。积极研制和科学应用检测试剂、疫苗、药物等，切实加强临床治疗方案及流行病学研究，规范防控措施与操作流程，实现防治工作的科学化、规范化。1．4合用范围本预案合用于应对深圳市发生人感染高致病性禽流感疫情的准备工作及疫情发生和流行后的应急解决工作。2．组织管理与职责2．1各机构职责2．1．1深圳市卫生行政部门市卫生局是市卫生系统防止和控制人感染高致病性禽流感工作的主管单位，下属突发公共卫生事件应急解决办公室是平常办事机构，各区卫生局在本辖区范围内负责主管相关工作。负责组织制定医疗救治、防止控制等应急方案并组织实行；及时向上级部门报送疫情信息；向社会发布疫情信息；组织、协调、指挥卫生技术专家或应急队伍及时评估临床治疗病人的控制效果，检查各种防止措施，进一步完善各项防治方案；开展有关传染病防治科普知识的宣传等工作。根据专家委员会发布的预警和建议，市卫生局拟定启动相应级别应急响应并上报市政府及省卫生厅。2．1．2疾病防止控制机构负责建立人感染高致病性禽流感监测网络，监测、分析并报告疫情状况；核算疫情，提出疫点和疫区划定、启动、终止建议并参与实行消毒隔离等防治措施；承担病原体的实验室检测和技术支持；建立紧急疫情控制物资储备库，储备消杀药品、检测试剂、器械、防护用品等；对疫情防止控制措施效果进行评估，提出改善建议；建立心理应激救援工作机制；做好防止控制人员的技术培训；积极开展卫生宣传和健康教育。2．1．3医疗机构成立医院防病工作领导小组，制定院内工作流程；协同市医疗救护专家指导小组开展工作，负责病人的诊断、报告、治疗和收治管理工作，不断完善治疗方案；每日报告收治病人的动态情况；加强医疗机构内的消毒隔离工作和医护人员的个人防护，防止医源性感染，防止疾病传播；开展有关业务培训和指导；做好有关卫生宣传和健康教育工作。2．1．4卫生监督机构负责监督贯彻疫点、疫区防止控制措施，收治病人医疗机构消毒隔离和医务人员个人防护等措施；开展对医疗机构、食品生产经营单位、学校、托幼机构和公共场合等区域的消毒隔离、传染病报告工作的监督检查；对违反《中华人民共和国传染病防治法》和《突发公共卫生事件应急条例》的行为实行行政处罚；会同疾病防止控制机构做好卫生宣传教育工作。2．1．5健康教育机构搞好健康教育和健康促进，普及人感染高致病性禽流感和其他相关传染病的防治知识，提高群众卫生防病的意识和自我保健的能力。2．1．6社区健康服务中心协助疾病控制机构做好密切接触者的医学观测及病人出院后的随访工作；指导开展环境消毒和社区居民个人防护；开展居民健康教育；发现可疑病人要及时报告。2．1．7市医疗急救中心准备专用救护车和急救人员，负责病人转运。按市卫生局规定的责任区域调度指挥指定救护车运送患者。2．2医学专家委员会及各专家指导小组职责2．2．1深圳市医学专家委员会深圳市医学专家委员会（以下简称专家委员会）依照疫情分级标准，并结合疫情发展趋势、疫情波及范围和影响大小等情况进行综合性评估，发出疫情预警报告，并立即报告市卫生局。2．2．2医疗救护专家指导小组负责全市人感染高致病性禽流感病例的临床确诊、救治工作，指导各级医疗卫生单位人感染高致病性禽流感可疑病人的诊断工作。2．2．3流行病学调查技术指导小组负责全市人感染高致病性禽流感疫情报告、流行病学现场调查和疫点调查的技术支持。2．2．4消毒杀虫技术指导小组负责指导全市各级医疗卫生单位的消毒隔离技术支持和院内消毒效果强化检测，指导医务人员做好自身防护工作；负责疫点的随时和终末消毒工作以及相关技术支持。2．2．5病原学检测技术指导小组负责病原学标本的采集、运送、检测工作，以及各级医疗卫生、疾病控制机构实验室检测工作的技术征询和指导。3．疫情分级和预警按照人感染高致病性禽流感疫情发生和流行的性质、危害限度和波及范围，将疫情划分为一般（Ⅳ级）、较大（Ⅲ级）、重大（Ⅱ级）和特别重大（Ⅰ级），依次用蓝色、黄色、橙色和红色进行预警。3．1一般疫情（=4\*ROMANIV级，蓝色预警）我市周边国家、省或地区发生禽类高致病性禽流感疫情，我市范围内未发现疫情。3．2较大疫情（=3\*ROMANIII级，黄色预警）我市范围内出现疑似或确认禽类高致病性禽流感疫情，但没有发现人感染高致病性禽流感病例；或在我市周边国家、省或地区证实出现人感染高致病性禽流感病例，但无证据显示病毒容易在人与人之间传播。3．3重大疫情（=2\*ROMANII级，橙色预警）我市范围内出现散在的疑似或确诊人感染高致病性禽流感病例，但无证据显示病毒容易在人与人之间传播；或有证据拟定我市周边国家、省或地区人感染高致病性禽流感疫情的病毒具有在人与人之间传播的能力。3．4特别重大疫情（=1\*ROMANI级，红色预警）我市范围内证实人感染高致病性禽流感疫情的病毒具有在人与人之间传播的能力，有也许出现暴发或流行。4．应急响应级别和启动4．1三级响应经专家委员会评估，确认发生=4\*ROMANIV、=3\*ROMANIII级疫情，并发出预警后，市卫生局启动三级应急响应。4．1．1防控措施在坚持平常防控措施的基础上，进一步采用以下措施：加强疫情信息的收集和通报，与周边国家、省或地区和农业部门保持紧密联系，密切关注高致病性禽流感和人感染高致病性禽流感疫情动态。对动物疫点内的人员进行应急监测和应急接种。实行必要的隔离控制和医学观测措施，行分散隔离或集中隔离，由疫点所在地的区疾控中心和附近的社区卫生服务中心负责组织对实。市、区疾控中心开展流行病学调查，追访传染源，对疫点进行消毒。对密切接触者、防控工作人员和准备投入救治工作的医护人员提供应急接种。卫生监督部门加大对门（急）诊传染病报告制度执行情况的监督检查力度；会同有关部门对建筑工地和民工生活区、出租房屋、地下空间、宾馆、饭店、商场、文化娱乐及人口密集场合、交通路口等公共场合进行监督检查，加强通风换气，并采用必要的消毒措施。加强对民营医疗机构和个体门诊部、诊所的传染病报告、消毒隔离工作和个人防护措施的监督检查。全市保持正常工作、生产和生活秩序。4．1．1医疗救治各区以上卫生行政部门指定具有收治传染病病人能力的医院作为人感染高致病性禽流感疫情病人的定点救治医院。各医院成立医疗救治专家小组，根据市医疗救护专家指导小组提出的治疗方案和工作指引，做好应急的各项准备工作和演练。指定专职人员负责疫情报告工作，切实做好医院感染控制工作；加强门（急）诊空气流通和消毒防护工作；加强医务人员防护，防止医院交叉感染发生。随时准备接受病人。储备医疗救治、抗病毒和消毒药物，储备消毒器械和个人防护用品。4．2二级响应经专家委员会评估，确认发生=2\*ROMANII级疫情，并发出预警后，市卫生局启动二级应急响应。4．2．1防控措施在坚持三级响应的防控措施的基础上，进一步采用以下措施：对所有人感染高致病性禽流感疫情发生地点和密切接触人群实行隔离控制措施，对一般接触者实行医学观测。重点人群进行应急防止接种，优先考虑保护为社会提供基本服务的人群和老人、儿童等高危人群。民航、公路、铁路、长途客车站、重要交通路口增长检疫站（点），对进出深圳人员进行全面的防疫检查。公共场合、公共交通工具和人员集中的地区定期进行消毒。宾馆、饭店、各类文化娱乐场合等一旦发生疫情，立即停业，并配合市或区CDC做好消毒、流调等工作。中小学、高等院校发生疫情，校方须配合疾病防止控制机构开展贯彻各项防控措施，如需停课，报请上级教育行政部门批准。各街道、社区启动相应的二级应急预案。相关疫区范围内启动各自的工作网络，防止疫情扩散和蔓延。发生疫情的街、社区采用分组包片的办法，拟定联系对象，工作涵盖辖区全体居民。市民外出应采用必要的个人防护措施，并定期进行居所消毒，搞好楼道卫生；定期测量体温，如有异常立即向工作单位以及居住地的社区居委会报告，并到发热门诊就诊，也可以拨打120急救电话求助。发生疫情的单位和居住区的居民要配合疾病控制部门做好隔离控制工作。市政府派出督导组，对各项防治工作进行全面监督检查。市、区卫生监督所负责监督贯彻疫点、疫区防止控制措施，监督有关医疗机构贯彻消毒隔离和医务人员防护措施，检查人口密集公共场合疫情防控工作。除实行隔离控制的疫情地点及相关人群外，其他单位和居民均应正常工作、生产和生活。4．2．2医疗救治接到收治人感染高致病性禽流感疫情病例的指令，医疗机构应快速、有序地携带必须的医疗药械及个人防护用品等赶赴现场开展工作。医院应拟定救治方案，并将天天救治病例的情况向市医疗救护指导小组报告。及时补充医疗救治和消毒所需的各种物资。4．3一级响应经专家委员会评估，确认发生=1\*ROMANI级疫情，并发出预警后，市卫生局经市应急指挥中心报请市处置突发事件委员会后，启动一级应急响应。4．3．1防控措施在坚持二级响应防控措施基础上，进一步采用以下措施：各有关部门和单位、街道、社区居委会配合各级疾病控制中心做好对疫情地点和场合的隔离控制，做好后勤保障和群众的思想政治工作。市、区疾病控制中心按照有关规定，做好对人感染高致病性禽流感疫情的确诊及疑似病例、密切接触者的隔离控制工作。开展大范围的应急接种工作，免疫覆盖率力争全市常住人口的85%以上。在所有进深圳的交通路口设立检疫检查站（点）。在机场、火车站、省际长途汽车站和公路检查站设立联合检查组，实行防疫检查；所有进出深圳的乘客填写《健康登记卡》，并接受体温测量；发现有发热症状的乘客，要送留观站；对疑似病人由卫生部门及时送定点医院；对与疑似病人同舱或同一车厢的乘客由流行病学调查组进行追访、医学观测并隔离。对拒不接受体温测量或留观诊断并经劝阻无效者，由公安机关依法采用必要的强制措施。全市各宾馆、饭店、旅馆、招待所要严格执行入住旅客填写《健康登记卡》制度，并对驻店客人天天测量体温，发现可疑病人，及时向所在区疾病控制中心报告。各级各类学校天天坚持对学生测量体温，定期对教室、实验室、食堂和学生宿舍等公共场合进行消毒，取消一切人员过于集中的大课和大活动；实行停课的中小学必须天天坚持跟踪了解学生身体状况，教育学生在家学习和休息。学生未经批准不得离校；健康状况不佳的学生，家在农村地区、西部地区或疫区的学生，不予批准离校。对所有离校的大学生，学校要跟踪了解学生的健康状况，并纳入学校疫情监控和信息报告范围；离校后又返校的学生，必须进行隔离观测。建筑工地实行封闭式管理。对工地与住地分开的，要建立安全通道，上下班由班车接送。建立24小时运转的监控网络，对施工现场和工棚进行检查，对民工宿舍、食堂、厕所逐个定期、定点消毒。各用人单位不得擅自停工停业和遣散民工。各单位停止组织全国性的和跨省、跨地区的大型会议和活动，已安排的大型活动（涉及各类表演等）原则上取消或推迟关闭网吧、电子游戏厅、录像厅、剧场、影院、图书馆、博物馆、文化馆（站）、体育场（馆）等公益性文化体育设施，必须逐个贯彻通风、消毒等措施，并建立来访或参观者登记制度。全市各区和各级各类医疗机构所拥有的专用急救车辆，统一归市120急救中心指挥，市应急指挥部派出专人督导贯彻急救、转运工作，任何单位或个人不得以任何理由迟延或推诿。明确医院院长负总责制度，对于推诿、拒收、对病人不负责任的医院严厉追究责任。市和区120急救中心应与各医院密切配合，对于需要就诊和转诊的病人保证做到随叫随到，严防病人在自行求诊中导致传染。4．3．2医疗救治启用市第三人民医院。市第三人民医院在接到市处置突发事件委员会的命令后24小时内人员所有到位，做完各项准备工作，具有接受患者条件。支援医院（深圳铁路医院或指挥部临时决定的其他支援医院）在接到市处置突发事件委员会支援命令后24小时内完毕各项准备工作，按规定派出增援人员和设备，到达指定医院。根据市应急指挥中心的统一调配，划拨各项救治物资。4．4扩大应急当突发疫情难以控制或有扩大、发展趋势时，卫生系统应做好进一步的应对计划，重要有：扩大后备定点收治隔离病人医院名单的拟定；卫生系统各专业队伍的后备队组织；物资储备的调运与扩充；全市医务人员调遣、全市范围内现有医院及装备征用等，调整疫情控制工作方案。市处置突发事件委员会及时上报，请求党中央、国务院或省委、省政府支援和指挥。4．5应急结束本次疫情的末例治愈病人出院，通过一个最长潜伏期仍无新的病人发生，经专家委员会讨论，由深圳市卫生局报请深圳市处置突发事件委员会批准，解除封锁。本次应急响应即可结束。5．后期处置5．1评估应急响应结束后，市、区卫生行政部门组织对疫情解决情况进行初步评估。评估内容涉及疫情的危害、现场调查解决情况、疫苗和药物使用情况、病人救治情况、措施效果评价、应急解决过程中存在的问题和取得的经验及改善建议。评估报告上报市人民政府和省卫生厅。5．2调查和总结疾病控制机构对传染病疫情全过程进行回顾性流行病学调查和分析，总结经验教训，为指导此后的传染病防制工作提供指导依据。各级医疗机构对自身的工作进行总结和检讨，堵塞漏洞，防患于未然。各级有关卫生部门要作好有关总结工作，各区卫生行政部门在结束响应7日内将书面总结报市卫生行政部门。市卫生局将疫情工作报告报市应急指挥中心等有关部门。5．3督导检查市、区卫生行政部门定期派出督查组，对辖区的传染病防控工作进行督导、检查。卫生专业执法部门加强后期传染病的防疫和卫生执法监督。对监督检查中发现的防治措施不力、出现明显疏漏的，要按照有关规定作出严厉解决，并责令被检查单位限期整改。6．附则6．1制定与解释本预案有深圳市卫生局负责制定、定期修订和解释。6．2实行时间本预案自公布之日起开始实行，以前发布的相关预案同时废止。

