医疗器械无菌环境控制及微生物检测1

无菌医疗器械的环境控制

及微生物检测上海市食品药品监督管理局上海市食品药品包装材料测试所洁净检测室徐敏凤4/12/20231内容

YY0033的洁净室（区）要求

相关法规和GMP中关于洁净室（区）的内容比较

洁净室（区）的测试/维护及验证产品的微生物检测4/12/20232生产环境的污染与生产环境质量相关的微粒污染

微生物的污染途径通常有4种：A：自身污染－－由于患者或工作人员自身带菌而污染B：接触污染－－由于和非完全无菌的用具，器械和人的接触而污染C：空气污染－－由于空气中所含细菌的沉降、附着或被吸入而污染D：其他污染－－由于昆虫等其他因素而污染细菌还可能产生毒性物质、色素等代谢产物4/12/20233空气净化的主要过程空气净化主要的过程一是利用过滤器有效地控制送入室内的全部空气的洁净度，由于细菌都会依附在微粒上，微粒过滤同时也滤掉了细菌；二是利用合理的气流组织排除已经发生的污染，由送风口送入洁净空气，使室内产生的微粒和细菌被洁净空气稀释后强迫其由回风口进入系统的回风管路，在空调设备的混合段和从室外引入的经过过滤的新风混合，再经过进一步过滤后又进入室内，通过反复的循环就可以把污染控制在一个稳定的水平上，这个水平就应该低于相应的洁净度级别；三是通过调整，使不同级别洁净室室内的空气静压大于5帕（包括与非洁净区），与室外大气大于10帕，防止外界污染或交叉污染从门或各种缝隙部位侵入室内。4/12/20234空气净化系统的三级过滤示意图4/12/20235通过净化隔绝或排除污染合理设计建立的洁净厂房和有效的管理在无菌医疗器械生产中会体现出非常优越的性能，它通过对墙体、地板、屋顶、管线、水源、照明、通风和温度湿度等功能设计达到内部的洁净环境，通过空气的三级过滤使进入洁净室的空气是符合要求的，它能够通过人员和物料的净化程序隔绝或消除外来污染，通过气流组织、压差和换气次数等参数抑制微生物、微粒的污染，它能够排除由于光、味道、相对湿度等导致的任何质量损害，通过严格的工艺纪律达到避免交叉污染的目的。4/12/20236法规YY0033无菌医疗器具质量管理规范医疗器械管理条例其他相关规章4/12/20237生产环境、实施及布局厂址及厂区

厂址的选择：（5.1.1~5.1.2）

远离空气污染、水质污染、振动或噪声干扰的区域.4/12/20238生产环境、实施及布局厂址及厂区

厂区内的布局（5.1.3~5.1.5）厂区的道路和绿化、生活区和辅助区对生产区不产生污染为原则.4/12/20239生产环境、实施及布局生产厂房

一般生产区：（5.2.1）应设计合理，采光、通风良好，能满足生产需要.4/12/202310生产环境、实施及布局生产厂房

一般生产区：（5.2.1）应设计合理，采光、通风良好，能满足生产需要.4/12/202311生产环境、实施及布局洁净区 洁净度的级别和洁净度级别的设置（5.2.2.1)附录A;附录B4/12/202312生产环境、实施及布局无菌医疗器具产品生产环境洁净度级别设置指南（附录B）

