临床血液学检验汇总15凝血因子

2023/4/121血栓与止血检验讲课人：金艳慧E-mail：JYH603@126.COM单位：检验医学院血液学检验教研室2023/4/122

凝血因子特性（常用）

丝氨酸蛋白酶：FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ

酶活性、FⅪ、FⅫ、PK

辅因子：FⅢ、FV、FⅧ、HMWK、Ca++

依赖VK：FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩBaSO4吸附血浆中有：FⅠ、FV、FⅧ、FⅪ、FⅫ、

FⅩⅢ、PK、HMWK

血清中有：FⅡ(少量)、FⅦ、FⅨ、FⅩ、FⅪ、

FⅫ、PK、HMWK2023/4/123

稳定:FⅠ、FⅡ、FⅦ、FⅩ、FⅪ、

FⅫ、FⅩⅢ、PK、HMWK

储存稳定性

不稳定:FV、FⅧ

内源:FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ、PK、HMWK

参与凝血途径共同:Fg、FⅡ、FV、FⅩ、FⅩⅢ

FⅣ3个途径都有参与凝血因子特性（常用）较稳定:FⅨ外源:TF、FⅦ2023/4/124FVII(a)血管损伤TFTF-VIIa-Ca++表面接触FⅫFⅫaFⅪFⅪaHMWKFⅨFⅨaFVIIIaFⅧCa++PLCa++FXaFVaCa++PLFXFⅡFⅡaFVFgFbFXIIIaCa++FⅩⅢ外源凝血系统内源凝血系统凝血机制图2023/4/125血管的基础理论、检验及疾病

凝血因子的基础理论、检验及疾病血小板的基础理论、检验及疾病

抗凝物质的基础理论、检验及疾病纤溶系统的基础理论、检验及疾病血栓形成的基础理论、检验及疾病第二、七、十章血栓与止血检验2023/4/126一.全血凝固时间测定-CT二.血浆凝血酶原时间测定—PT三.活化部分凝血活酶时间测定—APTT四.血浆凝血酶时间—TT五.血浆纤维蛋白原—FIB六.血浆组织因子测定七.血浆凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ促凝活性测定八.血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ促凝活性测定九.凝血因子ⅩⅢ试验十.凝血活化分子标志物检测十一.血浆蝰蛇毒时间—RVVT第七章血栓与止血疾病检验技术

第三节凝血因子检验（P197-204）2023/4/127一.全血凝固时间测定

（coagulationtime,CT）

血液离体→异物表面接触（如玻璃）→被激活，启动内源凝血系统，最后生成Fb使血液自然凝固所需的时间。

为内源凝血系统的筛选试验FXIICT原理2023/4/128取内径为8mm普通玻璃试管3支，

编号1、2、32.

3ml同时记时

去针头后每管

注入血液1ml，置37℃水浴箱中3.

3min后，每隔30s轻轻将第一管倾斜1次，

直至将试管倒置血液不流动为止依次观察第二管、第三管

以第三管的凝固为终点CT操作（普通试管法，4~12min）2023/4/1291.活化凝血时间（ACT）在待检全血中加入白陶土—脑磷脂悬液，启动内源凝血途径，引发血液凝固。

(FⅧ:C<45%)2.普通试管法(FⅧ:C＜2%)3.硅管法（SCT）：FⅧ:C＜45%4.毛细血管采血法：已淘汰。

CT方法学2023/4/12101.延长：内源凝血系统因子缺乏；血管性血友病；肝病、VK缺乏症、肝素；纤溶亢进、循环抗凝物增多。2.监测肝素抗凝治疗：体外循环时，ACT3.缩短：血栓前状态、血栓形成性疾病。CT临床意义2023/4/1211PT原理为外源凝血系统的筛选试验血浆37℃

Ca++足量组织凝血活酶

在受检血浆中加入足够量的组织凝血活酶（TF）浸出液和适量的钙离子后，观察血浆凝固所需的时间。二、血浆凝血酶原时间测定（prothrombintime,PT)2023/4/12122023/4/12131.PPP制备：

颠倒混匀，3000r/min离心10min。2.正常对照:

对照血浆

0.1ml

试管中（2-3管），

置37℃预温的试剂0.2ml，记时3.病人测定：用上述同样的方法测出病人PT加置37℃温育30sPT操作109mmol/L枸橼酸钠0.2ml的塑料试管中1.8ml2023/4/12141.INR的介绍：PT的国际单位

国际标准化比值(internationalnormalizeratio,INR)系统：用国际参比组织凝血活酶，标定所用组织凝血活酶（PT校正曲线斜率）的国际敏感指数(internationalsensitivityindex,ISI)。国际参比组织凝血活酶：用特定的技术制备成的人脑复合物试剂被命名为IRP67/40，它的ISI为1.0PT报告指标

组织凝血活酶由于制备的方法、来源、批号不同，对结果影响很大。为使PT结果具有可比性，WHO提出了INR系统。

2023/4/1215INR的介绍：

用标好ISI的组织凝血活酶待测标本的PT(s)对照血浆的PT(s)测定PTR（凝血酶原时间比值）PTR=

病人的PT正常对照的PTINR=PTRISIPT报告指标2023/4/1216

参考值:超过正常对照3秒有临床意义（不同试剂、不同实验室有别，均应做正常对照）PT参考值2023/4/12171.延长：外源凝血系统的因子先天性减少、缺乏，

抗凝物质增加（华法令、LAC、肝素、FDP）

纤溶亢进，严重肝病，维生素K缺乏症等。2.缩短：先天性Ⅴ增多症，口服避孕药、血栓前状态及血栓形成性疾病。3.监测口服抗凝剂量：首选指标，必须报告INR（以INR为1.5-2.5为佳，白种、黑种人适当增加）PT临床意义2023/4/1218（一）以白陶土激活FⅫ、FⅪ，以脑磷脂代替PF3，在钙离子参与下，观察PPP凝固所需的时间——为内源凝血系统的筛选试验。三、活化部分凝血活酶时间测定（activatedpartialthromboplastintime,APTT)2023/4/12191.PPP制备：颠倒混匀，3000r/min离心10min2.标本测定（3管）：当有纤维蛋白形成时就停止秒表，此段时间即为APTTAPTT操作109mmol/L枸橼酸钠0.2ml的塑料试管中1.8ml2023/4/1220

参考值：>正常对照10″或<5″有临床意义。不同激活剂、不同实验室有别，均应做正常对照。临床评价：

内源凝血系统敏感可靠的筛选试验。

凝血因子低于正常水平的15%-30%，即出现异常。APTT参考值2023/4/12211.延长：内源凝血系统因子缺乏、肝素、狼疮抗凝物。(FⅧ:C<25%)。2.缩短：血栓前状态、DIC等。3.监测肝素抗凝治疗的首选指标。

血浆肝素浓度为0.1-1.0IU/ml时有较高的敏感度：

应用肝素第１至２天内，应每４h～６h监测一次，

以后酌情决定每天的监测次数。

监测采血时间：静脉注射或皮下给药，应选择在二次用药的中点或下一次用药之前；

若系静脉持续滴注，则无时间限制。

治疗的安全有效范围：APTTR1.5~2.5倍。APTT临床意义2023/4/1222TT原理四、血浆凝血酶时间测定（thrombintime,TT)37℃条件下，在PPP中加入一定量的“标准化”凝血酶后，直接将Fg转变为Fb，使血浆发生凝固所需的时间。（反映血浆中纤维蛋白原的量和质有无异常）

1.PPP制备：

颠倒混匀，3000r/min离心10min2.正常对照:

对照血浆

0.2ml

试管中，

预温的TT试剂0.2ml，记时

3.病人测定：用上述同样的方法测出病人TT操作加置37℃温育3min109mmol/L枸橼酸钠0.2ml的塑料试管中1.8ml

1.TT延长：见于肝素增多或类肝素抗凝物质存在、

FDP增多及DIC、低(无)纤维蛋白原血症。

2.TT缩短：见于高纤维蛋白原血症。3.溶栓治疗监测：TTR控制在1.5~2.5TT临床意义

参考值:超过正常对照3秒有临床意义

不同试剂、不同实验室有别，均应做正常对照

2023/4/1225原理

Clauss法，即凝血酶法——NCCLS推荐血浆中加入足量凝血酶使其凝固，血浆凝固时间与Fg浓度呈负相关。

演算法又称PT衍生法（精密度高）

当PT反应完成时，全部Fg转变为Fb产生的浊度与Fg浓度成正比。五、血浆纤维蛋白原2023/4/1226

参考值：2g/L-4g/L应用评价1.Clauss法：肝素、FDP、D-D使结果偏低；2.演算法：黄疸、脂浊、溶血使结果偏高；3.Fg正常时，两种方法无差异。4.Fg减低时，演算法结果偏高。2023/4/1227减低：DIC、原发性纤溶症、重症肝炎、肝硬化等。增高：血栓前状态和血栓性疾病、大手术后、应急性反应、妊娠晚期、恶性肿瘤等。

临床意义溶栓及抗凝治疗时，监察凝血功能是否失效。预测血栓前状态，预防血栓形成。

DIC的诊断与治疗。2023/4/1228

组织因子抗原测定：ELISA法组织因子活性测定：发色底物法TF广泛存在于机体各种组织中(胎盘、脑及肺)TF进入血中时可激活外源凝血系统,启动内源凝血系统故TF可反映凝血系统的激活情况。

六、血浆组织因子测定2023/4/1229TF参考值TF:Ag>10pg/ml

TF:C81%~114%2023/4/1230TF临床意义增高：严重感染所致的内毒素血症、严重创伤、休克、

DIC、M3、急性呼吸窘迫综合征等。早期敏感显示凝血系统变化的指标。凝血因子在体内被活化的分子标志物2023/4/1231原理参考值临床意义注意事项七、血浆凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ促凝活性检测2023/4/1232受检血浆乏因子血浆PT试剂患者正常制备不同稀释度时间活度测定方法：一期法（最常用）、二期法和发色底物法。测定手段：手工法、自动血凝仪法（临床上）待测血浆不同稀释度的正常血浆

原理2023/4/1233FⅡ:C：97.7%±16.7%FⅤ:C：102.4%±30.9%FⅦ:C：103%±17.3%FⅩ:C：103.0%±19.0%参考值不同的实验室、不同的检测系统应建立自己的参考范围2023/4/1234临床意义

增高：血栓前状态和血栓性疾病。减低：先天性FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ缺乏症或获得性减低（如VK缺乏、肝病、口服抗凝药、DIC、抗凝物质等）。防止外科术中出血：FⅡ、FⅦ、FⅩ的活性应﹥60%，

FⅤ:C应﹥35%肝损评价指标：减少依次为FⅦ、FⅩ、F

Ⅱ、FⅤ。2023/4/1235注意事项1.标本采集、保存不当，可使因子活性假性增高。2.待测标本的凝固时间过长，应减少稀释倍数，使结果在线性范围内。3.待测PPP置低温冰箱中可保存2-3个月，但不能反复冻溶。2023/4/1236原理参考值临床意义注意事项(同血浆因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ促凝活性监测）八、血浆因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ促凝活性检测2023/4/1237受检血浆乏因子血浆APTT试剂患者正常制备不同稀释度时间活度原理待测血浆不同稀释度的正常血浆

待测血浆、不同稀释度的正常血浆分别与乏因子血浆混合,做APTT，得出标本的凝固时间及某因子标准曲线，根据标准曲线查出患者的因子活性。2023/4/1238FⅧ:C：103±25.7%FⅨ:C：98.1±30.4%FⅪ:C：100±18.4%FⅫ:C：92.4±20.7%参考值不同的实验室、不同的检测系统应建立自己的参考范围2023/4/1239临床意义增高：血栓前状态和血栓性疾病。减低：

FⅧ—血友病A、vWD(1型和3型)、FⅧ抗体、DIC等FⅨ—血友病B、肝病、VK缺乏、口服抗凝药、DIC等FⅪ—血友病C、肝病、DIC等FⅫ—先天性FⅫ缺乏症、肝病、DIC和某些血栓性疾病重症肝病：大部分凝血因子都减少，但FⅧ:C会增高，当肝病并发DIC：FⅧ:C﹤50%。2023/4/1240原理和方法参考值临床意义九、血浆因子ⅩⅢ定性试验2023/4/1241原理和方法FⅩⅢ：使SFMC形成不溶性纤维蛋白，稳固Fb凝块。SFMC可溶于5mol/L尿素或2%单氯（碘）醋酸。FⅩⅢ活性（定性）FⅩⅢ亚甲基抗原性（FⅩⅢA、FⅩⅢB）