附件：1、深圳市卫生系统人感染高致病性禽流感防治领导小组及各技术指导小组2、深圳市人感染高致病性禽流感疫点、疫区划分原则3、深圳市人感染高致病性禽流感临床诊断标准4、深圳市人感染高致病性禽流感推荐治疗方案5、深圳市人感染高致病性禽流感流行病学调查及疫情控制指引6、深圳市人感染高致病性禽流感消毒指引7、流感样标本的采集、运送、解决及流感病毒株的运送指引8、流感病毒实验室检查技术指引9、流感监测实验室生物安全规定

附件1：深圳市卫生系统人感染高致病性禽流感防治领导小组组长：江捍平市卫生局局长副组长：张丹市卫生局副局长许四虎市卫生局副局长成员：谢若斯市卫生局医政处处长陈广钦市卫生局办公室主任张英姬市卫生局卫生防疫处处长刘堃市卫生局应急办主任李林市卫生局医政处主任科员田永张市卫生局应急办主任科员张欣市卫生局应急办副主任科员连振辉罗湖区卫生局局长罗乐宣福田区卫生局局长杨志学南山区卫生局局长曾晓莲盐田区卫生局局长陈金喜宝安区卫生局局长段小贝龙岗区卫生局局长职责：负责指挥、协调和联系。

