微生物学第15章分枝杆菌

一类细长的杆菌，因有分枝生长的趋势而命名因染色时能抵抗酸酒精的脱色，故又称抗酸杆菌第15章分枝杆菌Mycobacterium1主要特点杆状，有分枝状生长细胞壁含有大量脂质（分枝菌酸）常用抗酸染色鉴定，呈抗酸染色阳性对人致病的主要分枝杆菌结核分枝杆菌：引起结核病麻风分枝杆菌：麻风病非典型分枝杆菌等：免疫低下者机会致病致病特点：慢性、伴有肉芽肿2抗酸染色由于细菌细胞壁中含大量脂质，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后又能抵抗强脱色剂盐酸酒精的脱色，故又称抗酸杆菌(acid-fastbacilli)抗酸染色法(acid-faststain)：以5％石炭酸复红加温染色，再用3％盐酸酒精脱色，然后用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色(+)，其他细菌和背景物质为蓝色(-)。34结核分枝杆菌Mycobacteriumtuberculosis俗称结核杆菌、引起人类结核病的病原菌致病菌主要为人型结核分枝杆菌牛型结核分枝杆菌结核病在旧中国流行严重，死亡率高，各种死因之首近年来由于艾滋病、吸毒、应用免疫抑制剂及耐药菌的增多，发病率又有上升的趋势56WHO:Globaltuberculosisreport2012.Geneva,WorldHealthOrganization2012.NewTBcasesworldwide:20069.24millions20079.27millions20099.40millions(1.70milliondeaths)20108.80millions(1.10milliondeaths)20118.70millions(1.40milliondeaths)-AnnuallyWHOreportNewTBcasesinChina:20071.30millions20101.00millions20111.00millions7WHO:Globaltuberculosisreport2012.Geneva,WorldHealthOrganization2012.8WHO:Globaltuberculosisreport2012.Geneva,WorldHealthOrganization2012.9WHO:Globaltuberculosisreport2012.Geneva,WorldHealthOrganization2012.10形态染色细长，人工培养基上可呈多型态抗酸染色阳性的杆菌，细胞壁脂质含量较高占干重的60%生物学特性11培养特点专性需氧营养要求高，常用罗氏培养基生长缓慢菌落形态固体：颗粒、结节、菜花状菌落液体：表面生长（菌膜）三特点生长现象12四抗抗干燥抗青霉素抗碱性染料抗酸碱四怕怕湿热怕紫外线怕抗结核药物怕酒精抵抗力13变异可发生多种变异形态结构变异：结核杆菌的L型毒力变异：卡介苗---牛结核杆菌的减毒株耐药性变异：耐异烟肼及其他抗结核药物的菌株日益增多14致病物质致病性脂质索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）磷脂（形成结核结节）硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）蜡质D（引起迟发性敏反应）蛋白质引起迟发性超敏反应多糖细胞壁表面，类似荚膜，抗吞噬作用15phosphatide1617所致疾病通过各种途径，主要呼吸道引起各种结核病传播与扩散体内细菌呼吸道消化道破损皮肤粘膜淋巴管血液支气管消化道扩散侵犯多种组织器官引起相应的结核病传染源痰涂片阳性者是主要传染源。18肺部感染：最多见，分原发感染和原发后感染外源性感染初次感染结核杆菌，原发性肺结核多见儿童，无免疫力，急性渗出性炎症，并向相邻组织和区域淋巴结扩散原发综合症：原发病灶、淋巴管炎、肺门淋巴结肿大感染3~6周，机体出现免疫力，同时也出现超敏反应原发感染多数可自愈，但机体可处于带菌状态致病特点感染特点：机体无免疫力，病灶局部反应轻，易扩散原发感染1920DiagramofaGranuloma21肺原发综合征22肺原发病灶肺门淋巴结结核23哑铃状结构24感染类型：90%以上原发感染形成纤维化或钙化，不治而愈，但多数病灶内仍有TB长期潜伏；约5%的感染者发展为活动型肺结核少数人血和淋巴液骨、关节、肾、脑膜等骨结核、关节结核、肾结核、脑膜结核等原发感染的结局25外源性或内源性（原发感染留下的）感染感染特点:机体有免疫力，病灶局部反应重，不易扩散再次感染结核杆菌，多为原发感染的再活化多见成人，有免疫力，呈慢性组织损伤，易发生结核结节、干酪样坏死、纤维化干酪样结节破溃，排入支气管，形成空洞结核杆菌从痰液排出，称开放性肺结核原发后感染26空洞干酪性肺炎27结核球282930ChestX-RayofPatientwithActivePulmonaryTuberculosis31

肺外感染带菌痰液被咽入消化道可引起肠结核、腹膜炎细菌进入血循环引起其他部位感染：脑、肾、骨、关节等结核免疫力极度低下者可引起全身粟粒性结核32关节结核33脊髓结核34肾结核3536文学作品中的结核病患者37