洁净度设置的原则：

1、根据产品的技术要求，采用使污染降至最低限的技术；

2、根据工序的不同要求，采用不同的洁净度级别.可采用局部工作区与和全室空气净化相结合.4/12/202313生产环境、实施及布局洁净区的内表面（5.2.2.2）洁净区的密封性（5.2.2.3）洁净区门的设置（5.2.2.4/5）工艺流程布局（5.2.2.6）洁净区内水电设施（5.2.2.7）洁净区的照明（5.2.2.8）洁净区内的操作台要求（5.2.2.9）洁净区内使用的压缩空气的要求（5.2.2.10）水池、地漏等（5.2.2.11）4/12/202314生产环境、实施及布局人员净化 人员净化室（5.3.1） 净化的程序（5.3.2） 人员净化中的换鞋的要求（5.3.3） 人员的流向（5.3.4） 盥洗室和风淋房的设置（5.3.5/6） 洁净区人均面积的限制（5.3.7）4/12/202315生产环境、实施及布局物料净化 清洁措施（5.4.1） 物料的传递（5.4.2） 物料的包装（5.4.3）4/12/202316生产环境、实施及布局工艺布局 按产品形成过程顺向布置（5.5.1） 洁净室内的工艺装备和设施、产品的中间库、不同洁净级别之间的物料传递（5.5.2/3/4） 洁净室内的器具和洁具的管理（5.5.5/6）4/12/202317洁净区的周边环境及格局洁净室（区）周围环境应保持清洁整齐，没有露土地面。洁净厂房周围的道路面层，应选用整体性能好、发尘少的材料。洁净厂房周围应进行绿化，可铺植草坪，但不应种植对生产有害的植物，并不妨碍消防作业。洁净室（区）应布置在厂区内环境清洁，人流物流不穿越或少穿越的区域。洁净室（区）应为密闭厂房。生产企业可以根据产品的分类和用途确定相应洁净级别，并据此结合生产工艺进行净化厂房的设计和施工，以保证产品在符合规定的环境里生产。应考虑与产品的生产流程相匹配。以最短的时间，即最小被污染的原则来制订的。一般来说，生产流程是按照产品的生产流向顺序排列，不迂回交叉，不相互影响；应考虑影响洁净指标的因素，主要是厂房结构、装修材料、门窗、生产设备、布局、工艺、人员等等，应在满足使用要求的同时满足洁净要求。4/12/202318洁净室的基本要求HVAC系统工程、工艺布局和相关维护设施应遵循物料和产品发生任何污染的危险度降至最低的原则。当生产技术不能保证生产不受污染或不能有效排除污染时，该生产区域的洁净级别应在条件许可的前提下提高生产控制区应为密闭空间，内表面应平整光滑，无颗粒物脱落，墙面和地面能耐受清洗和消毒，以减少灰尘的积聚。应使用现行的设计和安装标准4/12/202319对洁净室（区）测试的规定换气次数（截面平均风速）温度相对湿度静压差悬浮粒子浮游菌沉降菌噪声照度4/12/202320各国法规的比较药品生产质量管理规范（1998年修订）兽药生产质量管理规范（2001年修订）CodeofGMPforMedicinalProducts(Draft,2003，FDA)AustralianCodeofGMPforMedicinalProducts(16August2002)CodeofGMPforMedicinalProducts(2003，EU)ISO14644CleanroomsandassociatedcontrolledenvironmentsISO14698Cleanroomsandassociatedcontrolledenvironments－BiocontaminationcontrolUSP27-1116MicrobiologicalEvaluationofCleanRoomsandOtherControlledEnvironmentsPDABethesda,Maryland,USA－

MicrobiologicalRiskAssessmentinPharmaceuticalCleanRoomsGB50073－2002洁净厂房设计规范JGJ71－90洁净室施工和验收规范等等4/12/202321以悬浮粒子为例与国际标准比较动态与静态分级数值对核心区的控制4/12/202322ISO/TC20914644.1Classificationnumber(N)0.10.20.30.515ISOclass1102ISOclass210024104ISOclass31000237102358ISOclass4100002370102035283ISOclass51000002370010200352083229ISOclass61000000237000102000352008320293ISOclass7352000832002930ISOclass8352000083200029300ISOclass93520000083200002930004/12/202323以浮游菌为例与国际标准比较EUGMP附录