深圳市医学专家委员会深圳市医学专家委员会由医疗救护专家指导小组、流行病学调查技术指导小组和实验室检测指导小组的组长、副组长组成。

深圳市人感染高致病性禽流感流行病学调查技术指导小组组长：张英姬深圳市卫生局防疫处处长副组长：张顺祥深圳市疾控中心副主任成员：马汉武深圳市疾控中心流行病科主任主任医师谢旭深圳市疾控中心流行病科副主任主管医师王昕深圳市疾控中心流行病科医师陈戊申罗湖区疾控中心防疫科主任黄慈林福田区疾控中心疾控一科主任戴传文南山区疾控中心疾控办主任吴泰顺宝安区疾控中心防疫科主任张启文龙岗区疾控中心防疫科主任黎大林盐田区疾控中心防疫科主任职责：1、负责全市人禽流感疫情报告和现场调查及疫源地解决。2、负责人禽流感调查资料分析，提出防制对策并考评效果。3、负责全市人禽流感回顾性调查实行和资料分析。4、提供其它技术支持。

深圳市人感染高致病性禽流感病原学检测技术指导小组组长：庄志雄深圳市疾控中心主任副组长：刘小立深圳市疾控中心副主任成员：何建凡深圳市疾控中心微检科副主任扈庆华深圳市疾控中心微检科副主任技师何雅青深圳市疾控中心微检科副主任技师程小雯深圳市疾控中心微检科副主任技师李卓成市二医院副主任技师盖俊惠市二医院副主任技师何林市人民医院副主任技师罗贵有市人民医院副主任技师刘小平北大深圳医院副主任技师王德北大深圳医院主管技师单万水市东湖医院副主任技师职责：1、负责全市医疗卫生单位人禽流感病例样本检测、病原体分离培养和鉴定。2、负责全市医疗卫生单位人禽流感病例样本检测技术征询指导。3、提供其它相关技术支持。

深圳市人感染高致病性禽流感消毒技术指导小组组长：张顺祥深圳市疾控中心副主任副组长：张韶华深圳市疾控中心消杀科主任成员：朱子犁深圳市疾控中心消杀科主管技师梁焯南深圳市疾控中心消杀科副主任技师陈戊申罗湖区疾控中心防疫科主任黄慈林福田区疾控中心疾控一科主任戴传文南山区疾控中心疾控办主任吴泰顺宝安区疾控中心防疫科主任张启文龙岗区卫生防疫站防疫科主任黎大林盐田区卫生防疫站防疫科主任职责：1、负责全市医疗卫生单位医院内消毒效果强化监测；2、负责人禽流感病例疫源地随时和终末消毒；3、负责全市有关单位及人群消毒知识征询服务；4、提供其它相关技术支持。

深圳市人感染高致病性禽流感医疗救护专家指导小组组长：邱晨主任医师市人民医院副组长：杨大国主任医师市东湖医院吴诗品主任医师市人民医院袁本通主任医师市第二人民医院宋卫东副主任医师北大深圳医院高雪主任医师市中医院职责：负责医疗救护的诊断、治疗技术指导。联系人：谢若斯：2562099026115082李林：25539720

通讯录姓名办公电话移动电话江捍平25535987张丹25536965许四虎25618186陈广钦25537663谢若斯2562099026115082张英姬25503219刘堃25601138李林25539720田永张25602198张欣2550689681055787连振辉25666788罗乐宣82918322杨志学26542213曾晓莲25228511陈金喜27759245段小贝84802637庄志雄25531675刘小立25609549张顺祥25637978马汉武2563969581558865张韶华25632031何建凡25609534谢旭2563969527023019朱子犁25630445梁焯南25662031王昕2553612427023014扈庆华25623660何雅青25623660程小雯52627964陈戊申25611283黄慈林83339467戴传文26646793吴泰顺27757972张启文28932771黎大林25559875邱晨25533018-3121杨大国25601390吴诗品25533018-2515袁本通83366388-8217宋卫东83063849-6228高雪88359666-2436李卓成83252100盖俊惠83252100何林25533018-2589罗贵有25533018-2726刘小平83063849-5237王德83063849-5237单万水25509800-8205

附件2：深圳市人感染高致病性禽流感疫点、疫区划分原则一、疫点疫点是指发生人禽流感病人所在地点，一般是指患者生活、工作的场合。二、疫区疫区是根据疫情也许涉及的范围、疫点的地理位置、水系分布、交通情况、自然村落等来划定疫区，一般在农村以一个村或几个村、一个镇或毗邻镇，在城市以一个或几个居委或一个街道为范围划分为疫区。疫区由疫区所在辖区向市人民政府提出申请，经市人民政府批准后发布。

附件3：深圳市人感染高致病性禽流感临床诊断标准（一）诊断

根据流行病学接触史、临床表现及实验室检查结果，可作出人禽流感的诊断。流行病学接触史在诊断中具有重要意义。

1.

流行病学接触史

（1）

发病前1周内曾到过疫点，有感染禽流感病毒的也许。

（2）

与被感染的家禽及其分泌物、排泄物等有密切接触史者。

（3）

与禽流感患者有密切接触史者有患病的也许。

2.

诊断标准

（1）医学观测病例

有流行病学接触史，1周内出现流感样临床表现者。

与人禽流感患者有密切接触史，在1周内出现流感样临床表现者。

对于被诊断为医学观测病例者，医疗机构应及时报告本地疾病防止控制机构（按预警病例报告），并对其进行7天医学观测。

（2）疑似病例

有流行病学接触史和临床表现，患者呼吸道分泌物标本甲型流感病毒H亚型抗原检测阳性或核酸检测阳性者。

（3）确诊病例

有流行病学接触史和临床表现，从患者呼吸道分泌物标本中分离出特定病毒或采用RT-PCR法检测到禽流感H亚型病毒基因，且发病初期和恢复期双份血清抗禽流感病毒抗体滴度4倍或以上升高者。

（二）鉴别诊断

临床上应注意与流感、普通感冒、细菌性肺炎、传染性非典型肺炎（SARS）、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、衣原体肺炎、支原体肺炎、肺炎型流行性出血热等疾病进行鉴别诊断。鉴别诊断重要依靠病原学检查。

附件4：深圳市人感染高致病性禽流感推荐治疗方案（一）对疑似和确诊患者应进行隔离治疗。

（二）对症治疗

可应用解热药、缓解鼻粘膜充血药、止咳祛痰药等。儿童忌用阿司匹林或含阿司匹林以及其它水杨酸制剂的药物，避免引起儿童Reye综合征。

（三）抗病毒治疗

应在发病48小时内试用抗流感病毒药物。

1.

神经氨酸酶克制剂

奥司他韦（Oseltamivir

，达菲）为新型抗流感病毒药物，实验室研究表白对禽流感病毒H5N1

和H9N2有克制作用，成人剂量每日150mg,

儿童剂量每日3mg/kg，分2次口服，疗程5天。

2.