受检血浆中加入钙溶液，使Fg转变为Fb凝块，将凝块置入5mol/L尿素溶液，若缺乏FⅩⅢ，则形成的可溶性Fb凝块易溶于尿素溶液中。2023/4/1242参考值24h内，Fb凝块不溶解。FⅩⅢ缺乏：

24h内(尤其2h内)，凝块完全溶解。

2023/4/1243临床意义1.先天性FⅩⅢ缺乏症2.获得性FⅩⅢ明显减低，

如肝病、SLE、DIC、

原纤、恶性淋巴瘤等。3.外伤及手术后自发性出血及出血时间延长，伤口愈合延迟。2023/4/12441.血浆凝血酶原片段1+22.血浆纤维蛋白肽A3.可溶性纤维蛋白单体复合物等十、凝血活化分子标志物检测

2023/4/1245凝血酶原在凝血酶原酶中的FⅩa作用下，在N端释放出由273个氨基酸组成的片段（即F1+2）。故F1+2

是凝血酶原活化的特异性检测指标。增高：DIC、急性心肌梗死、易栓症、DVT、PTE等肝素、口服华法林抗凝治疗：F1+2由高浓度→正常F1+2降低可使血栓形成危险性下降，但不增加出血并发症发生率。1.凝血酶原片段1+2（F1+2）检测(ELISA法)

2023/4/1246Fg在凝血酶作用下，释放出FPA后形成FM。测定FPA含量可反映血中凝血酶形成情况。FPA增高：血栓前状态和血栓性疾病；

早期DIC或疑难DIC的诊断有较高灵敏度；

原发性和继发性纤溶的鉴别；

抗凝治疗过程中的监测指标。

2.纤维蛋白肽A（FPA）检测（ELISA法）

2023/4/12473.可溶性纤维蛋白单体复合物（SFMC）检测Fg在凝血酶作用下，释放出FPA、FPB后形成FM。当凝血酶浓度低时，FM可自行聚合形成SFMC。检测血中SFMC含量可反映体内凝血酶的活性。方法：ELISA法、RIA法。2023/4/1248蝰蛇蛇毒是一种强烈的FⅩ激活剂，不需FⅦ参与，即可与FⅤ、FⅩ及PF3形成外源凝血活酶。PRP中有FⅤ、PF3、FⅡ、Fg，加入一定量蝰蛇蛇毒和CaCl2，测定凝固所需时间即为RVVT。为共同凝血途径的筛选试验。

十一、血浆蝰蛇毒时间（Russellvipervenomtime,RVVT)2023/4/124913~14S(比正常对照延长3秒以上，有临床意义)RVVT参考值2023/4/1250RVVT临床意义1.延长：凝血酶原、FⅤ、FⅩ和Fg缺乏，

血小板减少和PF3缺陷，

抗凝物质增加（肝素、FDP）等。2.缩短：血小板增多症、血栓前状态和血栓性疾病。3.与PT联合，用于鉴别FⅦ、FⅩ缺乏：RVVT正常，PT延长（FⅦ缺乏）；RVVT延长，PT延长（FⅩ缺乏）。2023/4/1251一、血友病二、肝病所致的凝血障碍三、依赖维生素K凝血因子缺乏症四、遗传性纤维蛋白原缺陷症五、遗传性因子ⅩⅢ缺乏症第十章出血与血栓性疾病应用

第二节常见出血性疾病及检验（P329-334）2023/4/12521.概述2.检验3.诊断一、血友病2023/4/1253

是一组遗传性因子Ⅷ、Ⅸ基因缺陷导致的激活凝血酶原酶的功能发生障碍所引起的出血性疾病。包括：血友病A---缺FⅧ（最常见）

血友病B---缺FⅨ

血友病C---缺FⅪ

A型和B型血友病为性连锁（伴性）隐性遗传

临床特点：自发性或轻微外伤后出血难止出血部位：负重的大关节腔内（血友病假瘤）

和负重的肌肉群内、内脏、颅内，皮肤瘀斑、粘膜出血也较常见。

创伤或手术出血更为严重。1.概述2023/4/12541.筛选试验：APTT延长（≤25％），PT正常2.凝血因子活性检测(确诊)：FⅧ:C、FⅨ:C、FⅪ:C≤1%（重型）、2%~5%（中型）6%~25%（轻型）、26%~45%（亚临床型）3.凝血因子抗原含量减低或正常4.排除试验：BT、vWF:Ag、vWFRco(排除vWD)，