1FDAGMPUSP27TGAGMPISO14644洁净度级别标准洁净度级别标准洁净度级别标准洁净度级别标准洁净度级别GradeA<1100<1M3.5≤3GradeA<1Class5GradeB≤101000≤7//GradeB≤10Class6GradeC≤10010000≤10M5.5≤20GradeC≤100Class7GradeD≤200100000≤100M6.5≤100GradeD≤200Class8/////////4/12/202324以沉降菌为例与国际标准比较EUGMP附录

1FDAGMPUSP27TGAGMPISO14644洁净度级别标准洁净度级别标准洁净度级别标准洁净度级别标准洁净度级别GradeA<1100<1M3.5/GradeA<1Class5GradeB≤51000≤3//GradeB≤5Class6GradeC≤5010000≤5M5.5/GradeC≤50Class7GradeD≤100100000≤50M6.5/GradeD≤100Class8/////////4/12/202325以换气次数、压差为例比较换气次数静压差关于测试状态4/12/202326洁净室（区）的分类举例首先应布局合理、质量可控其次应重视HVAC系统的功能协调(1)洁净送风机组：三级过滤、去湿增湿、空气调节等装置等。系统的新风量为总送风量的10～30％，一般人均新风占有量为40m3，干净机组送风量设计的换气次数应大于验收标准，机组功能是处理新风和回风；(2)送回风管路：管道、调节筏、防火阀，有的装有消声装置等，功能是输送较为洁净的空气；(3)洁净室的布局按最低污染原则，主要是明确生产工艺流程、明确人流物流和气流走向、预测若达到设计指标后的净化系统运转产生的后果，然后确定最终格局。4/12/202327值得关注的问题空调机组的设计和安装与生产需求不适应回风管道的设计和安装不合理厂房布局不适应工艺流程及其空气洁净度要求，例如，生产区作为人流或物流通道，交叉往返太多，盥洗室和生产区或贮存区直接往来相通。不同生产操作和相邻的厂房之间未能有效隔离，且有妨碍不同空气洁净度级别的洁净室（区）之间的人员和物料的出入，没有防止交叉污染的产生，特别室级别不同的窗户之间没有缓冲设施洁净室（区）与非洁净室（区）之间，没有人、物独立的缓冲设施，人流、物流走向也不合理10000级洁净室（区）使用的传输设备穿越了更低级别的区域4/12/202328洁净室（区）的测试方法测试人员测试仪器测试方法注意事项4/12/202329人员和物品的出入控制在洁净室（区）内，所需工作人员应满足最小数量，同时，洁净环境以外区域的工作人员也应尽可能监控。这在满足测试条件时尤其重要；不得在洁净室（区）内佩戴腕表和饰物、不得化妆；洁净工作服的选材、式样及穿戴方式应与生产操作的空气洁净度等级要求相适应所有的工作人员，包括与测试、维护有关的人员，应该定期接受与洁净室（区）生产有关的培训，其中包含涉及到的卫生知识和基本微生物知识洁净室（区）的测试人员应进行本专业的培训并获得相应资格后才能履行对洁净室（区）测试的职责4/12/202330注意事项在进行测试之前，应先确定待测区域、测试状态、仪器设备、测试规程、采样点位置、评价标准以及相关注意事项；建立环境监测程序，这样才能证实设备以及产品的接触环境是洁净和卫生的，并可以确定潜在的污染物是否能被控制到适当水平；所有仪器设备在未进入被测区域时，应保证其符合性、有效性和已完成清洁，或在相应的洁净室内准备和存放（用保护罩或其它适当地外罩保护仪器）；测试人员在测试时必须穿戴符合被测环境级别的洁净工作服；在测试时应避免肤屑、微生物或人体皮肤上的油造成潜在的污染；4/12/202331测试方法测试顺序温度,相对湿度的影响换气次数/风速的影响静压差的影响气流组织与自净时间对测试的影响测试数据的处理4/12/202332检测结果的评价检测数据经过整理后，可以与标准值比较后得出结论。检测时应做好记录，记录包含足够的信息。现场记录会发给大家。标题、记录的唯一性标识（如编号等）、工序或洁净室名称、检测日期、采用标准、采用仪器名称及编号、检测项目、检测数据及其计算、签名等4/12/202333维护及验证微生物的控制人员以及管理良好的规范以及执行Part2SupplierGuidePart1UserGuide4/12/202334人员的管理有能力，有资格，有经验数量充分组织机构完善、关键岗位人员配备合理生产，工程，维护，保洁等部门所有员工的培训：洁净厂房，卫生学，微生物学以及行为的基本培训制订健康规定，行为规范，服装规则控制人员到最小量，出入控制4/12/202335ＨＶＡＣ系统验证的测试项目气溶胶对ＨＥＰＡ的检漏气溶胶测定仪1.jpg自净时间气流流型动态的重现性核心区的控制微生物其他常规项目的测试验证评价回顾性验证4/12/202336HVAC系统的验证步骤常规的验证工作有以下几个步骤；1，设立验证的组织机构（验证小组等）；2，制定验证计划，确定所需的设备、系统、过程和时间表；3，制定验证方案，必须确定为达到预期目的的具有可操作性的验证方法；包括验证目的、适用范围、系统或设备、验证方法、可接受标准、实施步骤等4，按照验证方案实施；5，收集验证数据出具验证报告，包括验证结果、验证评价和建议，再验证周期等。4/12/202337微生物的基本知识定义：自然界中除动植物外，还存在一个庞杂，形态微小结构简单的生物类群，因个体微小，肉眼不能看到，需借光学显微镜或电子显微镜放大几百，几千，几万倍才能看到。此类微小的生物统称为微生物（microorganism）特点：形体小，结构简单，新陈代谢能力强，生长繁殖快，细胞未明显分化，易发生变异，种类多分布广。举例：细胞，真菌分布：土壤，空气，水，动植物人体表，腔道中等4/12/202338微生物的主要特性细菌和菌类名称