离子通道M2阻滞剂

金刚烷胺（Amantadine）和金刚乙胺（Rimantadine）

可克制禽流感病毒株的复制，初期应用也许有助于阻止病情发展、减轻病情、改善预后，但某些毒株也许对金刚烷胺和金刚乙胺有耐药性。金刚烷胺成人剂量每日100～200mg，儿童每日5mg/kg，分2次口服，疗程5天。肾功能受损者酌减剂量。治疗过程中应注意中枢神经系统和胃肠道副作用。老年患者及孕妇应慎用，哺乳期妇女、新生儿和1岁以下婴儿禁用。金刚乙胺的毒副作用相对较轻。

（四）中医药治疗

1、辨证论治

（1）轻证

毒犯肺胃

症状：发热，恶寒，咳嗽，少痰，咽痛，头痛，肌肉关节酸痛，部分患者伴有恶心，呕吐，腹泻，舌苔白、白腻或黄腻，脉浮滑数。

病机：疫毒之邪袭于肺胃，致肺胃蕴邪，肺失宣肃，胃肠失和，湿热壅滞。

治法：清热解毒，宣肺化湿，调和胃肠。

参考处方：

桑

叶

菊

花

炒杏仁

黄

连

连

翘

知

母

生石膏

藿

香

佩

兰

苍

术

姜半夏

芦

根

加减：口干者加沙参；

咳嗽甚者加枇杷叶、浙贝母；

苔腻甚者加草果；

恶心呕吐者加竹茹、苏叶；

腹泻者去知母，加马齿苋。

（2）重证

疫毒壅肺，内闭外脱

症状：高热，寒战，咳嗽，少痰难咯，胸痛，憋气喘促，口唇紫暗，或心悸，四末不温，冷汗淋漓，躁扰不安，甚则神昏谵语，舌暗红苔黄腻或灰腻，脉细数或脉沉细欲绝。

病机：疫毒之邪壅肺，热毒壅盛，故高热，寒战；肺失宣降，故喘息憋气；痰瘀闭肺，肺气欲绝，故呼吸极度困难，喘息气促，阳气欲脱，可见心悸、心慌，四末发冷，冷汗淋漓等。

治法：清肺解毒，扶正固脱。

参考处方：

炙麻黄

生石膏

炒杏仁

知

母

川贝母

鱼腥草

黄

芩

葶苈子

虎

杖

西洋参

山萸肉

炙甘草

加减：

高热、神志恍惚，甚则神昏谵语者上方送服安宫牛黄丸（或胶囊），也可选用清开灵、醒脑静、鱼腥草注射液。

肢冷、汗出淋漓者去川贝母，加桂枝、干姜、炮附子、煅龙骨、煅牡蛎，注射剂可选用生脉注射液、参麦注射液、参附注射液、黄芪注射液等。

口唇紫绀加三七、益母草、黄芪、当归尾；

苔黄腻甚者加藿香、佩兰、黄连。

2、中成药应用

应当辨证使用口服中成药或注射剂，可与中药汤剂配合应用。

（1）解表清热类：可选用柴银口服液、银黄颗粒等。

（2）清热解毒类：可选用双黄连口服液、清热解毒口服液（或颗粒）等。

（3）清热开窍类：可选用安宫牛黄丸（或胶囊）、清开灵口服液（或胶囊）等。

（4）清热祛湿类：可选用藿香正气丸（或胶囊）、葛根芩连微丸等。

以上4类均可选用清开灵注射剂、醒脑净注射液、鱼腥草注射剂、双黄连粉针剂等。

（5）扶正固脱类：可选用生脉注射液、参麦注射液、参附注射液、黄芪注射液等；也可配合使用生脉饮口服液、百令胶囊、金水宝胶囊等。

（五）加强支持治疗和防止并发症

注意休息、多饮水、增长营养，给易于消化的饮食。密切观测，监测并防止并发症。抗菌药物应在明确继发细菌感染时或有充足证据提醒继发细菌感染时使用。

（六）重症患者的治疗

重症患者或发生肺炎的患者应入院治疗，对出现呼吸功能障碍者给予吸氧及其他相应呼吸支持，发生其它并发症的患者应积极采用相应治疗。

附件5深圳市人感染高致病性禽流感流行病学调查及疫情解决指引

一、目的流行病学调查是传染病防止控制的关键措施和重要工作环节。做好人禽流感流行病学调核对于指导疫情的防止和控制至关重要，其重要目的是：1．核算诊断，查找传染源和传播途径；2．追踪和管理病例的密切接触者，防止疾病的进一步传播；3．掌握疫情的动态变化和影响因素，为疫情发展趋势的科学预测提供数据；4．监测和评价疫情防止和控制措施贯彻情况和效果，发现疫情控制工作的薄弱环节，为疫情控制工作的指挥、决策和实行提供信息支持，为制定和完善疫情控制策略和措施提供科学依据；5．为最终阐明疾病自然史、流行病学特性及规律提供研究线索，为此后应对类似突发不明因素疾病积累经验。二、工作内容1．病例的个案调查2．接触者追踪和管理3.疫情解决措施4．资料管理和运用三、工作程序和方法（一）病例的个案调查。1．病例的报告。各级各类医疗卫生机构要密切注意就诊人员，严格按照人禽流感的诊断标准的规定，发现病人或疑似病人后，以最快的方式向本地疾病防止控制机构报告疫情，同时填写《深圳市甲乙丙类传染病报告卡》，在备注栏应注明“人禽流感”。2．接到人禽流感病例（和疑似病例）报告后，报告病例的医疗机构所在地的区级疾病防止控制机构要在最短时间内派出流行病学调查人员，对报告病例进行流行病学个案调查。每个病例的调查原则上要由两人共同完毕。同时，派出消毒专业人员到病家和病人的其它滞留地点进行终末消毒。3．对病例进行个案调查时，尽也许由病人自己回答调查者所提的问题，收治病人的医疗机构和医护人员要积极配合，并如实提供病人相关诊疗资料。如病人因病情较重或已死亡，无法实行对病人的直接调查时，应通过其亲友、同事或其他知情人了解情况，完毕调查。4．个案调查采用统一的调查表（详见附件：深圳市流感病例个案调查表）。表格填写要完整，不得缺项。5．病例调查时，要认真、具体地了解和记录患者发病后到过的地方、乘坐过的交通工具和与其有过密切接触的人员的有关情况。6．疑似病例确诊、病人痊愈出院或死亡时，收治病人的医疗机构要将病人的诊断、转归情况报告所在地疾病防止控制机构。必要时疾病防止控制机构要进行随访调查。7．调查时要注意。（1）对病人及其密切接触者调查时，调查员要按照医务人员接触诊疗人禽流感病人个人防护的有关规定，做好个人防护。（2）调查时要尽量减少对临床诊疗活动的干扰。（二）对接触者的追踪和管理。1．接触者的追踪调查。疾病防止控制机构根据个案调查获得的信息，及时开展对病例接触者的追踪和调查。2．接触者的医学观测和隔离。（1）如发现密切接触者已出现人禽流感可疑症状时，应立即告知指定医疗机构派专用车辆将其接入指定医院进行隔离诊治，并进行病例个案调查。（2）疾病防止控制机构要根据调查获得的与病例接触的方式、频度、场合、场合等具体情况和已经明确的该疾病传播方式和传播特点的有关知识，对接触者受到感染的危险性进行分析和判断，对一般的接触者，要告知注意事项，如有不适，立即到医疗机构就诊；对密切接触者要隔离和医学观测两周（从接触之日算起），隔离期间应及时服用防止药物。医学观测期满仍未发现续发病例者，应对密切接触者解除医学观测。3．病例、接触者信息的通报。（1）如病例发病后有旅行史，要将病人乘坐过的交通工具的日期、航班、车次、车厢、船舱等具体情况报市级卫生行政部门，由市级卫生行政部门在媒体发布开展对有关班次交通工具乘客的医学观测和追踪调查的信息公告，以便及时发现疫情，迅速采用控制措施。（2）与各地卫生部门之间要加强信息沟通，市疾控中心及时将人禽流感和疑似病人患病期间乘坐交通工具的具体情况通报途经和到达各省市的卫生行政部门，共同开展疫情控制和追踪调查工作，同时要将有关情况报告市卫生局。（3）如发现输入病例，由疫情发现地的区级疾病控制部门将其有关流行病学资料报告市疾控中心，由市疾控中心告知病例来源地的相应机构，由来源地负责追踪和调查其密切接触者，并采用相应措施，发现符合诊断标准的，由到达地按规定报告疫情，并进行调查解决。（4）病例的密切接触者已离开疫情发现地，由疫情发现地的区级疾病控制部门报告市疾控中心，由市疾控中心直接告知其目的地的相应机构，由到达地负责追踪调查，并采用相应措施，发现符合诊断标准的，由到达地按规定报告疫情，并进行调查解决。（三）疫情解决措施1、隔离治疗病人：将病人置于独立的病房中耳语观测治疗；疑似病例与临床病例应分别隔离。2、病区环境消毒：（1）空气消毒；加强病房通气换气，可用紫外线照射，二氧化氯气溶胶喷雾、过氧乙酸熏蒸或其它消毒方法；（2）地面、物品表面：可用含氯消毒剂擦拭；（3）痰液等分泌物：用含氯消毒剂浸泡。3、医学观测：对密切接触者进行医学观测2周，有条件者可防止药物进行防止。4、个人防护：（1）考虑本病通过空气飞沫传播，凡与病人接触者需戴N95口罩。医护人员要注意及时更换新口罩（不超过4小时，最佳每次进病房前更换新口罩）。（2）注意手的清洁和消毒。（3）接触病人后电位酸化水漱口。（4）医务人员在工作及休息期间尽量减少在院内聚集。（5）高危人群可考虑药物防止：如服用金刚烷或金刚乙烷或达菲。5、医疗机构要做好院内感染综合防止控制工作。（四）资料的管理和运用。各级疾病防止控制机构要加强对流行病学资料的分析，及时向同级政府和卫生行政部门报告分析结果，以指导本地疫情控制工作。