APTT纠正试验（排除因子抑制物）5.携带者和产前诊断：基因分析、染色体6.基因分析：以确定基因突变的类型，为研究病因、发病机制和基因治疗奠定理论基础。2.检验2023/4/1255

凝血因子活性低于正常人活性的50%，并排除引起凝血因子活性减低的因素

（如vWD,凝血因子抑制物存在），就可诊断为血友病。3.诊断

治疗：输注新鲜血浆或浓缩FⅧ制剂治疗

>5%(不会自发出血)>60%(大手术)>35%(小手术)2023/4/12561.概述2.检验与诊断二、肝病所致的凝血障碍2023/4/1257

出血是肝脏疾病的常见症状，出血的严重程度与肝功能损害的严重程度呈正相关。（皮肤瘀斑、粘膜出血、月经量多，血尿呕血、便血等）出血的原因甚为复杂：

凝血因子和抗凝蛋白合成减少（大部分在肝合成）凝血因子和抗凝蛋白消耗增多（肝病常并发原纤或DIC）

循环抗凝物和FDP增多（类肝素、FDP具抗凝作用）

PLT减少及功能障碍(损伤骨髓、脾亢、IC→寿命、功能)1.概述2023/4/12582.检验与诊断肝病出血的病因分析：

FⅦ:C、FⅡ:C↓先于肝功能异常，早期诊断。

FIB、FⅤ:C↓反映肝病严重、肝硬化。异常FⅡ↑诊断原发性肝癌参考指标之一。

FⅧ:C、vWF越高，肝病越严重，

FⅧ:C↓提示并发DIC。

AT-Ⅲ<35%或PLG<20%,提示预后不良。肝病时常呈多个因子的联合变化，故需综合分析。2023/4/1259三、依赖维生素K凝血因子缺乏症1.遗传性依赖维生素K凝血因子缺乏症2.获得性依赖维生素K凝血因子缺乏症2023/4/1260

概述：基因缺陷导致血浆中FⅡ、FⅦ、FⅩ合成

障碍，使血浆中因子数量减少或分子结构

缺陷。常染色体隐性遗传。

临床：出血倾向严重不一，活性<10%更明显。1.遗传性依赖维生素K凝血因子缺乏症延长可被正常血浆或正常血清纠正确诊实验：相应凝血因子活性和抗原性检测

检验：TT、BT、PLT均正常，

PT延长，APTT正常—FⅦ缺陷

PT延长，APTT延长—FⅡ、FⅩ缺陷2023/4/1261

概述：

因VK缺乏使肝内FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ合成减少或结构异常，导致机体出现凝血障碍，表现为皮肤、粘膜、内脏的出血倾向。2.获得性依赖维生素K凝血因子缺乏症原因：①VK肠道内吸收不良(阻塞性黄疸、胆汁丧失、结肠

炎、肠瘘、肿瘤、长期口服石蜡油类润滑剂等)②肠道灭菌综合症(常服抗菌素，VK合成减少)③新生儿出血症(肠道不能合成VK，肝功能尚未完善)④口服抗凝剂(法华令--VK拮抗剂、毒鼠药)

2023/4/1262FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ活性降低（以FⅦ缺乏出现最早和最严重）筛检：TT、PLT正常，APTT和PT延长（因子活性小于30%~50%时）

确诊：测VK浓度(成人＜100ng/L、新生儿脐血＜50ng/L),

测FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ的活性均＜50%，

VK纠正：肌注VK后24~48h，PT明显缩短检验：2023/4/1263四、遗传性纤维蛋白原缺陷症1.先天性无/低纤维蛋白原血症（量异常）2.先天性异常纤维蛋白原血症（