单体尺寸（μm）

菌类（含真菌） 3··80

枯草菌 5··10

水肿菌 5··10

肺炎杆菌 1.1··7

乳酸菌 1··7

白喉菌 1··6

大肠菌 1··5

结核菌 1.5··4

破伤风菌2··4

伤寒杆菌 1··3

普通化脓杆菌 0.7··1.3

白色（黄色）葡萄球菌 0.3··1.2

炭疽杆菌

0.46··0.564/12/202339微生物的基本知识对于细菌的生长来说所需的营养物质有：水，碳源（有机：糖类；无机：CO2），

氮源（N2，硝酸盐，铵盐，有机蛋白胨，氨基酸等），生长因子（维生素，氨基酸，嘌呤，嘧啶），无机盐（磷酸盐，硫酸盐，氯盐，

钾盐，钠盐，镁盐，钙盐等）4/12/202340微生物的基本知识生长条件：1.充足的营养2.合适的pH值，6.8-7.43.合适的温度，哺乳动物寄生的为35℃，其他腐生的为25℃

4.气体：氧气，二氧化碳4/12/202341微生物的基本知识培养方法：固体培养基：接种于平板固体培养基上，由单个繁殖形成肉眼可见的集团—菌落菌落特点的判定：大小，形状，光滑或粗糙，色泽（固体培养基上）；若于液体培养基中，有菌生长则呈混浊。4/12/202342微生物的基本知识细菌的生长：分为延迟期，对数生长期，稳定期，衰亡期。其中，对数生长期是细菌生长最旺盛的时期，很多药物选择在这一时期作用最有效，我们观察细菌生长也是在这一时期最明显。4/12/202343微生物的基本知识霉菌：丝状真菌的统称，有分支或不分支的菌丝与孢子构成，形成的菌落疏松呈绒毛状絮状。结构：细胞壁，细胞膜，细胞浆，细胞核。特点：对酸不敏感，pH2-9，

生长温度为22-2