附表：深圳市人感染高致病性禽流感个案调查表编号＿＿＿＿＿＿＿＿姓名：＿＿＿＿＿性别：＿＿年龄：＿＿＿门诊号：＿＿＿＿住院号：＿＿＿＿＿家庭住址：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿电话：＿＿＿＿＿＿＿＿＿工作单位：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿职业：＿＿＿＿＿＿＿＿＿发病日期：＿＿＿＿就诊日期：＿＿＿＿确诊日期：＿＿＿＿报告日期：＿＿＿＿＿住院日期：＿＿＿＿出院日期：＿＿＿＿确诊单位：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿临床情况：症状与体征：体温＿＿＿℃、畏寒、头痛、全身酸痛、乏力、胸痛、鼻塞、流鼻涕、流泪、咽喉痛、咳嗽、恶心、呕吐、咽部充血、眼结膜充血、扁桃体肿大、其它合并症＿＿＿＿＿＿＿＿＿就诊前是否服用过搞病毒药物：是、否临床诊断：＿＿＿＿＿＿＿＿＿实验室检查：白细胞总数：＿＿＿＿＿＿病毒分离结果：＿＿＿＿＿＿＿血清抗体：急性期＿＿＿＿＿＿＿，恢复期＿＿＿＿＿＿流行病学调查传染源情况病前三日内去过何处：地点＿＿＿＿＿＿＿时间＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿本地流感（或疑似）病人：有、无；与病人关系：＿＿＿＿＿＿＿＿＿接触限度：密切、一般；接触日期：＿＿＿＿＿＿＿＿＿疫源地卫生情况住宅情况：家庭、集体宿舍；其它：＿＿＿＿＿病人所住房间人数：＿＿＿床间距离：＿＿＿米、头与头距离：＿＿＿米、居住面积：＿＿＿＿m2/人，开窗情况：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，空调使用情况＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿传播途径情况空气飞沫：是、否与病人接触时面对面传播：是、否其它可疑因素：食具、茶具、玩具，其它用品：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿防疫措施隔离：有、无常通风换气：病人居室（是、否）；工作学习场合（是、否）防止接种：疫苗名称＿＿＿＿＿＿＿＿＿，接种日期＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿剂量与用法＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿消毒措施：贯彻、未贯彻密切接触者登记三日内与可疑传染源及密切接触者来往登记姓名年龄与患者关系发病日期接触日期地址（单位）诊断小结调查者：＿＿＿＿＿调查日期：＿＿＿年＿＿＿月＿＿＿日附件深圳市人感染高致病性禽流感病例报告表报告人：报告单位（盖章）： 报告日期：序号辖区姓名年龄性别职业现地址单位或学校户籍类型户口所在地发病日期住院日期发热咳嗽胸片或CT实验室检测结果同类病例接触史确诊日期收治单位诊断情况出院情况备注确诊病例疑似病例治愈出院排除出院自行出院注：现住址具体填到××区××镇××村（街道）及具体的门牌号码。学校要注明具体班级。户籍类型填写：户籍（常住）、暂住或流动。附件6：深圳市人感染高致病性禽流感消毒指引人禽流感是一种新型的从禽到人传播的病毒性传染病，并且有也许发生从人到人的传播。根据该病起病急，传染性较强的特点，为加强人禽流感的防止控制工作，特制定以下消毒措施。一、消毒药械（一）空气消毒药械：二氧化氯、过氧乙酸、紫外线灯、循环风紫外线消毒器、臭氧消毒机和静电吸附式空气消毒器以及超低容量喷雾器。（二）物体表面消毒药械：喷雾型快速消毒药水、二氧化氯、碘伏、含氯消毒剂（漂精粉、强力消洁净、次氯酸钠等）、戊二醛、普通喷雾器、抽真空床单位臭氧消毒器等。（三）手消毒药剂：手消毒液、碘伏。二、消毒方法（一）室内空气消毒1、保持工作环境与病房的空气流通，定期开门窗，自然通风换气，保持空气清新。2、做好空调送（排）气管道清洁与消毒工作，勤清洁空气过滤设施，安装电子式空气净化机。3、二氧化氯超低容量喷雾消毒：二氧化氯经加入活化剂后，静置15分钟，稀释至1000mg/L，用超低容量喷雾器进行喷雾消毒（用量：20-25ml/m3），消毒后，关闭门窗30分钟以上；也可采用过氧乙酸薰蒸（用量：15%过氧乙酸20ml/m3）作用2小时后，再开门窗通风；或采用过氧乙酸气溶胶（用量：2%过氧乙酸8ml/m3）喷雾消毒，作用1小时。注意消毒场合不得有人员停留。4、紫外线消毒：紫外线灯空气消毒应采用高强度低臭氧紫外线杀菌灯，室内按每10m2装30W紫外线灯一支，照射时间30分钟以上，使用时关闭门窗。注意消毒场合不得有人员停留。5、臭氧消毒：规定臭氧浓度≥20mg/m3，在RH≥70%条件下消毒30分钟以上，消毒时关闭门窗，人必须离开房间，消毒后待房间内闻不到臭氧气味时方可进入（大约在消毒后40分钟左右）。6、在有人情况下，可采用循环风紫外线空气消毒器或高压静电吸附式空气消毒器对室内空气进行消毒。（二）物体表面消毒可用二氧化氯、或喷雾型消毒剂、或含氯消毒剂对物体表面进行擦拭或喷洒消毒。如采用500mg/L的二氧化氯均匀喷洒或擦拭消毒，作用30分钟；用市售喷雾型快速消毒剂则按说明书操作使用。（三）地面和墙面消毒配制具有效氯为1000mg/L的含氯消毒剂，或500mg/L二氧化氯湿拖，或喷洒墙面与地面。（四）餐具消毒病人餐具应单独解决，个人专用。餐具消毒可用煮沸30分钟或用有效氯为500mg/L的含氯消毒剂或二氧化氯浓度为200mg/L的消毒剂溶液浸泡30分钟消毒。（五）病人衣物消毒可煮沸消毒或用品有效氯500mg/L的含氯消毒液浸泡30分钟以上。（六）病人痰液等分泌物、污染物品消毒病人排泄物、分泌物等可用有效氯含量为30000mg/L的含氯消毒液浸泡2-6小时；便器、浴盆的消毒可用有效氯含量为5000mg/L的含氯消毒液浸泡30-60分钟。（七）病人用品的消毒措施病人用过的枕头、棉被、床垫等可用抽真空床单位臭氧消毒器进行消毒。（八）运送病人的交通工具的消毒运载病人的交通工具（救护车等）用二氧化氯气溶胶喷雾，用品（担架床等）用含氯消毒剂擦拭。运送工具运送病人时需加强通风。司机和陪同人员须作好个人防护，戴N95口罩，穿防护服，戴一次性乳胶手套。（九）疫源地消毒实行人员需戴N95口罩、一次性乳胶手套、穿防护服、防水鞋套。