Bacteriacoughedupinsputum

InhalationofbacteriaBacteriareachlungs,entermacrophagesBacteriareproduceinmacrophagesLesionbeginstoform(caseousnecrosis)ActivatedmacrophagesImmunesuppressionReactivationLesionliquefiesDeadphagocytes,necrosisM.tuberculosisPhagocytes,Tcells,andBcellstryingtokillbacteriaDeathSpreadtobloodorgansStepsinthedevelopmentoftuberculosisBacteriaceasetogrow;lesioncalcifies38免疫性1、机体对结核的免疫为3、产生免疫同时也产生超敏反应2、结核的免疫属于传染免疫（有菌免疫）细胞免疫免疫与超敏反应平行注射结核杆菌于豚鼠皮下初次注射局部反应小，全身扩散，无免疫无超敏反应再次注射局部反应大，不扩散，有免疫有超敏反应郭霍现象39以前感染过或免疫豚鼠正常豚鼠24-48小时10-14天局部红肿、浅溃疡局部红肿、坏死溃疡

不扩散，易愈合

经久不愈有毒TB菌全身扩散皮下郭霍现象40应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起超敏反应（Ⅳ型）的一种试验旧结核菌素试验（OTTest）定义方法注射于前臂皮内材料旧结核菌素OT

结核杆菌加热处理后提取的粗制品结核菌素纯蛋白衍化物PPD

三氯醋酸沉淀后的结核杆菌蛋白41阳性反应（局部红肿硬节）4243

结果48~72小时后观察结果排除：感染初期、老年人、细胞免疫低下、严重病人阳性反应（局部红肿硬节）有迟发型超敏反应，有免疫力、有过感染阴性反应（无局部红肿硬节）无迟发型超敏反应，无免疫力、未感染过44

实际应用1、选择预防接种对象及接种后效果观察2、婴儿作为TB感染的辅助诊断3、肿瘤病人的细胞免疫测定4、流行病学调查 45机体抗结核免疫特点：综述之：传染、免疫、超敏反应共存46

标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）直接镜检：抗酸染色、金胺染色分离培养：培养基、时间（2~4周后见结果）动物试验：豚鼠等快速诊断：PCR等药敏试验：微生物学检查痰液等47浓缩集菌痰液、尿、粪等4%NaOH，3%HCl或6%H2SO4离心沉淀涂片染色分离培养（接种培养基）>105CFU/ml>102-3CFU/ml48防治原则早期、连用、适量、规律、全程卫生宣传、提高机体抵抗力（营养好，发病少，社会病）积极发现治疗痰液中细菌阳结核病人儿童接种BCGWHO确立的全球结核病控制策略我国《全国结核病防治规划(2001～2010年)》特异性预防一般性预防治疗原则结核防治策略49直接面视下的督导化疗

（DirectlyObservedTreatmentStrategy，DOTS）DOTS是一种策略，包括给病人提供最有效的药物，医生“送药到手，看服到口，服下再走”，病人坚持“定期随防，定期取药，定期查痰”，确保按规定服药，直至痊愈。DOTS联合使用一组特效抗结核药物，包括异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇或链霉素强化2个月，维持4－6个月，共6－8个月，这种标准化的方案称之为短程化疗。在DOTS策略下，病人在医务人员或经过培训的家属直接观察下服药，不需住院和隔离。505152GeographicaldistributionofHIV-positiveTBcases,200653TB&HIV:Doubletrouble542014年世界防治结核病日的口号是“关怀三百万弱势患者”挑战目前约有300万患者（相当于三分之一结核病患者）被卫生系统“遗漏”。在处理耐多药结核病（MDR-TB）方面进展缓慢：四分之三的耐多药结核病例未被检出，另外，2012年向世卫组织通报的大约1.6万例耐多药结核病例未获治疗。需要进一步向已知感染了艾滋病毒的结核病患者提供抗逆转录病毒疗法（ART），以落实世卫组织的建议，使感染艾滋病毒的所有结核病患者都能及时获得这一治疗。55非结核分枝杆菌(nontuberculosismycobacteria)结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌概念特性对酸、碱比较敏感对常用的抗结核菌药物较耐受生长温度不如结核分枝杆菌严格多存在于环境中、部分为条件致病菌可引起结核样病变而受到关注抗原与结核分枝杆菌有交叉57结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的区别

性状结核分枝杆菌非结核分枝杆菌菌落特征外形粗糙光滑或粗糙色泽乳酪色黄或橘色

毒力测定

索状因子中性红试验耐热过氧化氢酶试验豚鼠致病58所致疾病非结核分枝杆菌所致疾病堪萨斯分枝杆菌等肺炎、骨病瘰疠分枝杆菌等淋巴结炎溃疡分枝杆菌等皮肤病鸟分枝杆菌等播散性非结核分枝杆菌病鸟-胞内复合体分枝杆菌等艾滋病的继发感染59防治原则1、正确用药，对抗结核药物不敏感2、局限性病变结合外科手术3、加强对艾滋病患者的预防和治疗60目前全世界约有麻风病例1000万以上

麻风分枝杆菌（M.leprae）61

1873年挪威学者ArmauerHansen(1841-1912)首先从患者皮肤结节中发现。62

生物学特性培养体外人工培养至今未成功犰狳为敏感动物与TB基本相同标本检可见成团，束状于细胞中，称麻风细胞63

通过破损皮肤、粘膜呼吸道传播接触传播致病性麻风细菌主要侵犯神经、皮肤64分型瘤型结核样型界限型未定类——细胞免疫缺陷，巨噬细胞功能低下，主要侵犯皮肤、粘膜，传染性强麻风结