附件7：流感样标本的采集、运送、解决及流感病毒株的运送指引第一部分采集人群流感大流行期间市、区疾病防止控制中心对不明因素的聚集性发热，职业人群及人禽流感疑似病例，必须及时采样。第二部分采样准备采样箱准备：（1）用于采集咽拭子、鼻咽拭子、咽漱液的基本耗材涉及：HanK’采样液；压舌板；无菌棉拭子；50ml螺口塑料管；一次性无菌塑料杯。（2）用于采集血液样本的基本耗材涉及：医用（5ml和10ml）一次性注射器；10ml螺口塑料管；止血带；无菌棉拭子；2ml螺口塑料管；碘伏。（3）尸检组织冻存管：50ml螺口塑料管。（4）记号笔；签字笔；乳胶手套；黄色塑料袋；标本标签；可封性塑料袋；标本采集表格；带有冰袋的冰盒；橡皮筋。采样液配制：常用的采样液有以下五种：普通肉汤、PH7.4～7.6的Hank’s、Eagle’s、水解乳蛋白液或不加抗菌素的生理盐水（漱喉液）。为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加入抗菌素，加入庆大霉素，其终浓度为0.1mg/ml，和抗真菌药物，其终浓度为2ug/ml。加入抗菌素以后重新调节PH值为7.4，配制好以后，分装每个采样管4ml，-20℃冻存。（1）Hank’s液配制Nacl8gKcl0.4g水450mlNa2HPO40.06gKH2PO40.06g 葡萄糖1g水450ml1％酚红1.6ml加水定容1000ml，加压消毒30min，4Co保存。（2）Eagle’s溶液的配制将Eagle’s粉末9.4克溶于1000ml去离子水中。高压灭菌。厂家：GIBCO产品：MEM(Eagle’s)产品编号：11965－084（1000ml）液体（谷氨酰胺，NAHCO3等）（3）普通肉汤：小牛肉浸膏（牛肉粉）10克牛血清白蛋白2克蒸馏水加至400ml庆大霉素（100mg/ml）0.8ml多粘菌素B（250ug/ml）3.2ml配制：1）将牛肉粉（牛肉浸膏）溶解350ml蒸馏水后高压灭菌2）将牛血清白蛋白溶解于50ml蒸馏水，无菌过滤。3）庆大霉素（100mg/ml）、多粘菌素B，无菌水溶解。4）将溶解后的1、2、3、按量混合，分装试管,调PH7.2。（4）双抗溶液(1万单位/ml)的配制：将青霉素钠粉末(100万单位)4瓶、硫酸链霉素粉末(80万单位)5瓶溶于400ml无菌双蒸水中。（5）3％谷氨酰胺溶液的配制：将谷胺酰胺3克溶于100ml双蒸水中。过滤除菌。分装－20度保存。（6）1%酚红溶液酚红（苯酚红）1克1NNaOH不多于7ml去离子水至100ml1）酚红在乳钵内家少量1NNaOH研磨时期完全溶解，NaOH加的越少越好。2）用去离子水加至100ml3）8磅消毒30min，置4℃保存。第三部分采样方法(1)鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的拭子平行于上颚插入鼻孔，保持数秒，待拭子头吸取分泌物以后，缓慢转动推出。以另一拭子拭另侧鼻孔。将拭子头侵入采样液中，尾部弃去。(2)咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的拭子适度用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，应避免触及舌部。同样将拭子头侵入采样液中，尾部弃去。注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以提高分离率，减少工作量。(3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液5ml刷洗收集器3次。(4)漱口液：用10ml生理盐水漱喉，漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动5-10次。然后用平皿或烧杯收集洗液。(5)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。反复此过程洗两侧鼻孔。(6)血清：血清标本采集多用于流感暴发时的血清学核算诊断及人禽流感待查病例的诊断。血清标本采集应当涉及急性期和恢复期双份血清。急性期血样应尽早采集，可在采集病毒分离标本时同时采集，但不能晚于发病后7天。恢复期血样则在发病后2-4周采集。一般采集空腹血。单份血清不能用作诊断。取一根至少能装3ml以上，干净和灭过菌的血清采样管做好标记，并进行登记，登记的内容涉及：医院名称，患者姓名，性别，急性期或恢复期，采样日期。1）从患者手臂静脉血采2ml，放入准备好的上述血清采样管中。2）然后置室温数小时待血完全凝固。3）1500～2023rpm离心10分钟，收集血清于1.5ml无菌管中，做好标记。血清可置4℃存放一周，存放超过一周需置-20℃或以下保存。（7）尸检组织：病人死亡后应尽早进行解剖，采集肺、气管、肾、脾、肝、心脏、脑、血凝块和淋巴细胞等器官标本；每一采集部位分别使用不同消毒器械，避免交叉污染；每种组织应多部位取材，每部位应取20-50g，淋巴结2个，分别置于50ml无菌螺口塑料管中，尸解标本对于病原学研究非常重要，应尽量多采集。立即置于-70℃以下保存或冷藏送至有关实验室。第四部分标本的运送新鲜的临床采集标本应在4℃条件下24小时内运送至相应的流感监测网络实验室。未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存。标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置于-70℃或以下保存。临床标本采集管建议使用带螺口的塑料管。第五部分标本的解决临床采集标本送至实验室后，须经解决后再进行病毒分离接种。含聚丙烯纤维的拭子的采集标本，先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出。鼻腔或咽部洗液的标本，充足振荡标本管，将粘液打坏。置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5ml。上清液可直接接种或低温保存。注：如采样液中尚未加抗菌素，应在接种前补加，用量同上前，混匀后置4℃过夜或室温作用数小时后可接种。临床标本解决后，将原始标本分为3份，一份（40％）用于鸡胚接种，一份（30％）用于MDCK细胞接种，一份（30％）保存待复核用。对于病毒分离阳性的标本-70℃保存6个月，在收到国家流感中心或广东省CDC复核鉴定报告后，按照生物安全有关规定解决；病毒分离阴性的标本按生物安全的有关规定解决。第六部分流感病毒株的运送1.流感毒株的送检规定流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病毒，HA≥1：8；暴发疫情采样分离到的所有毒株；认真填写流感/人禽流感毒株送检单各项内容；所送检的毒株规定每份3ml，并且无细菌污染。2.寄送流感毒株标本的包装、运送（1）病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运送流感病毒标本；（2）将密闭后的病毒标本放入大小适合的塑料袋内密封；（3）直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填写在送检单内，送检单应单独放在防水的袋子里；（4）将装标本的密封袋放入专用运送箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具防水和缓冲能力的材料；异地运送可以采用邮寄或快递的方法。第七部分标本的接受送检的标本（毒株）送到实验室后，由专人在生物安全柜内打开标本的包装。记录收到日期、送检实验室名称、核对并记录送检标本（毒株）编号是否与送检单相同。收到毒株后，及时反馈分型鉴定结果。

附件8流感病毒实验室检查技术指引第一部分：病毒分离MDCK细胞培养技术（一）、生物安全级别和生物安全规定1．MDCK细胞培养实验室生物安全级别：生物安全一级或以上。2．实验室生物安全规定：（二）、细胞培养的所需材料：生长成片的MDCK细胞2．T-75细胞培养瓶,颈口有倾角。3．D-MEM培养液4．青、链霉素母液(10,000U/ml青霉素G；10,000µg/ml硫酸链霉素)，分装后保存于-20℃。5．HEPES缓冲液,1M母液。6．胎牛血清，40nm滤过。7．EDTA-胰酶(0.05%胰酶；0.53mMEDTA.4Na)，分装后保存于-20℃8．牛血清白蛋白组分V,7.5%溶液。9．1ml、10ml无菌移液管10．70％～75％的酒精建议：规定经常检查试剂使用的有效期（三）、培养基和试剂的准备含L-谷氨酸的完全型D-MEM培养液的准备（用于MDCK培养）500mlD-MEM液中加入：青、链霉素母液5ml(终浓度达:100U/ml青霉素and100µg/ml链霉素)；HEPES缓冲液12.5ml(终浓度:25mM)；7.5%牛血清白蛋白组分V12.5ml。细胞生长液胎牛血清5ml或小牛血清10ml加到95ml或90ml的完全型D-MEM液，使胎牛血清或小牛血清的终浓度分别为5%和10％。细胞维持液胎牛血清1ml或小牛血清2ml加到99ml或98ml的完全型D-MEM液，使胎牛血清或小牛血清的终浓度分别为1%和2％。细胞接种液：含终浓度为5ug/ml的胰酶的L-谷氨酸的完全型D-MEM培养液。MDCK细胞的培养程序这里以T-75细胞瓶单层培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。假如细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的浓度必须做相应的调整。用于细胞培养的培养基、EDTA－胰酶等，37℃回温后，用70％～75％酒精擦拭后放于生物安全柜内。弃培养液，加5ml预先37℃温浴的EDTA-胰酶。温和地摇动细胞瓶1分钟，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA-胰酶。再重新加入5ml预先37℃温浴的EDTA-胰酶反复上述环节。加1mlEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料表面分离（约5～10分钟）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。加入1ml牛血清灭活残余的胰酶。加9ml完全型D-MEM，轻轻上下移动移液管来分散细胞团。取10ml混合物加到90ml细胞生长液，该培养液含终浓度为5%的胎牛血清。（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）每个T-25细胞培养瓶加6ml(600,000细胞)悬液，剩余的细胞悬液可以加到T-75细胞瓶用于细胞传代。通常6ml细胞悬液数日可长成成片生长的细胞。于37℃培养箱里培养细胞，天天观测细胞状态。注：消化液除EDTA-胰酶外，也可以用0.25%胰酶与Versene按照1：7的比例配成消化液使用。每批胎牛血清均应进行血清测试，通过测试拟定血清的最佳使用浓度。此处提到的血清使用浓度只是一个参考浓度。（四）、细胞的冻存1．细胞冻存材料：1）成片的MDCK细胞：细胞生长良好存活率高，80％～90％成片。2）二甲基亚砜（DMSO）3)胎牛血清4）EDTA-胰酶(0.05%胰酶；0.53mMEDTA.4Na)，5）移液管：1ml,10ml2.细胞冻存环节冻存液的配置配方一：胎牛血清9ml加二甲基亚砜1ml配方二：L-谷氨酸的完全型D-MEM培养液8ml，胎牛血清1ml再加二甲基亚砜1ml。2)细胞消化,消化过程同细胞培养的消化。3）细胞消化后，加入配置好的细胞冻存液，混匀后分装到细胞冻存管内。细胞冻存浓度为1×1064）细胞冻存过程：4O℃2小时，-20℃2小时，-70℃2小时放入液氮长期保存。（五）、细胞的复苏：冻存细胞复苏原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶对细胞导致伤害，而导致细胞死亡。细胞活化后，需要数日或继续传代一至二代，其细胞生长或细胞特性表现才会恢复正常。1．材料：37℃恒温水浴箱细胞生长液3）T-25培养瓶，无菌移液管4）70％～75％的酒精2.细胞复苏环节：1）将细胞生长液放入37℃回温，回温后以70％～75％的酒精擦拭，放入生物安全柜（无菌的操作台）内。2）自液氮中取出细胞冻存管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程盖子容易松掉。3）立即放入37℃水浴中快速解冻，轻轻摇动使其在1分钟内所有融化，以70％～75％的酒精擦拭保存管外部，移入生物安全柜（无菌操作台）。4）取出1.0ml解冻的细胞悬液，缓慢加入有生长液的T-25颈口有倾角细胞培养瓶内，混合均匀，放入培养箱培养。5）次日，更换细胞生长液。（六）、质量控制在过量传代的情况下，MDCK细胞也许会失去其对呼吸道病毒的敏感性。因此实验室应保持低代次的细胞株在液氮中。为了保持该分离系统的敏感性，当细胞复苏后被连续传15～20代，达成40代以上时，在间隔期可以用已知滴度的阳性质控病毒来检查MDCK细胞系的敏感性。假如细胞的敏感性已经下降，即应复苏新的细胞株。所用细胞系应保证无支原体污染。（七）、MDCK细胞系的敏感性的检测选择已知滴度的阳性质控流感病毒，做10－1……10－5稀释，取0.5ml分别感染早代的细胞株和现有的细胞株。3～5天后收获病毒液，检测早代细胞株与现有细胞株培养的病毒液间是否由差别。如有明显差别，表白现有细胞株敏感性已经下降，应重新复苏新的细胞株。流感病毒的分离病毒分离是流感诊断的金标准，也是流感病原学监测的基础。目前，常用鸡胚和MDCK（狗肾细胞）分离培养流感病毒。近年来发现通过鸡胚所分离的流感病毒，其抗原性与原始标本有所不同，而通过MDCK细胞所分离的流感病毒，其抗原性与原始标本相似。此外由于“O”相毒株的重现，MDCK细胞对“O”相毒株的敏感性远高于鸡胚，所以MDCK细胞已成为流感病毒分离不可缺少的一种宿主系统。由于MDCK细胞属肿瘤细胞系，用该细胞分离的病毒不能用于疫苗生产。因此各实验室应同时采用鸡胚和MDCK两种方法分离病毒，而不应放弃鸡胚分离流感病毒的方法。（一）、实验室生物级别和生物安全规定1．流感病毒分离实验室生物安全级别：生物安全二级流感病毒分离操作必须在生物安全二级实验室的生物安全柜里进行。2．实验室生物安全规定应当遵守生物安全二级实验室的有关生物安全的规定（二）、流感病毒的细胞分离标准操作规程1.实验材料和培养基T-25细胞瓶已经75-90％成片的MDCK细胞。TPCK解决胰酶（牛胰腺来源Ⅷ型）或0.25%胰酶HEPES缓冲液,1M母液青、链霉素母液(10,000U/ml青霉素G；10,000µg/ml硫酸链霉素)细胞生长液细胞接种液解决好的临床样品0.5ml（终浓度为千单位4℃4小时或过夜）T-25培养瓶用于病毒培养。1ml无菌移液管10ml无菌移液管2.流感病毒细胞分离程序：所有有关流感病毒分离的操作都应在生物安全Ⅱ实验室中的生物安全柜里进行，必须遵守生物安全规定，严格执行标准操作规程和废弃物管理规定。进入生物安全Ⅱ实验室要遵循生物安全实验室的个人防护规定。（1）75～90％成片细胞的准备：用40倍镜观测细胞生长状态。选择处在对数生长期的MDCK细胞用于病毒的分离。轻轻倒出细胞生长液，用6mlHank's液分别清洗细胞3遍。（2）细胞培养瓶的接种用无菌的移液管将清洗细胞的Hank's液从细胞培养瓶中移出。用无菌的移液管吸取200µl临床样品置于细胞培养瓶中。37℃吸附1～2小时。吸附后清洗细胞后，加入6ml接种液于细胞培养瓶中。放置于33～350C培养箱培养。每日观测细胞病变情况。（细胞病变的特性是细胞肿胀圆化，细胞间隙增大。细胞核固缩或破裂。严重时细胞部分或所有脱落）（3）细胞培养物的收获当细胞病变为3+或4+时，即75～100%细胞出现病变时进行收获，收获之前将细胞冻融1～2次，以提高收获标本的病毒滴度。即使无细胞病变也应当于第7天收获。进行红细胞凝集实验(HA)，HA≥8的进行病毒的鉴定（具体方法参见流感病毒的鉴定技术中的HA实验和HI实验部分）。如没有红细胞凝集现象，继续传代1～2次。HA实验仍为阴性者，认为MDCK细胞病毒分离阴性，标本按生物安全有关规定进行解决。对于HA≤8的细胞分离物继续进行细胞传代，直至HA≥8时再进行病毒的鉴定。经连续传代后HA<8，可以用RT-PCR方法鉴定分型。3）HA≤8的细胞分离物的传代方法与标本相同。HA≥8进行细胞传代时应将病毒液进行10-1…10-3稀释后，再感染细胞。具体的稀释浓度与HA的滴度有关。一般滴度小于32时选择10-1倍稀释；滴度大于32以上时选择10-2或10-3稀释。（三）、流感病毒鸡胚分离标准操作规程1.实验材料：9～11日龄鸡胚青、链霉素母液(10,000U/ml青霉素G；10,000µg/ml硫酸链霉素)70%～75％酒精一次性注射器器照卵灯鸡蛋开孔蜡或胶水10ml试管和试管架10ml移液管和3ml滴管无菌镊子2.流感病毒鸡胚分离程序所有有关病毒分离的操作都应在生物安全Ⅱ实验室生物安全柜中进行，必须遵守生物安全规定，严格执行标准操作规程和废弃物管理规定。进入生物安全Ⅱ实验室规定遵循生物安全实验室的个人防护规定。（1）验卵用照卵灯检测鸡胚，标记出鸡胚的气室与尿囊的界线、胚胎的位置。假如鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发育不全、或表面有好多渗水孔，应弃掉。如何判断鸡胚状态血管：活胚血管清楚；死胚模糊，成淤血带或淤血块胎动：活胚有明显的自然运动，但是大于14天的胎动则不明显；死胚无胎动绒毛尿囊膜发育界线：密布血管的绒毛尿囊膜与鸡胚胎的另一面形成明显的界线（2）鸡胚接种将鸡胚的气室朝上放置在蛋盘上，标记每个鸡胚,通常每个样本接种2～3个鸡胚。用70%～75％酒精消毒鸡胚，在气室端钻孔，开10x6mm裂口。用装上7号针头2.5ml注射器吸1.5ml解决过的临床标本。从裂口中滴入无菌的液体石蜡，然后轻轻晃动鸡胚，让液体石蜡在鸡胚壳膜内层（脏层）铺开，此时在照卵灯下即可清楚的看到鸡胚胎的位置。将注射针头刺入胚胎的鄂下胸前，用针头轻轻拨动下颚及腿，当进入羊膜腔时，能看到鸡胚随着针头的拨动而动，即可注射200µl临床标本。将针头退出至½寸，将此外200µl临床标本注入鸡胚尿囊腔。用同一注射器和针头将同一标本依上法接种此外的两枚鸡胚。将针头弃于合适的生物安全装置中。用消毒过的医用胶布或透明胶纸封口。33～35℃温箱培养鸡胚2～3天。A型流感病毒培养2天，B型流感病毒培养3天，临床采样标本通常培养3天。鸡胚进行病毒分离培养时，天天检查鸡胚生长情况，24小时内死亡的鸡胚，认为是非特异死亡应弃去。提醒：禽流感需35℃或37℃培养，哺乳动物流感病毒35℃培养（禽流感在35℃时也会生长良好！）（3）鸡胚尿囊液和羊水的收获鸡胚在收获前应4℃过夜或－20℃至少放置2小时。标记15ml无菌塑料管与相应的鸡胚编号一致。用70%～75％酒精消毒鸡胚顶部。用无菌镊子撕破鸡胚气室蛋壳，推开鸡胚尿囊膜。用10ml吸管吸取鸡胚尿囊液置于相应的收集管中。用吸管刺破鸡胚羊膜，尽量吸取羊水放置于此外的管中。羊水较少时也可以吸少量的尿液冲洗羊膜腔与羊水合并。将鸡胚收获液3000rpm离心5分钟去除血液和细胞。进行红细胞凝集实验（具体方法参见流感病毒的鉴定技术中的HA实验部分），HA≥8的进行病毒的鉴定。如没有红细胞凝集现象的标本，应再进行鸡胚传代1次（对于“O”相的毒株，需要连续传代多次才干具有在鸡胚中生长的特性）。传代后HA滴度仍为阴性的标本，可以按有关生物安全规定进行解决。对于HA≤8的鸡胚分离物继续进行鸡胚传代，直至HA≥8时再进行病毒的鉴定。经连续传代后HA<8，可以用RT-PCR方法鉴定分型。5）对于HA≥8的病毒进行鸡胚病毒传代前应将病毒液进行10-1…10-3稀释。具体的稀释浓度与HA滴度的大小有关。一般滴度小于32时选择10-1稀释度接种；滴度大于32以上时选择10-2或10-3稀释度接种。（四）、注意事项1．不要在-20℃条件下保存病毒分离物，由于该温度条件下流感病毒极不稳定。2．流感病毒分离操作严格按照生物安全规程的规定。严禁在同一实验室，同一时间解决接种未知临床标本和已知标准病毒。严禁在同一实验室，同一时间解决接种采自不同动物的标本；动物标本（如猪、禽等）必须与人的标本分别保存。三、病毒鉴定红细胞凝集和红细胞凝集克制实验原理：流感病毒颗粒表面的血凝素蛋白（HA）具有能结合并辨认红细胞表面含唾液酸的糖蛋白或脂蛋白结构，许多哺乳动物和禽的红细胞表面均具有这两种成分。因此流感病毒能与其结合并辨认，产生凝集现象。当血清中有特异性抗体与病毒血凝素结合后，可以克制凝集现象出现。生物安全规定：生物安全规定及个人防护与流感病毒分离相同，并应遵守相应的生物安全规定。实验材料：标准流感病毒参考抗原和抗血清：红细胞悬液（鸡、豚鼠、人）：鸡红细胞悬液终浓度0.5%；豚鼠何人血球终浓度1%磷酸缓冲液(PBS)：0.01M，PH7.2多孔加样器、U型96孔微量板等3.实验流程:红细胞凝集实验(HA实验)稀释病毒加入配制好的红细胞充足混匀，置室温孵育30-60分钟观测记录结果及鉴定：血凝效价的鉴定：能引起红细胞完全凝集时病毒最高稀释度得到数。实验的质量控制加样量准确稀释病毒时吸取液体量准确加过红细胞后，混合均匀室温孵育时间准确，孵育时不要摇动5.实验环节：4个凝集单位的配制和检测稀释标准参照血清加入25ul4个血凝单位抗原，室温孵育15-30分钟每孔加入50ul红细胞悬液，充足摇匀。室温孵育30-60分钟观测记录结果：4个凝集单位的配制：读取红细胞凝集实验的结果计算所须的4个凝集单位的病毒用量用25ul检测4个凝集单位时，用凝集效价除以4；用50ul检测4个凝集单位时，用凝集效价除以8用红细胞凝集实验“回滴”，复核4个凝集单位复核时用25ul，前3孔红细胞完全凝集；用50ul，前4孔完全凝集。此时的抗原即为4个凝集单位血清灭活与稀释1份血清与4份RDE，37℃水浴16h～18h后，置56℃水浴50min常规解决后已成1：5，因此用维持液倍比稀释时，开始就为1：10，一般倍比稀释至1：1280。效价读取：血凝克制效价：完全克制血凝出现时血清的最高稀释度的倒数如：某待鉴定病毒对甲3标准血清在1：160时完全克制，1：320没有完全克制。此病毒对甲3的克制效价为160。流感病毒的型别鉴定：标准参照血清对待鉴定病毒的克制效价≥20才可以算为阳性。一个待鉴定病毒不能同时被两种或两种以上的标准血清克制待鉴定病毒标准参照血清有交叉克制，但与一种标准参照血清克制效价大于其他参照血清4倍以上时，可以鉴定为此性别的流感病毒质量控制使用的试剂可靠无误解决后的血清有无残余非特异性凝集素读取HA实验的结果是否对的4个血凝单位是否准确红细胞阴性对照待鉴定病毒保证没有被细菌污染稀